甘草甜素对喉癌Hep-2细胞侵袭和迁移的影响及机制研究

目的:探究甘草甜素(Gly)对喉癌Hep-2细胞侵袭和迁移的影响及作用机制。方法:体外培养正常人喉黏膜上皮细胞和喉癌Hep-2细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和蛋白印迹实验检测微小RNA-205-5p(miR-205-5p)、沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)mRNA和蛋白表达水平。将喉癌Hep-2细胞分为对照组、Gly低浓度组、Gly中浓度组、Gly高浓度组、Gly高浓度+空载质粒组、Gly高浓度+miR-205-5p抑制剂组。各组给予相应浓度的Gly干预或转染对应质粒培养48 h。Transwell实验和划痕实验分别检测各组Hep-2细胞侵袭和迁移能力。RT-qPCR法和蛋白印迹实验检测各组Hep-2细胞miR-205-5p、SIRT3 mRNA和蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验分析miR-205-5p与SIRT3的靶向关系。结果:与人喉黏膜上皮细胞比较,喉癌Hep-2细胞miR-205-5p水平降低,SIRT3 mRNA和蛋白水平升高(均P<0.05)。与对照组比较,Gly低、中、高浓度组穿膜细胞数和划痕愈合率、SIRT3 mRNA和蛋白水平依次降低,miR-205-5p水平依次升高(均P<0.05)。与Gly高浓度组和Gly高浓度+空载质粒组比较,Gly高浓度+miR-205-5p抑制剂组穿膜细胞数和划痕愈合率、SIRT3 mRNA和蛋白水平升高,miR-205-5p水平降低(均P<0.05)。miR-205-5p可靶向调控SIRT3表达。结论:Gly能够抑制Hep-2细胞侵袭和迁移,其机制可能与上调miR-205-5p表达,进而靶向下调SIRT3表达有关。

lncRNA CTBP1-AS2靶向miR-205-5p影响髓核细胞凋亡及炎症反应的分子机制研究

目的:探讨lncRNA CTBP1-AS2对IL-1β诱导的大鼠髓核细胞凋亡及炎症反应的影响及可能作用机制。方法:采用IL-1β诱导大鼠髓核细胞建立细胞损伤模型,随机分为:对照组、模型组、si-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组、miR-NC+模型组、miR-205-5p+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组;qRT-PCR检测lncRNA CTBP1-AS2、miR-205-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;双荧光素酶报告实验检测lncRNA CTBP1-AS2与miR-205-5p的靶向关系;Western blot检测Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组lncRNA CTBP1-AS2表达、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平及细胞凋亡率均明显升高,miR-205-5p表达降低(P<0.05);与si-NC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05);与miR-NC+模型组比较,miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleavedcaspase-3、Bax蛋白水平明显降低(P<0.05);lncRNA CTBP1-AS2可负调控miR-205-5p表达;与si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miRNC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白水平均明显升高(P<0.05)。结论:干扰lncRNA CTBP1-AS2表达可通过促进miR-205-5p表达抑制细胞凋亡及炎症反应,从而减轻IL-1β诱导的大鼠髓核细胞损伤。

LncRNA NEAT1作为ceRNA解除miR-205-5p对E2F1的靶向作用

目的探讨LncRNA NEAT1作为ceRNA解除miR-205-5p对E2F1的靶向作用。方法培养MH-S肺巨噬细胞,转染siCtrl、silncRNA NEAT1、silncRNA NEAT1+miR-205-5p抑制剂后,qRT-PCR检测E2F1的mRNA转录水平,WB检测E2F1的蛋白水平;并用RIP和RNA pull-down检测lncRNA NEAT1和miR-205-5p的结合情况。建立矽肺和对照小鼠模型,并尾静脉注射小鼠模型(siCtrl、silncRNA NEAT1、silncRNA NEAT1+miR-205-5p抑制剂),qRT-PCR检测E2F1的mRNA转录水平,WB检测E2F1的蛋白水平。结果与siCtrl组(1.15±0.10)比较,转染silncRNA NEAT1后E2F1表达(0.38±0.08)下调;与silncRNA NEAT1组比较,转染silncRNA NEAT1+miR-205-5p抑制剂后E2F1表达(0.58±0.10)上调,差异有统计学意义(P<0.01)。抗AGO2抗体可以将lncRNA NEAT1沉淀下来,表明lncRNA NEAT1可以与AGO2形成复合物,竞争性结合miR-205-5p。与NEAT1-Mut组(1.04±0.05)、NEAT1-NC组(0.99±0.04)比较,NEAT1处理后miR-205-5p(3.90±0.10)显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论LncRNA NEAT1可作为ceRNA,解除miR-205-5p对E2F1的靶向作用。

