Z-15-二十四碳烯酸的制备

对蒜头果油皂化制备Z 15 二十四碳烯酸的实验室工艺进行改进 ,即直接酸化后利用丙酮分步结晶 ,工艺已实现了大规模生产 ,收率达 33%。

环氧乙烷法合成顺-15-二十四碳烯酸

以芥酸为原料,通过五步反应,高产率的获得产物顺-15-二十四碳烯酸。首先将原料还原成芥醇,接着通过溴代及格氏反应,与环氧乙烷反应得到顺-15-二十四碳烯醇,进一步使用三氧化铬吡啶盐酸盐(PCC)及银氨溶液将烯醇中间体逐步氧化成最终产物。

15-羟廿碳四烯酸对缺氧性大鼠颈内动脉环的收缩作用及机制

目的研究15-羟廿碳四烯酸(15-HETE)对正常及缺氧状态的离体大鼠颈内动脉环的作用,探讨15-HETE在缺血/缺氧性脑损伤的病理生理过程中的作用.方法 16只Wistar大鼠随机分为两组即对照组:其氧浓度(FiO2)为21%和缺氧组:置于FiO2为10%的缺氧箱中(n=8).9 d后将大鼠处死,游离颈内动脉(ICA)制备血管环,KH液中分别加入不同浓度15-HETE以及2 mmol·L-1 4-AP、10-2 mol·L-1 TEA、10-6 mol·L-1 GLYB后平衡15 min后,再加入15-HETE,观察不同浓度15-HETE、不同K+通道阻断剂对颈内动脉环收缩反应程度的变化.结果 15-HETE以浓度依赖方式(10-8 mol·L-1～10-6mol·L-1)使游离颈内动脉环张力增加,对缺氧组大鼠颈内动脉环张力作用更为明显,与正常对照组相比差异有显著性(15-HETE浓度为10-8 mol·L-1、10-7 mol·L-1时,P<0.05,10-6 mol·L-1时,P<0.01,n=8);2 mmol·L-1 4-AP使颈内动脉环血管张力增高(P<0.05，n=8),但预先应用 2 mmol·L-1 4-AP后浴液中加入10-6 mol·L-1 15-HETE,血管张力无进一步增加的趋势;10-2 mol·L-1 TEA、10-6 mol·L-1 GLYB,对血管环张力差异无显著性(P>0.05,n=8);但进一步应用15-HETE使血管环张力增加,变化幅度接近单纯应用15-HETE组.结论 15-HETE收缩ICA,缺氧情况下尤为明显;Kv通道在15-HETE所致的ICA收缩中起作用.

ERK1／2通路参与15-羟二十碳四烯酸收缩缺氧大鼠肺动脉的过程(英文)

缺氧诱导的15-羟二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosateteraenoic acid,15-HETE)是引起肺动脉收缩的重要介导因子。15- HETE引起肺动脉收缩的信号转导途径尚不清楚。本研究旨在确定细咆外信号调节激酶1／2(extracellular signal-regulated kinase-1／2, ERK1／2)信号转导通路是否参与15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉的过程。采用组织浴槽肺动脉环张力检测、蛋白质免疫印迹 (Western blot)和免疫细胞化学方法。制备缺氧大鼠动物模型,成年雄性Wistar大鼠在低氧环境下(吸入氧分数为0．12)正常喂养 9 d。显微分离直径1～1．5mm肺动脉,剪成长为3 mm的动脉环,进行血管张力检测。用ERK1／2 上游激酶(MEK)抑制剂PD98059 抑制ERK1／2活性。结果显示,PD98059可明显抑制15-HETE对缺氧大鼠肺动脉环的收缩作用。在去除内皮的肺动脉环, PD98059仍可明显降低15-HETE的缩血管作用。Western blot和免疫细胞化学结果都显示,15-HETE能促进ERK1／2磷酸化。 由此表明ERK1/2信号转导通路参与15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉的过程。

