酉州乌羊和本地白山羊肌肉质构特性及脂肪酸组成的比较分析

本试验旨在研究酉州乌羊和本地白山羊肌肉质构特性及脂肪酸组成的差异。选取相同饲养条件下12月龄酉州乌羊和本地白山羊公羊各3只,屠宰后采集背最长肌样本分别进行肌肉质构、滋味、气味、脂肪酸组成测定。结果表明:1)酉州乌羊肌肉硬度和咀嚼性显著低于本地白山羊(P<0.05),黏附性、内聚性、弹性、胶黏性均无显著差异(P>0.05)。2)酉州乌羊肌肉丰富性响应值极显著高于本地白山羊(P<0.01),鲜味响应值显著高于本地白山羊(P<0.05),涩味响应值显著低于本地白山羊(P<0.05);酉州乌羊肌肉电子鼻W1W传感器响应值显著低于本地白山羊(P<0.05),其他传感器响应值在2组肌肉样品间无显著差异(P>0.05)。3)酉州乌羊肌肉C16∶0含量极显著低于本地白山羊(P<0.01),C18∶0、C18∶3n3和C20∶0含量显著低于本地白山羊(P<0.05),酉州乌羊肌肉C19∶1n9 t含量显著低于本地白山羊(P<0.05),C22∶1n9含量极显著高于本地白山羊(P<0.01),C20∶4n6含量极显著高于本地白山羊(P<0.01),C20∶3n6和C22∶4含量显著高于本地白山羊(P<0.05)。与本地白山羊相比,酉州乌羊肌肉的多不饱和脂肪酸/饱和脂肪酸(PUFA/SFA)和n-6/n-3 PUFA显著升高(P<0.05)。综上所述,与本地白山羊相比,酉州乌羊肌肉质构特性较好,滋味更优,营养价值更高,更加符合人类健康膳食要求。

山羊AGRP基因克隆及在黑色素细胞中的表达研究

为了研究刺鼠相关蛋白(agouti-related protein,AGRP)基因在动物皮肤黑色素沉积中的作用,试验以酉州乌羊为研究对象,利用TRIzol法提取皮肤组织RNA,通过RT-PCR扩增AGRP基因编码区(coding region,CDS)序列,采用生物信息学软件预测AGRP蛋白质结构和功能,构建系统进化树分析山羊与其他哺乳动物AGRP基因的保守性;体外培养黑色素细胞,利用实时荧光定量PCR检测AGRP基因在细胞增殖和分化阶段不同时间点的相对表达量。结果表明:酉州乌羊AGRP基因CDS序列长度为405 bp,编码135个氨基酸,编码蛋白质分子量为14871.36 u,理论等电点为5.70;AGRP蛋白二级结构由3个α-螺旋和1个β-折叠以αααβ的顺序组成;AGRP蛋白的氨基酸序列在不同物种间高度相似;在构建的系统进化树中,酉州乌羊与绵羊和山羊的亲缘关系最近,与小鼠和人的亲缘关系最远。AGRP基因在黑色素细胞增殖和分化阶段的不同时间点均有表达,随着细胞培养时间的延长,AGRP基因的相对表达量在增殖阶段先逐渐降低再升高,在分化阶段逐渐升高,与0小时比较均差异极显著(P<0.01)。说明AGRP基因在黑色素细胞中具有时空特异性,在黑色素沉积过程中发挥重要作用。

