Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的:观察Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响。方法:将36只SD大鼠以改良Allen法制作大鼠急性脊髓损伤(SCI)模型(脊髓中度损伤),分为对照组(单纯损伤A组18只,按时间段又分为A1,A2,A3),治疗组(应用Z-DEVD-FMK治疗B组18只,按时间段又分为B1,B2,B3)。损伤后6h,3d,8d对脊髓损伤区进行组织学HE染色,细胞凋亡TUNEL标记,Fas凋亡因子检测,免疫组化检测Caspase-3的表达变化,同时采用BBB评分方法和斜板试验观察神经功能恢复情况。结果:对照组和治疗组均见TUNEL阳性的凋亡细胞和Cas-pase-3表达。Z-DEVD-FMK治疗组神经细胞的凋亡数减少,Caspase-3表达降低,神经功能增强,两组相比差异有显著性(P<0.05)。结论:Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK能减少继发性脊髓损伤细胞凋亡和促进神经功能的恢复。

z-DEVD-fmk干预甲基苯丙胺依赖大鼠脑细胞凋亡与Bcl-2蛋白的表达

目的观察caspase-3抑制剂(z-DEVD-fmk)对甲基苯丙胺(MA)依赖大鼠脑组织细胞凋亡和Bcl-2蛋白表达的影响。方法健康Wistar大鼠40只,随机分为空白对照组、MA依赖模型组、z-DEVD-fmk+MA组和z-DEVD-fmk对照组,每组10只。空白对照组腹腔注射生理盐水;MA依赖模型组、z-DEVD-fmk+MA组按剂量逐日递增法建立MA依赖大鼠实验动物模型,同时脑室注射z-DEVD-fmk进行干预治疗;z-DEVD-fmk对照组脑室注射z-DEVD-fmk(20μg/100 g)。采用TUNEL法观察各组大鼠脑组织细胞凋亡变化,免疫组化法检测Bcl-2蛋白表达的改变。结果 MA依赖模型组脑组织细胞凋亡明显增加,Bcl-2蛋白表达下降;z-DEVD-fmk+MA组脑组织细胞凋亡明显减少,Bcl-2蛋白表达增加。结论 z-DEVD-fmk能够抑制MA依赖大鼠脑组织细胞凋亡,增加Bcl-2蛋白表达,z-DEVD-fmk具有干预与抑制MA致大鼠脑组织的损伤作用。

z-DEVD-fmk对甲基苯丙胺依赖大鼠脑海马组织caspase-3活性及其蛋白表达的影响

目的:观察z-DEVD-fmk(caspase-3抑制剂)对甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)依赖大鼠海马组织caspase-3活性及其蛋白表达的影响。方法:选取健康Wistar大鼠40只,随机分为空白对照组、MA依赖组、MA+z-DEVD-fmk干预组和z-DEVD-fmk组,各10只。参考文献建立MA依赖大鼠实验动物模型,经侧脑室注射z-DEVD-fmk干预治疗,采用酶标仪法检测caspase-3活性,采用免疫组化法检测Caspase-3蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,MA依赖组和MA+zDEVD-fmk干预组海马组织caspase-3活性明显升高(P<0.01),Caspase-3蛋白表达增多(P<0.01);与MA依赖组比较,Ma+z-DEVD-fmk干预组caspase-3活性明显降低(P<0.05),Caspase-3蛋白表达减少(P<0.05)。结论:z-DEVD-fmk能够抑制MA依赖大鼠海马组织caspase-3活性,降低Caspase-3蛋白表达,z-DEVD-fmk具有干预与保护MA致大鼠脑组织损伤作用。

Caspase抑制剂对缺氧诱导的心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的探讨Caspase-3特异性抑制剂在缺氧诱导的培养乳鼠心肌细胞凋亡中的作用及其相关基因的表达。方法将SD乳鼠的培养心肌细胞随机分为对照组、缺氧72 h组及Caspase-3抑制剂组(缺氧72 h前加入0.1μmol/L的Z-DEVD-fmk)3组。应用Western blot分析法和RT-PCR技术检测Caspase-3、PARP蛋白及Caspase-3mRNA的表达,同时利用流式细胞仪分析心肌细胞凋亡的变化;借助Caspase-3荧光分析试剂盒,荧光比色法检测心肌细胞凋亡过程中Caspase-3活性的变化。结果Caspase-3抑制剂组细胞凋亡百分率为(14.93±2.47)%,显著低于缺氧72 h组的(48.43±4.18)%,差异有高度统计学意义(P<0.01)。Caspase-3抑制剂组PARP及Caspase-3蛋白表达显著低于缺氧72 h组,差异有高度统计学意义(P<0.01)。RT-PCR分析显示,Caspase-3抑制剂组Cas-pase-3 mRNA的表达量较缺氧72 h组降低了62.05%,差异有高度统计学意义,Caspase-3活性检测显示,Caspase-3抑制剂组的Caspase-3活性较缺氧72 h组降低了52.85%,差异有高度统计学意义(均P<0.01)。结论Caspase-3抑制剂能明显抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡、Caspase-3蛋白和mRNA的表达、Caspase-3蛋白酶活性和PARP的裂解。