Kv3．4通道参与15-羟二十碳四烯酸诱导的大鼠肺动脉收缩

通过组织浴槽血管环方法观察Kv3．4通道特异阻断剂BDS-Ⅰ对15-羟二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetraenoic acid,15- HETE)收缩肺动脉血管的影响:通过酶法分离、培养Wistar大鼠肺动脉血管平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells, PASMCs),RT-PCR和Western blot技术观察15-HETE对大鼠PASMCs上Kv3．4通道表达的影响,以探讨Kv3．4通道在15- HETE收缩肺动脉过程中的作用。结果如下:(1)15-HETE以浓度依赖方式使肺动脉环张力增加,对缺氧组大鼠肺动脉环张力作用更为明显,与正常对照组相比差异显著:(2)除去肺动脉内皮后,15-HETE引起血管收缩的强度较内皮完整时增强,呈剂量依赖性收缩反应;(3)阻断Kv3．4通道可抑制15-HETE收缩肺动脉;(4)15-HETE下调PASMCs膜上Kv3．4通道 mRNA及蛋白质表达。上述观察结果提示Kv3．4通道参与由15-HETE引起的缺氧肺动脉血管收缩(hypoxic pulmonary vasoconstriction,HPV)。

15-羟二十碳四烯酸下调肺动脉内皮型一氧化氮合酶的活性(英文)

15-羟二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetraenoic acid,15-HETE)在低氧性肺血管收缩中起着重要作用,低氧肺动脉高压 下调内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS),使一氧化氮(nitric oxide,NO)的产量下降,但目前尚无关 于15-HETE与eNOS／NO相互作用研究的报道。我们通过Wistar大鼠肺动脉环张力、牛肺动脉内皮细胞NO产量、总eNOS 表达及eNOS磷酸化测定等方法对15-HETE与eNOS／NO的相互作用进行研究。首先分离大鼠肺动脉,分为eNOS抑制剂L- NAME组(0．1 mmol／L)、去血管内皮组与内皮完整组,用15-HETE作用大鼠离体肺动脉环,测定肺动脉张力。结果表明, L-NAME组、去除内皮组与内皮完整组分别比较,15-HETE对血管的收缩作用增强,且都有统计学意义(P<0．05)。培养牛肺 动脉内皮细胞,分别用15-HETE、15-脂氧酶(15-lipoxygenase,15-LO)抑制剂[(cinnamyl 3,4-dihydroxy-[alpha]-cyanocinnamate, CDC)利(nordihydroguiairetic acid,NDGA)]处理细胞,通过Greiss方法检测亚硝酸盐含量,间接测定NO产量,与对照组比较, 1 μmol／L 15-HETE 明显降低肺动脉内皮细胞NO水平(P<0．05), 10 μmol／L CDC和0．1 mmol／L NDGA显著增加NO水平(分别 是P<0．05,P<0．01);通过Western blot检测不同时间(5,10,15,20,30,60 min)eNOS的表达情况,结果显示,15- HETE的小同作用时间,没有引起eNOS表达的明显不同;用苏氨酸495位点磷酸化eNOS(Thr495)抗体进行免疫沉淀,再用 总eNOS抗体和15-LO抗体通过Western blot检测磷酸化型含量,间接测定eNOS活性,结果表明15-HETE增强Thr495磷酸 化型eNOS含量。由于Thr495为eNOS抑制性磷酸化位点,因此15-HETE降低eNOS活性。这些数据表明;15-HETE的缩 血管作用有eNOS／NO参与,15-HETE可以通过磷酸化Thr495位点降低eNOS活性,并且首次发现磷酸化eNOS(Thr495)和15- LO之间存在蛋白质相互作用。

缺氧性脑动脉收缩中15-羟二十碳四烯酸对Kv2.1的作用

目的研究在缺氧性脑动脉收缩中15-羟二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetrienoic acid,15-HETE)对Kv2.1通道的表达是否具有调控作用。方法 24只健康Wistar大鼠随机分为3组(n=8):A组为对照组,吸大气,FiO2(氧浓度)为21%;B组为缺氧组,将大鼠置于FiO2为12%的缺氧箱中;C组为15-HETE组,吸大气,FiO2为21%。9天后将大鼠全部处死,游离直径为0.5～1.0 mm的脑动脉;将游离的脑动脉于恒温浴槽中水浴2 h,C组浴液中加入15-HETE,使其浓度为10-6mol/L。分别采用RT-PCR和Western blot技术检测脑动脉上Kv2.1通道mRNA和蛋白质的表达情况。结果①缺氧组及15-HETE组脑动脉上Kv2.1通道mRNA的表达明显低于对照组(P<0.05);②缺氧组及15-HETE组脑动脉上Kv2.1通道蛋白质的表达明显低于对照组(P<0.05)。结论缺氧可能是通过15-HETE这一介导因子抑制Kv2.1通道,减少脑动脉上功能性Kv2.1通道的数量,导致脑动脉收缩。