不同肤色山羊皮肤组织形态学及黑色素生成相关基因的表达分析

旨在阐明酉州乌羊皮肤发育的组织形态学特点以及黑色素高度沉积的可能分子机制,本研究选取渝东白山羊(白色皮肤)为对照,对100日龄酉州乌羊和渝东白山羊胎儿皮肤组织进行了组织形态学分析;并检测了成年酉州乌羊和渝东白山羊皮肤组织以及B16黑色素细胞增殖、分化阶段Pax3、Mitf与Tyr的表达变化。结果表明,在山羊胎儿皮肤快速发育阶段,两品种间皮肤黑色素沉积差异明显;Pax3与Tyr在酉州乌羊皮肤中表达量显著高于渝东白山羊(P<0.001),而Mitf则无明显差异(P>0.05);相对于细胞增殖阶段,B16细胞在分化时Pax3表达显著下调(P<0.001),Tyr的表达显著上调(P<0.01),而Mitf无明显差异(P>0.05)。研究结果提示,在皮肤发育分化的早期阶段,酉州乌羊与渝东白山羊黑色素细胞的迁移路线可能不同;Pax3下调与Tyr上调是色素细胞分化并生成黑色素的必要条件;酉州乌羊皮肤黑色素高度沉积与Pax3、Tyr的大量表达有关。

酉州乌羊、白山羊和波杂羊的屠宰性能及肉品质研究

随机选择6月龄酉州乌羊、本地白山羊和波杂羊公羊各3只,屠宰后进行屠宰性能和肉品质研究.结果表明:1酉州乌羊与本地白山羊生长性状、屠宰性能和肉品质指标均差异不具有统计学意义(p<0.05).2酉州乌羊的体高极显著低于波杂羊(p<0.01),管围显著短于波杂羊(p<0.05).3酉州乌羊的肉骨比高于其他群体,宰后质量、胴体长极显著低于波杂羊(p<0.01),胴体质量、骨质量、净肉质量显著低于波杂羊(p<0.05).4酉州乌羊的皮质量、皮厚、皮张面积、前蹄质量、后蹄质量、肝脏质量、脾脏质量、左肾质量、内脂质量、小肠净质量极显著低于波杂羊(p<0.01),心脏质量、脾脏质量、右肾质量、胃含内容物质量、小肠含内容物质量、小肠长度、大肠含内容物质量、大肠净质量显著低于波杂羊(p<0.05).5酉州乌羊与波杂羊的肉品质指标差异不具有统计学意义(p>0.05).

酉州乌羊不同季节超数排卵的试验研究

目的:探讨不同季节对酉州乌羊超数排卵的影响.方法:选择酉州乌羊作为供体,采用CIDR+PG+FSH法进行超数排卵处理,以快速获得酉州乌羊胚胎,统计胚胎回收数、可用胚数、退化胚数及可利用率.结果:5月、12月2次超排分别回收胚胎273枚、258枚,平均回收胚胎5月[(13.00±5.15)枚/只]略高于12月[(10.44±4.07)枚/只],但差异不具有统计学意义(p>0.05);可用胚胎分别为247枚、210枚,平均可用胚胎分别为5月[(11.76±5.73)枚/只]显著高于12月[(8.52±4.98)枚/只],差异具有统计学意义(p<0.05),胚胎可用率分别为90.48%和81.40%.结论:不同季节对酉州乌羊超数排卵的可用胚数量有一定影响.

酉州乌羊血液生化指标测定及其相关性分析

摘要：酉州乌羊于2009年通过国家畜禽遗传资源委员会羊专业委员会审定，正式成为国家级畜禽遗传资源，因其表现为“乌皮鸟肉”的特点，受到学术界的高度重视。本研究测定了酉州乌羊12项血液生化指标，旨在从生化特性方面研究该品种的种质特征。结果表明：在不同年龄之间，3～4岁酉州乌羊的血清中印和GLOB酶活性显著高于3岁以下各年龄阶段（P〈0．05），而0～1、1～2、2～3岁各年龄阶段之间差异不显著（胗0．05）。各项生化指标在成年羊性别间均无显著差异（P〉0．05）。ALT与AST、ALT与ALB、ALT与TC、AIT与HDL—C、ALT与CK、ALT与LDH、AST与CK、AST与LDH、ALP与TC、TP与GLOB、ALB与朋、ALB与TC、ALB与HDL—C、TG与HDL—C、TC与HDL—C、TC与LDL-C、HDL—C与LDL—C、CK与LDH之间存在着极显著正相关（氏0．01）；ALP与TC、TP与ALB、A／G与LDL-C之间存在着显著正相关（P〈0.05）；TP与A／G、GLOB与A／G之间存在着极显著负相关（P〈0．01）；GLOB与LDL-C之间存在着显著负相关（P〈0．05）。ALT与酉州乌羊成年母羊体重、体斜长之间存在显著负相关；TG与体斜长之间存在显著负相关；LDL—C与体斜长和胸围之间存在显著负相关。因此，可以用血液生化指标来评价酉州乌羊的健康和营养状况以及为酉州鸟羊的选育提供理论参考。

