肾综合征出血热病毒Z10株在Vero细胞上传代适应和增殖动态

目的为了肾综合征出血热病毒滴度达到规模化生产要求。方法将肾综合征出血热病毒 Ｚ１０ 株在Ｖｅｒｏ细胞上传代适应，不同时间取样，测定病毒滴度。结果从第２代即可稳定达到高滴度。转瓶培养比静 止培养的病毒峰值出现的更早，第 ４ ｄ即可达到１０８／ｍｌ以上，且可多次收液。结论初步确立了疫苗生产中病毒制 备工艺。

汉坦病毒Z10株M片段全基因序列分析

目的 测定我国疫苗株Z10的M片段全基因序列 ,了解其分子基础 ,并分析其与其它汉坦病毒株的遗传学差异。方法 从Z10株病毒感染的细胞提取总RNA ,将逆转录PCR扩增的产物纯化后克隆于T载体并进行序列测定 ,应用DNASTAR软件分析比较。结果 Z10株M片段的全基因序列共 36 15个核苷酸 ,四种核苷酸的比例分别为A 30 15 % ,T 2 9 41% ,G 2 1 72 % ,C 18 73%。以第二种读码方式推导出其最大读码框架从 41到 34 48,共编码 1135个氨基酸。序列同源分析表明 ,Z10株与HTN型核苷酸同源性为 83 6 %～ 87 4% ,与SEO ,DOB和Thai型为 6 9 5 %～ 70 8% ,而与PUU和HPS各型病毒同源性仅为 5 7 6 %～ 5 9 9%。氨基酸同源分析Z10株与HTN型同源性高达 94 2 %～96 0 % ,与SEO ,DOB和Thai型为 73 3%～ 76 6 % ,而与PUU和HPS各型病毒同源仅为 5 3 2 %～5 6 3%。绘出了核苷酸和氨基酸的系统发生树。结论 Z10株为不同于已报告M片段全基因序列的HTN型国内外毒株的另一亚型 ,并具有 16个独特的氨基酸。

汉坦病毒Z10株全基因序列的测定及分析

目的 测定我国肾综合征出血热疫苗株Z10的全基因序列 ,了解其分子结构特征 ,并分析Z10与其他汉坦病毒株的遗传学差异 ,为疫苗生产提供依据。方法 从Z10病毒感染的细胞提取总RNA ,将逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增的产物纯化后克隆于T载体并进行序列测定 ,应用DNAS TAR软件分析比较。结果 序列测定表明 ,Z10株L ,M ,S片段的全基因序列分别由 6 5 5 3,36 15 ,170 1个核苷酸组成 ,单一读码框架分别编码 2 15 1,1135 ,42 9个氨基酸。基因比较分析表明 ,Z10株与HTN型外其他汉坦病毒同源性较低 ,与HTN型病毒接近 ,但与HTN型病毒核苷酸序列的同源性亦仅为 83 6 %～ 87 4% ,而其氨基酸序列的同源性高达 94 2 %～ 96 % ,据此绘出了三个片段的核苷酸和氨基酸的种系发生树。结论 测定了Z10株的全基因组序列 ,首次发现Z10株为已报道的HTN型中的另一亚型。

肾综合征出血热疫苗株Z10和汉坦病毒西安分离株XAAa10091712亲缘关系以及免疫效果研究

目的研究目前使用的双价肾综合征出血热疫苗构成株Z10与汉坦病毒西安分离株XAAa10091712的相互关系，为西安地区肾综合征出血热防治提供依据。方法通过比对疫苗构成株Z10和西安分离株核苷酸和氨基酸序列差异以及疫苗注射后产生抗体对西安分离株中和作用研究两者相互关系。结果基因组序列比对显示两毒株S，M和L片段核苷酸相似性为89．5％，87．8％和87．8％，核蛋白、糖蛋白和RNA聚合酶相似性分剐为98．4％，93．2％和96．3％；疫苗接种后产生针对N蛋白IgG类抗体在免疫前、基础免疫后、加强后分别为25．50％，62．54％和89．06％；针对N蛋白IgG抗体阳性标本中中和抗体阳性率为20．0％。结论疫苗株与西安分离株基因组序列相似性均在90%以下，糖蛋白氨基酸序列差异为6．8％；疫苗接种后针对西安分离株产生中和抗体阳性率较低。