萸连丸对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠记忆性滤泡辅助性T细胞的调节作用

目的探究萸连丸(黄连、吴茱萸)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠脾脏记忆性滤泡辅助性T细胞(Memory follicular T helper cell,m Tfh)的调节作用。方法将40只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、萸连丸组(0.5 g·kg^(-1))和美沙拉嗪组(0.3 g·kg^(-1)),每组10只。采用3%DSS溶液自由饮用7 d诱导溃疡性结肠炎小鼠模型。实验过程每天记录小鼠的精神状态、粪便性状、便血及体质量情况;测量小鼠结肠长度、结肠质量,计算结肠质量指数;采用HE染色法观察结肠组织病理形态变化;ELISA法测定结肠组织中白细胞介素6(IL-6)、IL-15的表达水平;流式细胞术测定脾脏组织中m Tfh细胞亚群的表达情况;Western Blot法测定结肠组织中Roquin-1、AMPK-α、p-AMPK-α蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠的体质量显著下降(P<0.01),结肠长度显著缩短(P<0.01),结肠质量明显增加(P<0.05),结肠质量指数显著升高(P<0.01),结肠组织病理损伤严重;结肠组织中的促炎细胞因子IL-6、IL-15表达水平显著升高(P<0.01);脾脏组织中CD4^(+)CCR7-CXCR5^(+)CD62L^(+)、CD4^(+)CCR7^(+)CXCR5^(+)GL7^(+)、CD4^(+)CCR7-CXCR5^(+)GL7^(+)细胞表达水平显著升高(P<0.01),而CD4^(+)CCR7^(+)CXCR5^(+)CD62L^(+)细胞表达水平显著降低(P<0.01);结肠组织中Roquin-1、AMPK-α、p-AMPK-α蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,萸连丸组及美沙拉嗪组小鼠的体质量明显上升(P<0.05),结肠长度显著延长(P<0.01),结肠质量明显降低(P<0.05),结肠质量指数显著下降(P<0.01),结肠组织病理损伤得到较明显改善;结肠组织中的IL-6、IL-15表达水平显著降低(P<0.01);脾脏组织中CD4^(+)CCR7-CXCR5^(+)CD62L^(+)、CD4^(+)CCR7^(+)CXCR5^(+)GL7^(+)、CD4^(+)CCR7-CXCR5^(+)GL7^(+)细胞表达水平显著降低(P<0.01),而CD4^(+)CCR7^(+)CXCR5^(+)CD62L^(+)细胞表达水平显著升高(P<0.01);结肠组织中Roquin-1、AMPK-α、p-AMPK-α蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论萸连丸对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎具有治疗作用,能够改善结肠组织病理损伤,可能与其激活Roquin-1/AMPK-α信号通路,下调炎性细胞因子IL-6、IL-15表达,调控m Tfh细胞亚群稳态有关。

萸连止泻丸提取工艺研究

目的优选萸连止泻丸最佳提取工艺。方法以小檗碱含量与干膏得率为评价指标,采用高效液相色谱法测定含量,采用正交实验考察加水量、煎煮时间、煎煮次数对提取效果的影响。结果最佳提取工艺为10倍量水,煎煮3次,每次1.5 h。结论该提取工艺设计合理,结果可靠,可为萸连止泻丸提取工艺提供理论基础。

萸连丸对DSS诱导结肠炎小鼠Th17/Treg平衡的调控机制

目的探讨萸连丸对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)疗效和Treg/Th17平衡的调控机制。方法将BALB/c雄性小鼠随机分为正常组、模型组、萸连丸组和美沙拉嗪给药组,每组10只。除正常组外,其余各组采用“2.5%DSS(第1~7天)——自由饮水(第8~14天)——2.5%DSS(第15~21天)”方法复制慢性复发性结肠炎。同时造模第8天开始予以萸连丸、美沙拉嗪肠溶片连续灌胃14d。造模第22天观察小鼠部分形态指标,采用流式细胞术测定结肠组织中CD4+Foxp3+、CD4+IL17A+细胞水平,采用蛋白印迹法检测结肠组织中检测低氧诱导因子(HIF-1a)、驱动蛋白家族成员2A(KIF2A)、BCL-2同源结构域蛋白NOXA、蛋白磷酸酶2a(PP2A)表达水平。结果与模型组相比,萸连丸组小鼠体质量明显增加,结肠长度明显增加,肠重指数明显降低;病理提示结肠组织中少量炎性细胞浸润,溃疡基本修复;结肠组织中CD4+IL17A+细胞水平显著下降,CD4+Foxp3+细胞水平显著升高;结肠组织中HIF-1a、PP2A表达水平显著降低,KIF2A表达水平显著升高。结论萸连丸可通过Th17/Treg细胞平衡而有效治疗DSS诱导小鼠慢性复发性结肠炎,其作用机制涉及HIF-1a、PP2A表达水平降低和KIF2A表达水平升高。