酉州乌羊皮肤黑色素含量和结构分析

为了分析酉州乌羊皮肤黑色素含量和结构,试验随机选择均匀度一致的6月龄酉州乌羊11只和板角山羊3只,采用酶解提取法测定皮肤黑色素含量,并通过红外光谱法对黑色素及其氧化降解物可溶性部位的红外光谱学性质进行研究。结果表明:酉州乌羊皮肤中黑色素含量为(0.218 5±0.007 5)%,板角山羊皮肤中黑色素含量为(0.023 7±0.001 2)%,二者差异极显著(P<0.01)。酉州乌羊皮肤中的黑色素具有天然黑色素的典型红外特征并且结构中存在苯环、烷基、羧基、羟基及氨基等官能团,初步判定为具有吲哚结构的真黑色素。

酉州乌羊精液品质评定及稀释液配方研究

为了保护和利用酉州乌羊种质资源,作者对酉州乌羊种公羊的精液品质进行了评定,并试验筛选适合酉州乌羊精液的优良稀释液配方。研究结果表明,酉州乌羊射精量为0.85 mL、活力为81.56%、精子畸形率为7.27%、顶体完整率为91.48%、精子密度为23.8亿/mL,均属正常范围,符合GB20557-2006山羊精液标准;Ⅲ号精液稀释液保存效果显著优于其它稀释液配方(P<0.05),其低温环境保存精液效果明显好于常温和高温。结论:保护场内酉州乌羊种公羊的精液品质较好,可以进行正常的配种和使用,稀释液Ⅲ号适用于精液保存。

色素关键基因在山羊皮肤和B16-F10细胞增殖、分化阶段的表达及相关性研究

【目的】为探讨山羊ASIP、EDN3、PAX3、TYR、TYRP1和DCT 6个黑色素相关基因在不同肤色成年山羊皮肤组织中的表达差异和在B16-F10细胞中的表达规律。【方法】以酉州乌羊和板角山羊皮肤组织、B16-F10增殖和分化细胞为试验材料,应用qRT-PCR检测了以上6个黑色素相关基因的表达并分析了基因间的相关性。【结果】皮肤组织检测结果显示,与板角山羊相比,酉州乌羊皮肤ASIP表达极显著下调(P<0.01),PAX3、TYR、TYRP1和DCT表达显著上调(P<0.05或P<0.01)。体外实验分析结果发现,在黑色素细胞增殖阶段ASIP、EDN3、TYRP1和DCT具有相似的表达模式,而R4X3与7TR表达模式相似,表明它们在色素细胞增殖过程中发挥不同的调节作用。在黑色素细胞分化阶段,ASIP与TYR、TYRP1和DCT具有相似的表达模式,且表达量显著相关,表明他们参与了黑色素细胞的分化及黑色素合成的调控。【结论】ASIP下调与PAX3、TYR、TYRP1、DCT上调与酉州乌羊皮肤黑色素异常沉积表型有密切关系。

