lncRNA ZBED3-AS1通过吸附miR-512-5p调控DACH1抑制前列腺癌细胞的增殖和迁移

目的分析长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA)ZBED3-AS1通过调节miR-512-5p在前列腺癌发生、发展中的作用。方法qRT-PCR技术检测67例前列腺癌组织及相应癌旁正常组织中ZBED3-AS1的表达并分析前列腺癌细胞株及永生化前列腺上皮细胞中ZBED3-AS1的表达。将表达最低的细胞根据随机数字法分为阴性对照组(转染阴性对照质粒)和ZBED3-AS1组(转染表达ZBED3-AS1的质粒)。WST-1法和Transwell法分析细胞增殖和迁移能力。生物信息学预测ZBED3-AS1的靶基因。qRT-PCR技术分析两组细胞中ZBED3-AS1和靶基因的表达。Western blot法检测靶基因蛋白的表达。结果前列腺癌组织和相应癌旁组织中ZBED3-AS1的表达量分别为0.85±0.26和4.33±0.88(t=18.79,P<0.01)。前列腺癌细胞中ZBED3-AS1的表达低于永生化前列腺上皮细胞(P<0.05),在DU-145中的表达最低(P<0.01)。ZBED3-AS1组中ZBED3-AS1的表达显著增加(P<0.01)。第3天,ZBED3-AS1组细胞OD值低于阴性对照组(P<0.05)。阴性对照组和ZBED3-AS1组DU-145细胞的迁移数分别为189.80±23.07和93.28±13.16(t=3.63,P<0.01)。生物信息学显示,ZBED3-AS1可互补结合miR-512-5p,miR-512-5p可互补结合细胞命运决定因子(DACH1)mRNA。ZBED3-AS1组miR-512-5p的表达显著降低(P<0.01),DACH1 mRNA和蛋白的表达显著增加(P<0.01)。结论前列腺癌组织和细胞中lncRNA ZBED3-AS1的表达水平降低,ZBED3-AS1可能通过吸附miR-512-5p调控DACH1抑制前列腺癌细胞的增殖和迁移。

菟丝子黄酮通过调控ZBED3-AS1影响成骨细胞凋亡

目的:探讨菟丝子黄酮(TFCC)对长链非编码RNA含BED型锌指蛋白3反义RNA 1(ZBED3-AS1)表达和成骨细胞凋亡的影响,旨在阐明TFCC调控成骨细胞凋亡的分子机制。方法:将成骨样细胞株UMR-106分为对照组、肿瘤坏死因子α(TNF-α)组、TNF-α+TFCC组、TNF-α+pcDNA3.1组、TNF-α+pcDNA3.1-ZBED3-AS1组、TNF-α+TFCC-5+si-NC组、TNF-α+TFCC-5+si-ZBED3-AS1组、TNF-α+TFCC-5+pcDNA3.1组和TNF-α+TFCC-5+pcDNA3.1-ZBED3-AS1组。采用CCK-8法和集落形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测caspase-3和p21的表达;RT-qPCR检测ZBED3-AS1的表达。结果:TNF-α处理后UMR-106细胞的活力和集落形成能力降低,凋亡率升高,p21和caspase-3表达升高,ZBED3-AS1表达降低(P<0.05)。TFCC(1、10和100μg/L)干预或过表达ZBED3-AS1后,UMR-106细胞的活力和集落形成能力升高,凋亡率降低,ZBED3-AS1表达增加,从而减轻TNF-α处理对UMR-106细胞增殖和凋亡的影响(P<0.05)。抑制ZBED3-AS1表达减轻了TFCC对TNF-α作用下UMR-106细胞增殖和凋亡的影响(P<0.05)。过表达ZBED3-AS1增强了TFCC对TNF-α作用下UMR-106细胞增殖和凋亡的影响(P<0.05)。结论:TFCC通过上调ZBED3-AS1表达可促进成骨细胞增殖,抑制TNF-α诱导的成骨细胞凋亡。

LncRNA ZBED3-AS1/miR-339-5p/Notch 1轴调控骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化

目的探究LncRNA ZBED3-AS1调控miR-339-5p/Notch 1在骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化中的作用。方法构建假手术(Sham)组和模型(Model)组大鼠模型,对大鼠的骨密度进行检查观测大鼠建模情况。分离大鼠成骨细胞,qRT-PCR检测细胞中ZBED3-AS1、miR-339-5p的表达。对Sham组和Model组大鼠成骨细胞进行分组后转染。CCK8、茜素红(AR-S)染色、碱性磷酸酶(ALP)染色检测各组细胞增殖分化能力。FISH实验测定ZBED3-AS1在细胞中的分布。双荧光素酶报告证实ZBED3-AS1与miR-339-5p及miR-339-5p和Notch 1之间的关系。Western blot检测Notch通路相关因子的表达。结果检测股骨骨密度发现,Model组大鼠骨密度明显低于Sham组大鼠(P=0.0 057)。与Sham组大鼠比较,Model组大鼠成骨细胞中ZBED3-AS1呈低表达,而miR-339-5p呈高表达(均P<0.05)。过表达ZBED3-AS1能促进成骨细胞的增殖分化;而敲减ZBED3-AS1则能抑制成骨细胞增殖分化(均P<0.05)。ZBED3-AS1作为ceRNA调控miR-339-5p(均P<0.05)。过表达miR-339-5p能抑制成骨细胞的增殖分化能力,而该作用可被ZBED3-AS1过表达部分挽救。Notch 1被证实为miR-339-5p的作用靶点,且干预ZBED3-AS1/miR-339-5p的表达能影响Notch 1的蛋白表达,ZBED3-AS1/miR-339-5p对成骨细胞的调控可能是通过Notch通路实现的。结论 ZBED3-AS1能作为ceRNA调控miR-339-5p,进而影响骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化。