miR-205-5p抑制体外胃癌细胞系增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-205-5p靶向RAS致癌家族基因2B(RAP2B)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法RT-qPCR和Western blot检测胃癌细胞AGS、MGC803、MKN-28、SGC-7901和正常胃黏膜细胞GES-1中miR-205-5p和RAS致癌家族基因2B的表达。分别构建过表达miR-205-5p和抑制RAP2B表达的AGS细胞株,采用MTT法检测细胞活力;Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力;Western blot检测RAP2B、cyclin D1、MMP-2、MMP-9、GSK-3β和β-catenin蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-205-5p对RAP2B的靶向作用。结果与正常胃黏膜细胞相比,4种胃癌细胞中miR-205-5p的表达显著降低,RAP2B的表达显著升高(P<0.05)。过表达miR-205-5p或抑制RAP2B表达均可显著抑制AGS细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达(P<0.05)。miR-205-5p可负性调控RAP2B的表达。结论miR-205-5p通过靶向RAP2B抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

胶质瘤组织中miR-205-5p的表达及其对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨miR-205-5p在胶质瘤中的表达以及对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的调控及可能的作用机制。方法收集2018年6月至2019年12月于郴州市第一人民医院诊治的58例新发神经胶质瘤患者的胶质瘤组织和癌旁组织标本。将miR-205-5p mimic转染至U251和T98G细胞,构建过表达细胞模型。采用RT-qPCR检测胶质瘤组织及细胞模型中miR-205-5p的表达水平并分析其表达水平与患者临床病理特征的关系,CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕实验和Transwell小室实验分别检测胶质瘤细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭情况,Western blot检测过表达miR-205-5p对Runt相关因子2(runt-related gene 2,Runx2)蛋白表达水平的影响;用双荧光素酶报告基因实验检测miR-205-5p与Runx2的靶向关系。结果miR-205-5p在胶质瘤组织和胶质瘤细胞U251和T98G中低表达(均P<0.01),其表达水平与肿瘤大小和病理分级有关(均P<0.05)。过表达miR-205-5p可以显著抑制胶质瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力(均P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实Runx2基因是miR-205-5p的潜在靶基因。过表达miR-205-5p可明显下调胶质瘤细胞中Runx2蛋白的表达水平(P<0.001)。结论miR-205-5p在胶质瘤中低表达,过表达miR-205-5p可抑制胶质瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭,作用机制可能与靶向调控Runx2有关。

miR205-3p靶向MDM2调控乳腺癌血管内皮细胞增殖的研究

目的分析miR205-3p通过靶向鼠双微体2基因(MDM2)调控乳腺癌血管内皮细胞增殖的作用机制,探讨乳腺癌临床治疗可行的分子靶点。方法采用乳腺癌细胞(MDA-MB-231)皮下移植瘤组织为试验样本,通过免疫荧光实验检测移植瘤组织中是否有人源性肿瘤血管内皮细胞的存在,利用血管内皮细胞纯化技术得到移植瘤中的血管内皮细胞(即乳腺癌血管内皮细胞)。采用显微镜下观察细胞形态、内皮细胞成管实验及吞噬实验,验证血管内皮细胞的形态及生物学特性。检测乳腺癌血管内皮细胞和人脐静脉内皮细胞的miR205-3p的表达是否有差异,采用生物信息学分析方法得到miR205-3p的靶基因。通过改变miR205-3p的表达,研究靶基因的蛋白表达水平的改变。采用体外增殖实验及体内成瘤实验观察miR205-3p对乳腺癌血管内皮细胞及乳腺癌移植瘤增殖能力的影响。结果乳腺癌血管内皮细胞具有内皮细胞功能。相比较人脐静脉内皮细胞,miR205-3p在乳腺癌血管内皮细胞中表达降低(P<0.05)。利用生物信息学分析得到miR205-3p的靶基因为MDM2,提高miR205-3p的表达水平后可降低MDM2蛋白的表达(P<0.05),并在体内及体外水平都可影响乳腺癌血管内皮细胞的增殖能力。结论miR205-3p的表达水平升高可有效降低MDM2的表达,抑制肿瘤血管内皮细胞的增殖,这为抗肿瘤血管生成作用的研究及靶向药物开发提供了新的思路。

超深海相定向井元坝205-2钻井技术

元坝205-2井是以上二叠统长兴组顶部礁盖储层为主要目的层的海相超深定向井。实际完钻井深6 767 m,工程地质特征具有地层研磨性强、多压力体系、高温、高压和含H2S等特点。通过优化钻井方案,采用泡沫钻井、气体钻井、进口PDC+高效螺杆、孕镶钻头+高速螺杆等先进工具和工艺,创下该工区泡沫钻进最高日进尺224 m的记录,平均机械钻速比前期试采井提高了47.2%,平均台月效率提高了13.2%。