酉州乌羊与本地其他山羊肉品质特性比较

为了比较酉州乌羊与本地其他山羊群体的肉品质特性,试验随机选择6月龄酉州乌羊、本地白山羊和波杂羊公羔羊各3只,屠宰后进行肌肉营养成分的测定。结果表明：粗蛋白、胆固醇、总脂肪和灰分在三个群体肌肉中的含量差异不显著（P〉0.05）;除胱氨酸和组氨酸之外的其他氨基酸均在酉州乌羊肌肉中的含量最高,其中蛋氨酸、亮氨酸和谷氨酸的含量显著高于本地白山羊（P〈0.05）;三个群体羊肉棕榈酸、硬脂酸和油酸的含量及其占肌内脂肪的相对含量差异不显著（P〉0.05）;镁元素在波杂羊和酉州乌羊肌肉中的含量显著高于本地白山羊（P〈0.05）,硒元素和锌元素在酉州乌羊肌肉中含量最高。说明酉州乌羊是高营养价值的肉用山羊品种。

MC1R基因在山羊皮肤组织及B16-F10细胞中的表达分析

为了探讨黑素皮质素受体1 (melanocortin 1 receptor, MC1R)基因在不同肤色成年山羊皮肤组织中的表达及其对黑色素细胞增殖和分化的影响,试验以成年酉州乌羊、板角山羊及小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10细胞)为研究材料,采用实时荧光定量PCR方法检测MC1R基因在山羊皮肤组织及B16-F10细胞增殖、分化过程中的表达情况。结果表明:MC1R基因在成年酉州乌羊皮肤组织中的相对表达量极显著高于板角山羊(P<0.01);在B16-F10细胞增殖阶段,MC1R基因相对表达量先上升后下降,在24, 72, 120小时时的相对表达量显著高于6, 168小时时(P<0.05);在B16-F10细胞分化阶段,MC1R基因在分化后期(72, 120, 168小时)的相对表达量显著高于前期(6, 24小时)(P<0.05)。说明MC1R基因对动物皮肤黑色素生成和沉积起重要作用,且对黑色素细胞的增殖和分化有一定促进作用。

湖北乌羊和酉州乌羊血液生化指标比较分析

为从生化特性方面研究该品种的种质特征,文章比较了湖北乌羊与酉州乌羊等其他山羊12项血液生化指标。结果表明,湖北乌羊的血清谷草转氨酶(AST)、胆固醇(TC)、球蛋白(GLOB)和低密度胆固醇(LDL-C)极显著高于其他山羊(P<0.01);过氧化氢脱氢酶(LDH)、白球比(A/G)以及高密度胆固醇(HDL-C)极显著低于其他山羊(P<0.01)。这些差异在一定程度上可能与湖北乌羊比其他山羊具有较强的抗应激能力和抗病性有关,部分差异可能还与其独特的乌质性状有关。

6月龄酉阳本地白山羊公羔的屠宰性能、肉质理化特性及肉品质特性研究

试验随机选择3只6月龄酉阳本地白山羊公羔,屠宰后进行屠宰性能、肉质理化特性以及肉品质特性方面的研究。结果显示,(1)活体重、胴体重、净肉重、屠宰率、净肉率、胴体产肉率、肉骨比和眼肌面积等屠宰性能分别是11.33 kg、4.36 kg、3.06kg、38.45%、26.93%、69.67%、2.65和9.02 cm2。(2)粗蛋白、总脂肪、灰分的含量和嫩度、熟肉率、p H值分别为18.17%、3.30%、0.81%和4.57 kg、53.41%、7.04。(3)本地白山羊肌肉中含有17种氨基酸和3种脂肪酸。实验结果表面,6月龄酉阳本地白山羊公羔的体型偏小、屠宰性能较好,含有丰富的氨基酸和脂肪酸,肉质的各项指标均在正常范围。

6月龄酉州乌羊公羔肌肉营养成分研究

试验随机选择了3只6月龄酉州乌羊的公羔羊,屠宰后采集肌肉样品,测定肌肉中的营养成分。结果表明:酉州乌羊的羔羊肉中EAA/TAA为40.67%,EAA/NEAA为68.58%,高于FAO/WHO的模式标准,显示酉州乌羊肉是优质蛋白来源;棕榈酸、硬脂酸和油酸的含量分别是0.22%、0.23%和0.36%;钙、镁、磷、锌、铁、铜、锰、硒的含量分别是67.30、180.67、1923.33、28.00、14.37、0.88、0.16、0.06mg/kg。酉州乌羊的羔羊肉中含有丰富的氨基酸、脂肪酸和矿物质元素等,具有丰富的营养价值。

