低温胁迫下草鱼ZC-7901细胞系内丙二醛含量的变化

在不同低温胁迫时间下 ,对草鱼 (Ctenopharyngodonidellus)吻端细胞系ZC - 790 1细胞内丙二醛含量的变化进行了研究 ,并探讨了其耐寒机理 .结果表明 ,与对照 ( 2 8℃ )相比 ,2～ 3℃低温胁迫 6h、12h、2 4h、4 8h、72h时 ,草鱼ZC - 790 1细胞内丙二醛 (MDA)含量在低温 12h前逐渐增加 ,之后其含量逐渐下降 ,但仍高于对照组 .结果提示 ,在低温胁迫下草鱼ZC - 790 1细胞内MDA的含量仍能保持较低的水平 。

瘦素对胃癌细胞系SGC7901增殖和凋亡的影响

目的 观察人胃癌细胞系SGC7901瘦素及瘦素受体的表达及瘦素对SGC7901增殖及凋亡的影响。方 法 免疫组化和RT-PCR检测SGC7901瘦素和瘦素受体的表达,噻唑蓝比色实验观察瘦素对SGC7901的增殖 作用,流式细胞仪检测瘦素对细胞周期及凋亡的影响,RT-PCR方法半定量检测瘦素对促凋亡基因bax mRNA 表达的影响。结果SGC7901既表达瘦素又表达瘦素受体,重组瘦素呈剂量依赖性地促进细胞的增殖,并明显 抑制细胞的凋亡,瘦素可抑制促凋亡基因bax mRNA的表达。结论 瘦素可能以自分泌方式调节人胃癌细胞系 SGC7901的增殖及凋亡。

亚硒酸钠抑制人胃癌SGC-7901细胞系增殖和hTERT的表达

目的探讨亚硒酸钠对人胃癌SGC-7901细胞系增殖和hTERT表达的作用及其机制。方法用含亚硒酸钠(0μmol/L、0.5μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、8μmol/L)的培养液培养SGC-7901细胞24h、48h、72h、96h,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测亚硒酸钠对SGC-7901的增殖的影响,免疫细胞化学SABC法和RT-PCR检测亚硒酸钠对人胃癌细胞系SGC-7901hTERT蛋白和hTERTmRNA表达的作用。结果亚硒酸钠对人胃癌SGC-7901细胞具有明显的抑制作用,且随亚硒酸钠浓度的增加和培养时间的延长对SGC-7901细胞生长抑制作用逐渐加强。SGC-7901细胞hTERT蛋白免疫细胞化学染色的平均吸光度(AA),随0.5μmol/L、2.5μmol/L亚硒酸钠组培养时间增加逐渐降低,96h时明显低于空白对照组(P<0.01),5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组的AA每个时间点均比空白对照组明显降低(P<0.01)。0.5μmol/L亚硒酸钠组SGC-7901 hTERTmRNA的表达无明显的变化;在2.5μmol/L亚硒酸钠组则随时间增加逐渐降低,48h后明显低于空白对照组;5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组均明显低于空白对照组(P<0.01),72h后明显低于其他低硒组。结论亚硒酸钠抑制人胃癌SGC-7901细胞生长,下调hTERT表达。

RNA干扰沉默Twist基因对人胃癌细胞系SGC7901细胞增殖能力的影响

目的探讨Twist基因沉默后对人胃癌SGC7901细胞增殖能力的影响。方法利用脂质体转染法将携带有Twist干扰片段的pGen-esil/Twist载体导入人胃癌SGC7901细胞,G418筛选阳性克隆,经RT-PCR,Western印迹法检测干扰效果。通过绘制生长曲线、流式细胞术检测细胞周期等反映Twist对SGC7901细胞增殖能力的影响。结果生长曲线结果显示Twist基因沉默组细胞生长速度较两对照组缓慢。细胞周期结果显示Twist基因沉默组S期细胞数明显较对照组减少,增殖能力下降。结论Twist基因沉默后可抑制SGC7901细胞的分裂增殖,可能成为临床胃癌基因治疗的新靶点。