15-羟基二十碳四烯酸收缩慢性缺氧动脉环信号转导通路的部位:内皮细胞还是平滑肌

目的:观察15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)致慢性缺氧性大鼠肺动脉收缩的信号转导途径,阐明15-羟基二十碳四烯酸引起慢性缺氧性肺动脉收缩作用的可能机制。方法:实验于2006-03/2006-09在哈尔滨医科大学药学院进行。①实验材料:健康成年雄性Wistar大鼠,体质量220～240g,清洁级,由哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心提供。②实验方法:取18只成年雄性Wistar大鼠连续缺氧9d(O2体积分数为0.12)制作大鼠缺氧模型,通过氧气监测控制器控制箱内氧气体积分数为0.12,9d后即成为缺氧大鼠模型。16只正常大鼠吸入正常空气(O2体积分数为0.21)作为对照。将大鼠麻醉后分离直径1.5mm肺内动脉,剪成2mm长动脉环置于组织浴槽中,记录血管张力变化。③实验评估:观察15-羟基二十碳四烯酸对缺氧模型组、正常组大鼠血管收缩作用,在此基础上,除去血管内皮细胞和使用丝裂素活化蛋白激酶的激酶抑制剂PD98059,明确血管内皮细胞和丝裂素活化蛋白激酶的激酶系统在15-羟基二十碳四烯酸收缩肺动脉中的作用。结果:34只大鼠均进入结果分析。①15-羟基二十碳四烯酸对正常组、缺氧模型组大鼠血管环均有收缩作用,呈浓度-效应正相关,但缺氧组收缩明显,与正常组比较,差异显著(P<0.01)。②丝裂素活化蛋白激酶的激酶抑制剂PD98059可明显阻断15-羟基二十碳四烯酸对缺氧大鼠肺动脉的收缩作用(P<0.05)。③去掉内皮的缺氧大鼠肺动脉,PD98059仍明显阻断15-羟基二十碳四烯酸的收缩作用(P<0.05)。结论:15-羟基二十碳四烯酸通过激活肺动脉平滑肌丝裂素活化蛋白激酶的激酶信号转导途径收缩慢性缺氧性大鼠肺动脉,作用部位主要位于血管平滑肌。

15-羟廿碳四烯酸对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织SOD、MDA的影响

目的研究15-羟廿碳四烯酸(15-HETE)对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法36只SPF级大鼠随机分为假手术组、模型组以及15-HETE组三组,每组各12只。假手术组大鼠右侧脑室注入15μl的PBS;模型组和15-HETE组大鼠在缺血前30 min右侧脑室分别注入15μl的PBS和15μl的15-HETE,模型制备成功24 h后处死全部大鼠。检测各组大鼠脑梗死百分比,脑组织中SOD活性和MDA含量。结果与模型组相比较,15-HETE组大鼠脑梗死百分比明显减少(P<0.05),SOD活性显著提高(P<0.05),MDA含量显著下降(P<0.05)。结论15-HETE对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用。

探析针刺调节15-羟基二十碳四烯酸防治动脉粥样硬化的作用机制

动脉粥样硬化(AS)是多因素参与的复杂的病理过程,中医药治疗AS已显示出了其独特的优势及广阔的应用前景。针灸作为祖国医学的瑰宝,能够着眼于宏观,综合治疗,通过调整阴阳、扶正祛邪、疏通经络,有效地防治AS,并且具有取穴简单,疗效肯定,安全经济,无不良反应等优点。15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)作为花生四烯酸的代谢产物,参与调节动脉血管收缩与重构。文章综合整理15-HETE代谢机制相关文献,与针灸防治AS的作用机制加以对比分析,探究15-HETE对AS发生发展的影响以及针刺调节15-HETE防治AS的作用机制。

15-羟廿碳四烯酸对缺氧性肺血管收缩电压门控性K^+通道的作用机制

缺氧性肺血管收缩(HPV)是机体的一种保护功能,但其机制至今尚不完全清楚。15-羟廿碳四烯酸(15-Hydroxyei-cosatetrienoic acid,15-HETE)是15-脂质氧化酶(15-LO)代谢花生四烯酸(AA)的产物,其对肺动脉平滑肌细胞(PSMVC)电压门控性K+通道(Kv)有抑制作用,使细胞去极化,细胞内钙离子浓度增加,进而导致细胞收缩,产生HPV,故15-HETE可能是形成HPV的始发介质。