酉州乌羊MC1R基因的克隆鉴定、生物信息学及多态性分析

MC1R是影响皮肤色素沉着中黑皮素系统的重要基因,通过信号分子的相互作用影响黑色素的生成。为探究酉州乌羊MC1R的生物学特性,本研究对酉州乌羊MC1R进行了分离鉴定、生物信息学分析。结果表明,酉州乌羊皮肤组织MC1R基因的CDS序列为954 bp,共编码317个氨基酸,酉州乌羊与各物种MC1R具有较高同源性。酉州乌羊MC1R编码蛋白的分子式是C_(1603)H_(2565)N_(411)O_(410)S_(22),其为疏水蛋白,有7个α-螺旋组成的跨膜结构域和3个保守功能结构域,MC1R氨基酸序列大部分都用于构成α-螺旋。此外,酉州乌羊MC1R基因c.676A>G突变,其编码的氨基酸由赖氨酸转变为谷氨酸,位于受光刺激和G蛋白配体结合的保守结构域上,氨基酸的异义替换还造成了酉州乌羊MC1R空间构象的差异。而对重庆市山羊群体多态性检测发现,山羊MC1R基因c.676A>G变异位点在重庆合川白山羊、巫溪白山羊、本地白山羊、酉州乌羊中共享,且c.676A>G位点的各基因型在皮肤白色和乌色山羊群体中的分布差异不显著(P>0.05)。本研究初步揭示酉州乌羊MC1R的序列特征和蛋白结构,为酉州乌羊MC1R影响皮肤色素沉积的分子机制研究提供了理论数据。

成年酉州乌羊与本地白山羊母羊肌肉营养成分对嫩度及风味的影响比较研究

为了对成年酉州乌羊的肌肉营养成分进行分析,评价其对肌肉嫩度和风味的影响,试验随机选择成年酉州乌羊和本地白山羊母羊各11只,屠宰后进行肉品质与肌肉营养成分的测定。结果表明：成年酉州乌羊母羊肌肉pH值显著高于本地白山羊（P〈0.05）,剪切力显著低于本地白山羊（P〈0.05）,其肌肉嫩度优于本地白山羊;酉州乌羊肌肉中必需氨基酸与总氨基酸的比值（EAA/TAA）、鲜味氨基酸与总氨基酸的比值（FAA/TAA）均高于40%,可提供优质的蛋白质肉类;酉州乌羊肌肉中的硒含量显著高于本地白山羊（P〈0.05）,肌肉中矿物质元素丰富。说明酉州乌羊肌肉中含有优质的蛋白质和丰富的矿物质元素,是具有优秀口感和高营养价值的肉用山羊品种,其肌肉营养成分对肉的嫩度和风味具有一定影响,值得进一步开发和研究。

AGRP 基因在山羊组织表达及其对黑色素生成的作用机制

为了阐明AGRP基因在山羊皮肤表达模式以及对黑色素生成的作用机制。本研究通过qRT-PCR法检测AGRP基因在3只酉州乌羊不同组织和3只板角山羊皮肤组织表达情况。同时,通过体外试验分析不同浓度外源性AGRP蛋白对黑色素细胞影响,利用EdU法检测细胞活力、环磷腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)试剂盒检测cAMP活性、并检测其对真黑色素含量和黑素生成相关基因黑素皮质素1型受体(melanocortin 1 receptor,MC 1R)、酪蛋白酶(tyrosinase,TYR)、酪蛋白酶相关蛋白酶1(tyrosinase related protein 1,TYRP 1)、多巴色素互变异构酶(dopachrome tautomerase,DCT)mRNA表达的影响。结果表明,AGRP基因在酉州乌羊组织均有表达,其中在垂体中表达最高,与其他组织相比差异显著(P<0.05);板角山羊与酉州乌羊皮肤中AGRP表达量差异极显著(P<0.05)。添加不同浓度AGRP蛋白对黑色素生成和黑色素细胞增殖影响不显著(P>0.05);随着AGRP浓度的升高,黑色素生成通路中cAMP活性显著下降(P<0.05);200 nmol·L^(-1) AGRP显著抑制MC1 R mRNA表达且促进TYR、TYRP1 mRNA表达(P<0.05);添加不同浓度外源性α-MSH均显著(P<0.05)挽救AGRP对黑色素细胞功能的影响。AGRP基因与酉州乌羊皮表型密切相关,确定AGRP在黑色素生成过程中的生物学功能为深入揭示AGRP对酉州乌羊皮肤黑色素沉积的作用机制奠定基础。