人胃癌细胞系SGC-7901放射敏感性及异质性的研究

目的研究人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１及其克隆亚系的放射敏感性。方法ＳＧＣ７９０１细胞株及其两个克隆亚系（大集落、小集落）的细胞用８ＭｅＶ直线加速器电子束以不同剂量照射，分别经４８小时、７２小时培养及集落培养后，计数并得出各组存活曲线。结果１．两个克隆亚系之间的Ｄ０值有显著差异（Ｐ＜００５）；２．大集落亚系与ＳＧＣ母系之间在集落形成实验中，其Ｄ０值有差异（Ｐ＜００５）。结论ＳＧＣ７９０１细胞系及其克隆亚系对放射的敏感性存在着异质性。

化疗药物对人胃癌SGC-7901细胞系端粒酶活性影响

目的 研究常见化疗药物对人胃癌SGC 790 1细胞系端粒酶活性影响。方法 MTT (噻唑蓝 )法测定化疗药物顺铂、丝裂霉素、阿霉素、 5 氟尿嘧啶、氟铁龙 (脱氧氟尿苷 )对人胃癌SGC 790 1细胞系毒性作用的半数抑制(IC5 0 )浓度 ;用TRAP ELISA法测定 4 0×IC5 0浓度化疗药物作用于SGC 790 1细胞 4h、 2 8h端粒酶活性及IC5 0浓度IC5 0化疗药物作用于SGC 790 1细胞 2 4h、 72h、 12 0h细胞端粒酶活性。结果 高浓度 ,低浓度顺铂、丝裂霉素对SGC 790 1细胞端粒酶活性有完全抑制作用 ;而阿霉素、 5 氟尿嘧啶、氟铁龙对SGC 790 1细胞端粒酶活性有部分抑制作用。结论 阿霉素、 5 氟尿嘧啶、氟铁龙对SGC 790 1细胞端粒酶活性有轻度抑制作用 ;顺铂、丝裂霉素能完全抑制端粒酶活性 。

奥曲肽抑制胃癌细胞系SGC-7901生长的实验研究

目的 研究奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1生长的抑制作用。方法 将奥曲肽注入胃癌细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT )法测定细胞生长抑制效应 ,将3 H -胸腺嘧啶核苷 (3 H -TdR )掺入试验测定奥曲肽对胃癌细胞DNA合成的影响 ,显微镜下观察胃癌细胞形态变化 ,应用流式细胞仪 (FCM )检测细胞周期 ,并采用TRAPPCR -ELISA法对胃癌细胞端粒酶活性进行检测。结果 奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1的生长及DNA合成均有抑制作用 ,显微镜下可见细胞变圆、变小、脱落 ,FCM检测结果显示奥曲肽作用后 ,G0 /G1期细胞比例增高 ,S期、G2 /M期细胞比例下降 ,端粒酶活性显著受抑制。结论 奥曲肽能明显抑制胃癌细胞系SGC -790 1的生长 ,形成G0 /G1期阻滞 。

尼美舒利对人SGC-7901细胞系增殖及hTERT-mRNA表达的研究

目的探讨选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对人胃癌细胞系SGC-7901增殖和端粒酶hTERT-mRNA表达的作用。方法体外培养人胃癌细胞系SGC-7901后,加入不同浓度的尼美舒利(0、50、100、200、400μmol/L)进行共同培养。用相差显微镜动态地观察经尼美舒利处理后细胞的形态变化;MTT法检测人胃癌细胞系SGC-7901的增殖;RT-PCR法检测细胞端粒酶hTERT-mRNA表达。结果选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利作用于人胃癌细胞系SGC-7901后,细胞增殖受到明显的抑制,呈时间和剂量依赖性,并且端粒酶hTERT-mRNA的表达降低呈剂量依赖关系,与对照组比较差异有显著性(P<0.05).结论尼美舒利能够抑制人胃癌细胞系的hTERT-mRNA的表达,从而抑制其生长,这表明尼美舒利可能是种新的端粒酶抑制剂。