缺氧肺动脉高压发病机制研究进展:15-LO/15-HETE的作用

缺氧肺动脉高压(HPH)以急性缺氧肺动脉收缩(HPV)和慢性缺氧导致的肺血管床重构(HPVR)引起的肺动脉压持续升高为特征的临床常见病症。参与HPH的中介因子很多,但没有一种可以完整地阐述其发病机制。本实验室前期工作发现缺氧可使肺血管15-脂酯氧化酶(15-LO)表达升高,后者催化花生四烯酸,生成15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)。研究发现15-LO/15-HETE参与HPV与HPVR的众多过程,提示15-LO/15-HETE可能是HPH发病过程的一个中介因子。对15-LO/15-HETE研究将更好地阐述HPH的发病机制,寻找更有效的临床治疗靶点。

Kv通道亚型在15-HETE收缩肺动脉过程中的作用

目的从组织功能及细胞分子水平研究电压门控型钾通道(Kv通道)亚型在15-羟化二十碳四烯酸(15-HETE)致大鼠肺动脉收缩过程中的作用。方法采用组织浴槽血管环法,使用Kv通道阻断剂,确定受15-HETE调控大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)膜上Kv亚型;使用RT-PCR和W estern b lotting技术观察受15-HETE调控PASMCs膜上Kv亚型。结果阻断Kv1.1,Kv1.2,Kv1.3和Kv1.6通道并不影响15-HETE诱导肺动脉血管收缩;15-HETE不影响PASMCs膜上Kv1.1和Kv1.2通道蛋白质表达;15-HETE下调PASMCs膜上Kv1.5和Kv2.1通道mRNA和蛋白质表达。结论缺氧可能是通过15-HETE这一介导因子抑制Kv1.5和Kv2.1通道,减少PASMCs膜上功能性Kv1.5和Kv2.1通道数量,导致PASMCs收缩。

15-LOX/15-HETE对Kv通道的抑制在缺氧诱导的脑动脉收缩中的作用

目的探讨缺氧诱导的脑动脉收缩中,脑动脉平滑肌细胞上的15-脂加氧酶(15-lipoxygenase,15-LOX)/15-羟二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetraenoic acid,15-HETE)对Kv通道的抑制作用。方法健康Wistar大鼠,通过酶消化法分离培养脑动脉平滑肌细胞(carotid artery smooth muscle cell,CASMC),分为4组:A组为正常细胞常氧组(对照组):将CASMC在常氧环境下常规培养48 h;B组为正常细胞缺氧组:在缺氧箱内培养48 h;C组为15-LOX基因过表达细胞常氧组:对细胞上的15-LOX进行基因过表达后放入常氧环境下培养48 h;D组为15-LOX基因敲除细胞缺氧组:对细胞上的15-LOX进行基因敲除后放入缺氧箱内培养48 h。酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法测定各组CASMC的15-HETE生成量;反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western-blot测定各组CASMC的Kv2.1信使RNA(messenger ribonucleic acid,m RNA)及蛋白质表达情况。结果对细胞上的15-LOX基因进行干扰后,其15-HETE生成量及Kv2.1表达情况异于正常细胞组。与正常细胞常氧组比较,正常细胞缺氧组及15-LOX基因过表达细胞常氧组15-HETE生成量均增加,Kv2.1 m RNA及蛋白质表达均下调(P<0.05);与正常细胞缺氧组比较,15-LOX基因敲除细胞缺氧组15-HETE生成量减少,Kv2.1 m RNA及蛋白质表达均上调(P<0.05)。结论在缺氧诱导的脑动脉收缩中,脑动脉平滑肌细胞上的15-LOX表达增加,15-HETE生成量增加,对Kv通道的抑制作用增强,因此缺氧可能是通过15-LOX/15-HETE对Kv通道的抑制引起脑动脉收缩的。

下调15-LOX-2表达对缺氧状态下肺动脉平滑肌细胞的影响

目的探讨下调15脂氧酶-2(15-LOX-2)对缺氧状态下肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的影响。方法将PASMCs随机分为四组:正常对照组、缺氧组、scramble组、15-LOX-2 si RNA组。实时定量荧光聚合酶链反应(Real time PCR)检测15-LOX-2表达;噻唑蓝比色法(MTT)检测PASMCs增殖情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测15-羟基-二十碳四烯酸(15-HETE);分析活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达变化。结果缺氧增加15-LOX-2、15-HETE和ROS的产生,促进PASMCs增殖,减少SOD活性,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。缺氧下转染15-LOX-2 si RNA可减少15-LOX-2、15-HETE和ROS的产生,抑制PASMCs增殖,增加SOD活性,与缺氧组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 15-LOX-2下调可通过减少15-HETE产生、调节氧化/抗氧化平衡、调控PASMCs的异常增殖,从而延缓缺氧性肺血管收缩的病理进程。