苦参碱诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的相关机制研究

目的:观察苦参碱体外诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡效应并对其可能的作用机制进行初步探讨。方法:将不同浓度(0.00、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/ml)的苦参碱分别作用于体外培养的宫颈癌细胞,在不同时间点(24、48、72 h),采用MTT法检测细胞的增殖情况;采用Annexin-Ⅴ和PI双染法在流式细胞仪上检测细胞的凋亡率;采用Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果:各组苦参碱对SiHa细胞的增殖均有抑制作用,MTT和流式细胞结果显示,不同浓度的苦参碱对细胞生长抑制率与对照组相比存在明显差异(P<0.05),呈剂量效应正相关及时间效应正相关。加入Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK后,各组细胞凋亡率与只加苦参碱组相比凋亡率下降。Western blot检测结果显示Caspase-3蛋白水平随苦参碱浓度的提高而增加(P<0.05)。结论:苦参碱可诱导宫颈癌SiHa细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与提高Caspase-3活性有关。

Caspase-l、caspase-3与大鼠脑水肿和脑损伤预后的关系

目的 研究天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 1(caspase 1)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3(caspase 3)在大鼠脑损伤中的作用及其与预后的关系。方法 雄性SD大鼠 30 2只 ,随机分为正常对照组、脑损伤组、二甲基亚砜 (DMSO)假治疗组、人工caspase 3选择性四肽底物 (DEVD)治疗组和人工caspase 1选择性四肽底物 (YVAD)治疗组。采用自由落体脑损伤模型 ,伤后经脑室分别注射caspase l、caspase 3选择性抑制剂z YVAD fmk、z DEVD fmk ,分别于脑外伤后不同时间点 ,用干湿重法检测脑含水量 ,用ABC法检测caspase 1、caspase 3活性片断P2 0的表达 ,并在伤后 2 4小时和 1周对大鼠进行神经功能评分。结果 大鼠脑外伤后 ,均存在脑水肿和较高水平的caspase l、caspase 3活性片断的表达及神经功能损害。Caspase 1抑制剂z YVAD fmk可抑制caspase l表达 ,并明显减轻脑水肿 ,减轻神经功能损害。Caspase 3抑制剂z DEVD fmk可抑制cas pase 3表达 ,并减轻神经功能损害。结论 caspase l可能通过介导炎症 ,增加脑水肿而在脑外伤继发性损害中起重要作用 ,适当抑制caspase活性可望为脑损伤治疗提供一种新的途径。

大鼠创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的动态变化及其与caspase-3基因表达的关系

目的探讨创伤性脑损伤（TBI）后神经细胞凋亡的变化规律及其与caspase-3基因表达的关系。方法成年健康封闭群sD大鼠120只，随机分为对照组8只、损伤组和抑制物组各56只。Feeney法致伤，抑制物组伤后脑内注射5／agcaspase-3抑制剂z—DEVD—fmk。分别在伤后1，6，24，48h和3，7，14d处死取材（每个分析时相点8只大鼠），采集伤灶中心皮质、皮层下白质、海马、齿状回，以及对侧相应部位脑组织，应用原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸（dUrP）标记法（TUNEL法）和流式细胞术检测神经细胞凋亡的变化；免疫组化法、蛋白印迹（westernblot）和半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR），检测caspase-3蛋白和mRNA的表达；并借助荧光分析试剂盒检测caspase-3活性的变化。所得数据采用SPSS10．1统计软件包进行Spearman等级相关分析和方差分析（SNK-q检验）。结果伤后伤侧各脑区神经细胞凋亡指数（AI）和细胞凋亡百分率（AP）迅速增高，24～48h达峰值，随后逐渐下降，但伤后14d仍高于正常（P〈0．01）。伤后caspase-3蛋白和mRNA的表达明显增加，caspase-3活性迅速上升，峰值在24～48h。其中伤后24h伤侧海马区caspase-3蛋白谱密度与对照组相比增加1484％，caspase-3mRNA的表达量增加1043％，caspase-3活性增加148％；伤后48h伤灶皮层下白质caspase．3蛋白谱密度增加1690％，caspase-3mRNA的表达量增加1181％，caspase-3活性增加183％。Westernblot显示，伤后caspase-3原酶及p17活性亚单位的表达均增强。抑制物组caspase-3蛋白和mRNA的表达均明显下降，caspase-3活性明显降低；同时，AI值和AP值也明显降低。统计学相关分析发现，伤后神经细胞凋亡与caspase-3mRNA和蛋白的表达间呈正相关（r=0．821和r=0．638，P〈0．01），伤后caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达间呈正相关（r=0．945，P〈0．01）。结论急性TBI后神经细胞凋亡的发生与caspase-3的激活有关；神经细胞凋亡与其调节基因easpase，3的表达间具有一致性，TBI对caspase-3的调节发生在转录水平前的某一环节。easpase-3抑制剂能有效地阻断TBI后的神经细胞凋亡。