萸连丸对溃疡性结肠炎小鼠脾脏CD4^(+)T细胞BCL-6/Blimp-1,PD-1/PD-L1表达的调节作用

目的:探讨萸连丸对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)小鼠脾脏CD4^(+)T细胞转录因子B细胞淋巴瘤因子6/B细胞诱导成熟蛋白1(BCL-6/Blimp-1),程序性死亡受体-1/程序性死亡受体配体-1(PD-1/PD-L1)表达的调节作用。方法:将40只BALB/c雄性小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、萸连丸500 mg/kg组以及美沙拉嗪300 mg/kg组。除正常对照组小鼠外,其余小鼠采用DSS复制慢性溃疡性结肠炎模型,造模成功后,各组灌胃给予药物或生理盐水,观察小鼠体质量、结肠长度、结肠质量、肠质量指数、结肠黏膜病理形态及病理组织学损伤评分;ELISA法检测结肠组织中白细胞介素-7(IL-7)、IL-9、IL-23含量;流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4^(+)BCL-6^(+)、CD4^(+)Blimp-1^(+)、CD4^(+)PD-1^(+)及CD4^(+)PD-L1^(+)细胞水平;Western blot法检测结肠组织中BCL-6、Blimp-1蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组结肠组织中IL-7、IL-9、IL-23含量明显升高(P<0.05),小鼠脾脏中CD4^(+)BCL-6^(+)、CD4^(+)PD-1^(+)、CD4^(+)PD-L1^(+)细胞水平显著升高(P<0.01),CD4^(+)Blimp-1^(+)细胞水平显著降低(P<0.01),BCL-6蛋白表达明显上调(P<0.05),Blimp-1蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组相比,萸连丸500 mg/kg组小鼠体质量和结肠长度明显增加、肠质量指数明显降低(P<0.05),结肠组织中IL-7、IL-9、IL-23含量显著降低(P<0.01),小鼠脾脏中CD4^(+)BCL-6^(+)、CD4^(+)PD-1^(+)、CD4^(+)PD-L1^(+)细胞水平明显降低(P<0.05),CD4^(+)Blimp-1^(+)细胞水平明显升高(P<0.05),BCL-6蛋白表达明显下调(P<0.05),Blimp-1蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:萸连丸可能通过调节小鼠CD4^(+)T细胞表面BCL-6/Blimp-1,PD-1/PD-L1表达水平改善溃疡性结肠炎。

萸连丸对结肠炎小鼠脾脏Treg细胞PD-1/PD-L1表达的调节作用

目的探明萸连丸对溃疡性结肠炎小鼠脾脏Treg细胞PD-1/PD-L1表达的调节作用。方法采用经典的DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠模型。雄性SPF级BALB/c共40只,随机平均分为正常组、模型组、模型+萸连丸组、模型+美沙拉嗪组,除正常组外都给予DSS复制溃疡性结肠炎模型。造模后,模型+萸连丸组给予0.5g/kg萸连丸溶液灌胃,模型+美沙拉嗪组给予0.3g/kg美沙拉嗪溶液灌胃,正常组与模型组给予相同容积的生理盐水灌胃。记录小鼠体重、粪便粘稠度、便血情况;分离结肠并测量其结肠长度和重量,计算肠重指数;ELISA法检测结肠组织中IL-2、IL-17A的表达水平;分离脾脏,流式细胞术检测各组小鼠脾脏Treg细胞及其PD-1/PD-L1的表达水平;Western blot法检测Raptor、TSC1、TSC2的表达水平。结果与模型组相比,模型+萸连丸组小鼠体重明显增加(P<0.05)、结肠长度显著恢复(P<0.01)、结肠重量以及肠重指数明显减轻(P<0.05);结肠组织炎性细胞浸润减少,黏膜损伤恢复;IL-2、IL-17A表达水平显著降低(P<0.01);脾脏中CD4^(+)CD25^(+)细胞水平显著升高(P<0.01),CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)PD-1+细胞水平显著下降(P<0.01),CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)PD-L1^(+)呈升高趋势(P<0.05);结肠组织中Raptor蛋白表达水平下降,TSC1与TSC2表达水平上调(P<0.05)。结论萸连丸可能通过增加小鼠脾脏Treg细胞水平并调节其PD-1/PD-L1表达而有效治疗溃疡性结肠炎。