YTHDF3靶向PD-L1对肝细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤干性的影响

目的:探究YTHDF3在肝癌中的表达水平和YTHDF3对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤干性的影响及可能涉及的靶点。方法:RT-PCR和Western blot检测临床肝癌组织和癌旁组织中YTHDF3的表达水平,使用正常肝细胞和肝癌细胞检测YTHDF3在mRNA和蛋白水平的表达。干扰YTHDF3在两组肝癌细胞中的表达,通过CCK-8、划痕实验、Transwell实验检测肝癌细胞活力、迁移和侵袭能力。干扰YTHDF3后观察肝癌细胞的成球能力和流式细胞术测定CD133干性标记的变化。最后,下调YTHDF3检测PD-L1在mRNA和蛋白水平的变化。结果:与癌旁组织相比,YTHDF3在肝癌组织中表达显著上调。与LO2细胞相比,两组肝癌细胞中YTHDF3的表达升高。干扰YTHDF3在肝癌细胞中的表达后,肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和成球能力减弱,CD133干性标记阳性率降低。下调YTHDF3在肝癌细胞中的表达,PD-L1的表达随之减少。结论:YTHDF3在肝癌中的高表达能够促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和肿瘤干性等特征,可能是作用于PD-L1来实现肝癌细胞免疫逃逸。

乳腺癌组织中整体m6A修饰水平与YTHDF3基因的表达

目的探讨乳腺癌组织中mRNA整体N6-甲基腺苷(m6A)修饰水平和甲基化阅读蛋白关键基因YTHDF3基因在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达。方法通过生物信息学对YTHDF3基因在乳腺癌组织与癌旁组织中的表达差异及乳腺癌患者生存率进行分析;收集乳腺外科手术切除的25例乳腺癌组织和20例癌旁组织(作为对照),利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)方法分析乳腺癌组织与癌旁组织组中mRNA的整体甲基化水平,通过实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot实验检测YTHDF3基因在乳腺癌组织和癌旁组织中的相对表达量。结果生物信息数据库结果显示,YTHDF3基因在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.001),与癌旁组织比较,YTHDF3基因只有在和81~100岁年龄段表达差异具有统计学意义(P<0.05),乳腺癌旁组织中YTHDF3基因的表达量明显低于Luminal分型的乳腺癌(P<0.01),利用受试者工作特征(ROC)曲线验证乳腺癌5年生存率和10年生存率曲线下面积(AUC)>0.56、0.60,高表达YTHDF3基因的乳腺癌患者比低表达的患者存活率低((P<0.05);LC-MS/MS结果显示,乳腺癌分子分型中Luminal型的mRNA的整体甲基化水平高于癌旁组织、差异有统计学意义(P<0.05),HER-2过表达型(HER-2 positive)与癌旁组织的整体甲基化水平差异无统计学意义(P>0.05);qPCR检测结果显示,YTHDF3基因的表达量在乳腺癌分子Luminal亚型、HER-2 positive亚型中均高于癌旁组织(P<0.05);Western blot结果显示,乳腺癌中YTHDF3蛋白水平高于癌旁组织(P<0.05)。结论乳腺癌组织中mRNA的甲基化水平高于癌旁组织,并且甲基化阅读蛋白关键基因YTHDF3基因在乳腺癌组织中表达上调。

m6A识别蛋白Ythdf3在精子发生中的作用研究

目的:通过基因敲除模型研究N6-甲基腺嘌呤(m6A)识别蛋白Ythdf3在小鼠精子发生过程的调控作用。方法:利用CRISPR/Cas9技术构建Ythdf3基因敲除小鼠,通过免疫荧光和HE染色对敲除小鼠进行表型分析,研究Ythdf3在调控小鼠精子发生过程中的作用。结果:免疫组化染色显示Ythdf3在精原及各级生精细胞核中均有表达;成功构建Ythdf3基因敲除小鼠模型;HE染色显示Ythdf3敲除小鼠睾丸各级生精时相及附睾尾精子与对照相比无明显异常。结论:在正常生理条件下,敲除Ythdf3不影响雄性小鼠精子发生。

非小细胞肺癌脑转移患者血清YTHDF3表达水平及其诊断价值

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)脑转移患者血清YTH结构域家族结合蛋白3(YTHDF3)的表达水平及其诊断价值。方法本研究为横断面研究。采用非随机抽样的方法,选取2022年6月至2023年6月就诊于空军军医大学唐都医院的NSCLC脑转移患者50例作为NSCLC脑转移组,NSCLCⅣ期非脑转移患者70例作为NSCLCⅣ期非脑转移组,NSCLC淋巴结转移患者60例作为NSCLC淋巴结转移组,体检健康者54名作为健康组,比较4组血清YTHDF3表达水平。收集并比较NSCLC脑转移组与NSCLCⅣ期非脑转移组血清传统肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、铁蛋白(FR)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、糖类抗原50(CA50)、鳞状细胞相关抗原(SCCA)、细胞角蛋白19片段(CK19)]水平。采用受试者操作特征(ROC)曲线评估血清YTHDF3与传统肿瘤标志物的NSCLC脑转移的诊断效能。结果NSCLC脑转移组男24例,女26例;年龄(59.8±10.1)岁,年龄范围为36~83岁;腺癌29例(58.0%),鳞癌21例(42.0%)。NSCLCⅣ期非脑转移组男41例,女29例;年龄(58.5±10.1)岁,年龄范围为29~78岁;腺癌37例(52.9%),鳞癌33例(47.1%)。NSCLC淋巴结转移组男34例,女26例;(59.4±8.5)岁,年龄范围为27~80岁。健康组男25例,女29例,年龄(58.2±16.6)岁,年龄范围为24~89岁。各组性别和年龄比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。NSCLC脑转移组与NSCLCⅣ期非脑转移组病理类型比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.31,P>0.05)。4组血清YTHDF3表达水平比较差异有统计学意义(H=48.71,P<0.001);NSCLC脑转移组血清YTHDF3水平高于NSCLCⅣ期非脑转移组、NSCLC淋巴结转移组和健康组,差异均有统计学意义[1073.18(743.47,1168.14)μg/L比754.98(602.30,861.49)μg/L、734.95(653.25,842.68)μg/L、665.94(564.00,728.10)μg/L,均P<0.05]。NSCLC脑转移组与NSCLCⅣ期非脑转移组血清NSE表达水平比较差异有统计学意义[(16.72±6.66)μg/L比(15.50±4.47)μg/L,t=5.49,P<0.05],其他血清传统肿瘤标志物(CEA、FR、CA50、SCCA、CK19)水平比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。ROC曲线显示,单独检测血清YTHDF3的曲线下面积为0.754,最佳截断值为894.32μg/L,敏感度为82.60%,特异度为56.50%;CEA、FR、NSE、CA50、SCCA、CK19的曲线下面积和特异度均较低。血清YTHDF3与NSE、CK19、CA50、SCCA联合检测的曲线下面积、敏感度、特异度分别为0.769、70.20%、69.60%。结论NSCLC脑转移患者血清YTHDF3表达水平升高。检测血清YTHDF3对NSCLC脑转移具有较好的诊断价值。