酉州乌羊皮肤组织ASIP基因的RACE克隆及分析

【目的】研究酉州乌羊皮肤组织ASIP基因及其编码蛋白的结构和功能。【方法】采用RACE技术对酉州乌羊皮肤组织进行扩增,获得了酉州乌羊ASIP基因的完整转录本,并结合生物信息学方法对其结构与功能进行分析。【结果】克隆后的片段通过拼接得到一个长787 bp的序列(P1),经鉴定为酉州乌羊ASIP基因的mRNA,包括209 bp的5′UTR区,402 bp的CDS区,以及176 bp的3′UTR区,预测编码133个氨基酸,为不稳定的亲水蛋白,预测到一个约22个氨基酸的信号肽。此外,酉州乌羊ASIP基因编码区发生异义替换c.496G>T,其编码的氨基酸由丙氨酸转变为缬氨酸(p.Ala96Val),该异义替换位于负责黑素皮质素受体1(MC1R)结合活性的Agouti家族保守结构域上,造成了酉州乌羊ASIP三级结构的改变。【结论】通过对酉州乌羊ASIP基因的序列特征和蛋白结构的初步分析,推测酉州乌羊皮肤组织中ASIP基因编码区发生的异义替换可能对酉州乌羊皮肤色素沉积具有影响。

miR-29a在酉州乌羊不同体组织中表达特征及其在B16细胞中的动态表达分析

为探究miR-29a在酉州乌羊不同体组织表达特征及在B16细胞中的表达特性,本研究采用RT-qPCR方法检测miR-29a在酉州乌羊不同体组织以及B16细胞不同发育时期的表达水平。结果表明,miR-29a在酉州乌羊各体组织均有表达,其中在大脑中的相对表达量最高,肺和皮肤中的相对表达量最低;同时在渝东白羊皮肤中的相对表达量是酉州乌羊皮肤的3.44倍,且差异极显著(P<0.01);在细胞增殖过程中,miR-29a相对表达量极显著增加(P<0.01);在分化初期miR-29a相对表达量较高,之后趋于稳定且差异不显著(P>0.05)。在加入分化培养基后,细胞的形态发生变化,黑色素分泌增多。综上所述,miR-29a在酉州乌羊各组织中广泛表达,miR-29a的相对表达量随着B16细胞的增殖而递增,但随着B16细胞的分化而降低,推测miR-29a与B16细胞的增殖与分化密切相关。本研究结果为明确miR-29a在酉州乌山羊各组织中的表达特性及其是否参与了黑色素细胞行为学的调控提供了一定的理论证据。

酉州乌羊生长曲线拟合分析研究

对酉州乌羊体重随月龄增长应用Logistic、Gompertz、Richards模型进行生长曲线拟合分析,建立公、母羊的拟合曲线方程及求出拐点体重、拐点月龄。结果表明:三种模型均能很好地拟合公、母羊生长规律,Logistic、Gompertz、Richards模型拟合公羊的拟合度(R2)分别为0.987、0.995、0.987,母羊拟合度(R2)0.968、0.9810.968,三种模型相互比较,Gompertz模型拟合效果最好。