Kv通道和ERK1/2在15-HETE引起缺氧肺动脉收缩中的作用

目的用组织浴槽血管环技术研究Kv通道和ERK1/2在15-HETE引起缺氧肺动脉收缩中的作用及其机制。方法游离缺氧Wistar大鼠的肺内肺动脉,直径约为0.5-1.0 mm,剪成长约3 mm的血管环,观察加入Kv通道抑制剂4-AP和ERK1/2抑制剂U0126前后15-HETE对大鼠离体肺动脉的作用。结果①MEK-ERK1/2阻断剂U0126可以明显阻断4-AP引起的肺动脉收缩（P〈0.05）;②Kv通道阻断剂4-AP可以明显阻断15-HETE引起的缺氧鼠肺动脉收缩（P〈0.05）;③U0126＋15HETE与U0126＋4-AP＋15HETE组之间有明显差异（P〈0.05）,Kv通道和ERK1/2均参与了15-HETE引起缺氧肺动脉收缩。结论15-HETE通过Kv通道引起缺氧肺动脉收缩,其机制可能与MEK-ERK1/2信号转导通路有关。

慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织中LTB4和15-HETE的含量变化及异丙托溴铵对其影响

目的:探讨慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonarydisease,COPD)大鼠模型肺组织中白三烯B4(Leukofriene B4,LTB4)与15-羟化二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetraenoic acid,15-HETE)含量的变化以及异丙托溴铵对其的影响。方法:36只雄性Wistar大鼠随机分成A组(对照组)、B组(COPD)、C组(异丙托溴铵组),每组12只。测定各组大鼠肺功能、肺组织匀浆液中的LTB4/5-HETE的含量。结果:COPD大鼠用力呼吸量(Forced expirafory volum in the 0.3scond,FEV0.3)/用力肺活量(Forcedvifalcapacity,FVC)%较对照组显著下降(P<0.001),Ri和Re较对照组显著增加(P<0.001,P<0.05),肺组织匀浆液LTB4和15-HETE较对照组显著升高(P<0.001);异丙托溴铵的干预可显著降低肺组织中LTB4和15-HETE的水平(P<0.001),但对肺功能无明显改善。结论:COPD大鼠LTB4/15-HETE水平增高,参与气道炎症过程。异丙托溴铵的治疗可降低肺组织中的LTB4、15-HETE水平,改善气道炎症。

15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv1.2、Kv3.4表达的影响

目的从细胞分子水平研究电压门控型钾通道亚型Kv1.2、Kv3.4在15-酮基二十碳四烯酸(15-ketoeicosatetretraenoic acid,15-KETE)致大鼠肺动脉收缩过程中的作用。方法通过酶法分离、培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth cells,PASMCs),使用RT-PCR和Western blot技术观察15-KETE对大鼠PASMCs上Kv1.2、Kv3.4通道表达的影响。结果 (1)15-KETE下调大鼠PASMCs膜上Kv1.2通道mRNA及蛋白质的表达;(2)15-KETE下调大鼠PASMCs膜上Kv3.4通道mRNA及蛋白质的表达。结论 Kv1.2、Kv3.4通道参与由15-KETE引起的缺氧肺动脉收缩(hypoxic pulmonary vasoconstriction,HPV)。

15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响

目的探讨15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞内Ca2+的作用及其来源。方法以酶法(胶原酶Ⅰ型和弹性酶)分离培养原代大鼠肺动脉平滑肌细胞,将细胞稀释所需密度(2×105个/mL),加样于6孔板中的盖玻片上,放入37℃孵箱中培养12 h,细胞贴壁后,取出6孔板中的盖玻片,放入特制的小槽内,D-Hanks液冲洗细胞3次,加入1×10-5mol/L的Flou-3/AM,置37℃孵箱中避光孵育约30 min,用D-Hanks液洗去细胞外残留染料,应用激光扫描共聚焦显微镜技术,测定了15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞游离钙离子浓度的影响。结果 1)15-KETE(1×10-8—1×10-6)mol/L可依赖性引起肺动脉平滑肌细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)增加;2)1×10-6mol/L维拉帕米(L-型钙离子通道阻断剂)和无钙离子细胞外液显著阻抑了1×10-6mol/L 15-KETE引起肺动脉平滑肌[Ca2+]i增加。结论 15-KETE可引起大鼠肺动脉平滑肌[Ca2+]i增加,并且此钙来源于细胞外液钙离子。