抗肿瘤抗生素云南霉素对细胞周期的作用及分子机理

目的 :研究具有新型结构的胞嘧啶核苷二肽类抗生素云南霉素的抗肿瘤作用的分子机理。方法 :应用细胞培养、流式细胞光度术、Westernblot分析等方法研究云南霉素对肿瘤细胞周期的影响及分子机理。结果 :云南霉素对多种肿瘤细胞 (HL 6 0 ,KB ,GLC)有G2 /M期阻滞、S期抑制作用 ,并伴有cyclinB1蛋白、P34 cdc2 蛋白、Mpm 2蛋白表达下降。结论 :云南霉素导致HL 6 0细胞G2 /M期阻滞的分子机理可能与降低cyclinB1、P34 cdc2和Mpm 2蛋白水平有关。

新的抗肿瘤抗生素云南霉素 Ⅰ.抗微生物活性及产生菌的生物学

新的抗肿瘤抗生素云南霉素是云谷霉素（谷氏菌素）的水解产物，它具有很强的抗肿瘤活性及很弱的抗微生物活性。云谷霉素产生菌是从云南关坪土壤分离的一株放线菌２３２１菌株。按形态、培养、生理生化等特征及细胞壁化学组分，２３２１菌株非常近似小白链霉菌（ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｌｂｕｌｕｓＲｏｕｔｉｅｎｉｎＲａｏｅｔａｌ，１９５９）定名为小白链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｌｂｕｌｕｓ）２３２１。

新抗肿瘤抗生素云南霉素 Ⅲ.抗肿瘤作用

云南霉素是由链霉菌产生的新抗肿瘤抗生素。云南霉素体外试验对肿瘤细胞有杀伤作用。动物体内试验，对小鼠肝癌２２、结肠癌２６以及肉瘤１８０均有显著疗效。使用可耐受剂量，云南霉素１２０ｍｇ／ｋｇ，ｐｏ，×２，对肝癌２２的抑制率达８３％；３０ｍｇ／ｋｇ，ｉｖ，×３，对肝癌２２的抑制率为７７％。

新的抗肿瘤抗生素云南霉素 Ⅱ.提纯、理化性质与鉴别

自我国云南省土壤分离获得链霉菌菌株２３２１，并从该菌株的发酵液中提取分离到一个对肿瘤细胞有抑制作用的物质，该物质经鉴别与谷氏菌素相同，取名为云谷霉素。经过酸水解以后，可从中分离纯化得到一个活性成分。通过对其理化性质和光谱的测试分析，确认该成分为一个新的胞嘧啶核苷类抗生素，小鼠实验有显著的抗肿瘤作用，该抗生素定名为云南霉素（ｙｕｎｎａｎｍｙｃｉｎ）。

抗肿瘤抗生素云南霉素诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡

目的观察抗肿瘤抗生素云南霉素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2,MTT法检测云南霉素对细胞增殖的影响,Hoechest33342法检测细胞凋亡的形态变化,Western blotting法检测凋亡相关蛋白PARP的表达,AnnexinⅤ-FITC/PI双染结合流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果云南霉素对HepG2细胞增殖抑制的IC50值为24.13μmol/L;HepG2细胞经云南霉素作用24h后,可诱导胞内凋亡标志蛋白PARP的切割,并随浓度的增高而作用增强;而HepG2细胞经云南霉素作用48h后,可出现典型的凋亡形态变化,呈剂量依赖性引起细胞凋亡。结论云南霉素可抑制人肝癌细胞株HepG2的增殖,诱导细胞发生凋亡。

不吸水链霉菌中沉默基因簇的激活和产物结构鉴定

不吸水链霉菌S.ahygroscopicus S91(CGMCC4.7082)的次级代谢产物中含有多种抗真菌组分,目前已发现的组分有四霉素、制霉菌素、丰加霉素、白诺菌素和茴香霉素。通过生物信息学分析,不吸水链霉菌S91基因组中含有云南霉素和谷氏菌素的生物合成基因簇,但目前在该菌株发酵产物中并没有检测到这两种抗生素的存在。对四霉素、制霉菌素、丰加霉素生物合成阻断株Streptomyces ahygroscopicus AttmSlAnysBAtymH进行发酵培养,发现其发酵液中具有水溶性的抑制黑曲霉的活性组分。以抑菌活性跟踪目标未知抑菌化合物,发酵液经离心、草酸酸化后,上清液经大孔吸附树脂DM-2脱色,脱色液经732阳离子交换、中性氧化铝柱柱层析和Sephadex LH-20色谱分离,最终得到两个具有抗真菌的化合物A和B。化合物经紫外、质谱和核磁进行结构鉴定,化合物A为云南霉素,B为谷氏菌素或宁南霉素。生物信息学分析与分离纯化技术相结合,进一步证实该菌株具有产生云南霉素和谷氏菌素抗生素的能力。