B113-2/B205-1型一氧化碳变换催化剂应用总结

总结辽河牌B113 2 /B2 0 5 1型一氧化碳变换催化剂的性能特点、工业应用、运行评价及使用时应注意事项。

V_2O_5溶胶-凝胶涂膜法及涂膜性能分析

以V2O5溶胶凝胶为原料,采用旋涂法、浸涂法、喷涂法和刷涂法在各种衬底上涂制V2O5薄膜。对4种涂膜方法以及胶体性能对涂膜的影响进行了分析;给出了薄膜厚度与主要影响因素之间的关系。

miR-205-5p/E2F1信号抑制经典Wnt/β蛋白通路调控脑胶质瘤细胞放射敏感性

目的探索miR-205-5p/E2F1信号轴在脑胶质瘤U251、U87细胞放射耐受中的调控机制。方法利用X射线逐步递增递间歇诱导方法照射U251、U87细胞,建立放射耐受的U251/TR、U87/TR细胞。对两种细胞进行形态学、细胞运动、侵袭及增殖能力分析。通过荧光素酶基因检测系统及点突变技术分析E2F1基因对U251/TR、U87/TR细胞的调控机制。结果放射耐受的U251/TR、U87/TR细胞分别比251、U87细胞的增殖活力增强,运动、侵袭能力增强,X射线照射下细胞凋亡下降。miR-205-5p mimics转染能够下调U251/TR细胞E2F1因子表达,抑制细胞增殖、侵袭及运动,增加放射敏感性。miR-205-5p mimics转染协同E2F1下调是通过抑制细胞Wnt/β-catenin信号通路活性发挥抑制肿瘤作用,并降低细胞耐受。结论逐步递增递间歇诱导方法能较好地建立U251/TR、U87/TR细胞。miR-205-5p/E2F1信号轴通过经典Wnt/β-catenin信号通路发挥抑癌作用,可以作为提高胶质瘤放射敏感性的治疗靶点。

复方半枝莲抑制人结肠癌COLO205细胞增殖

目的:探讨复方半枝莲对人结肠癌细胞COLO205体内外生长的抑制作用及机制。方法:体外培养COLO205细胞,分为空白组,顺铂(0.15 g·L^(-1))组,复方半枝莲高、中、低剂量(0.60,0.30,0.15 g·L^(-1))组。利用噻唑蓝(MTT)法检测复方半枝莲对COLO205细胞增殖抑制率的影响。采用免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞内凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),细胞凋亡调控因子(PUMA)的表达情况。选用SPF级裸鼠,于背部接种结肠癌COLO205细胞,待瘤体长到肉眼可见时,测量瘤体大小,根据瘤体大小区间随机分为复方半枝莲高、低浓度组,紫杉醇组和空白组,应用结肠癌移植瘤裸鼠模型体内实验检测复方半枝莲对COLO205细胞体内生长的影响。结果:体外细胞实验表明,经复方半枝莲作用后的人结肠癌细胞COLO205细胞出现了变形,并有细胞膜破损,细胞数逐渐减少,脱落而死亡的现象。48 h时复方半枝莲对COLO205细胞的抑制作用最强。其高、中、低剂量组抑制率分别为68.46%,63.11%,54.91%;且经复方半枝莲干预,COLO205细胞内的Bax,PUMA表达上调,Bcl-2表达下调;体内移植瘤实验显示,与空白组肿瘤体积比较,给药组的肿瘤体积明显减小。结论:复方半枝莲在体外内对人结肠癌细胞COLO205的生长均具有抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。

利用浮选药剂的同分异构原理发展新型锡石捕收剂

1-羟基-2-萘甲羟肟酸和2-羟基-3-萘甲羟肟酸是同分异构体。用2-羟基-3-萘甲羟肟酸为捕收剂,TBP为辅助捕收剂,浮选粒度-44μm占100%,-11μm占11 3%的锡石细泥,从含锡1 36%的给矿得到含锡37 39%,回收率91 21%的锡精矿;用它的同分异构体1-羟-2-萘甲羟肟酸浮选粒度-22μm占100%,-11μm占76 8%的锡石细泥,从含锡1 01%的给矿得到含锡18 85%,回收率92 68%的锡精矿。它们都是锡石的有效捕收剂,再次证明浮选药剂的同分异构原理是正确的。

常用金属材料选用指南

为加强普常用金属材料知识,使结构设计者针对零件选择更合适的材料,编写本指南,主要介绍常用金属材料的性能及加工方式。