D-氨基葡萄糖衍生物对人胃癌细胞系SGC-7901增生的影响

目的:观察D-氨基葡萄糖衍生物体外对人胃癌SGC- 7901细胞增生的影响,探讨其可能作用机制. 方法:采用MTT法,筛选药物作用最佳浓度.用流式细胞仪分析诱导凋亡前后的细胞DNA含量,透射电镜观察凋亡细胞的超微结构.免疫组化测定CD44表达. 结果:D-氨基葡萄糖衍生物能明显抑制胃癌细胞的增长(P<0.01),MTT法显示抑制程度具有时间和剂量效应关系,统计组间比较差异有显著性(P<0.01);流式细胞仪分析可见亚二倍体(Sub-G1)凋亡峰;电镜观察到凋亡细胞的典型变化,免疫组化及光密度检测示CD44表达下降(216.5±7.0 vs 190.0±14.2,P=0.000). 结论:D-氨基葡萄糖衍生物通过诱导肿瘤细胞凋亡而抑制人胃癌SGC-7901细胞增生,同时还有下调CD44的作用.

一氧化氮抑制胃癌细胞系SGC-7901增殖及C-FOS和C-JUN表达

目的探讨一氧化氮(NO)对胃癌细胞系SGC-7901增殖的影响及其机制。方法MTT法测定细胞的生长,RT-PCR和W estern印迹法检测C-FOS和C-JUN的mRNA和蛋白表达。结果硝普钠(SNP)抑制SGC-7901细胞的生长(P<0.05),并呈剂量和时间性降低C-FOS和C-JUNmRNA及蛋白表达。结论NO可能通过下调C-FOS和C-JUN的表达而抑制胃癌细胞的增殖。

人端粒酶反义寡脱氧核苷酸对胃癌细胞系SGC-7901的生长抑制和诱导凋亡的研究

端粒酶活性在胃癌组织中表达率很高,在正常胃黏膜组织中则基本不表达。因此,以端粒酶为靶点的反义治疗有望成为胃癌治疗的有效途径之一。目的:检测特定的人端粒酶反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN)对胃癌细胞系SGC-7901生长的抑制作用,并证明其主要机制为抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡。方法:用改良的聚合酶链反应(PCR)-端粒重复扩增协议(TRAP)法定量检测端粒酶AS-ODN作用前后SGC-7901细胞的端粒酶活性;台盼蓝染色法观察SGC-7901细胞活力;光镜和电镜观察凋亡细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:SGC-7901细胞有端粒酶活性表达。不同浓度的端粒酶AS-ODN作用于SGC-7901细胞48～96h后,细胞端粒酶活性和生长受到明显抑制,光镜、电镜观察和流式细胞仪检测均证实有细胞凋亡存在。错义AS-ODN(N-ODN)处理组SGC-7901细胞则无显著变化(P<0.05)。结论:端粒酶AS-ODN通过抑制胃癌细胞的端粒酶活性和诱导细胞凋亡,最终抑制胃癌细胞生长,其抑制作用呈剂量、时间依赖性和序列特异性。端粒酶AS-ODN对端粒酶活性的抑制比对细胞生长的抑制更敏感,两种抑制作用并不完全平行。

Y-27632抑制胃癌SGC-7901细胞系侵袭与转移

目的探讨Y-27632对胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响,及其作用机制是否是通过对SRF的调控来实现的。方法将细胞分为3组:1)对照组;2)Y-27632通路阻断剂组;3)siRNA-SRF-1107干扰组。各组分别转染、加药,孵育48 h。用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室和划痕实验检测细胞侵袭能力和迁移能力。Western blot法检测SRF、ROCK1、E-cadherin、β-catenin、F-actin、MRTF-A及Cyclin D1的表达。结果 Y-27632能显著抑制胃癌SGC-7901细胞的侵袭、迁移能力(P<0.05),而对其增殖没有影响。Y-27632能显著下调SGC-7901细胞的ROCK1、SRF、F-actin和MRTF-A的表达,上调E-cadherin的表达(P<0.05)。结论 Y-27632通过上调E-cadherin表达,同时阻断ROCK信号抑制SRF辅因子MRTF-A的表达,最终下调SRF转录水平,从而抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭、转移和迁移能力。

17β-雌二醇对胃癌细胞系SGC7901中NF-κB蛋白表达的影响

目的:观察不同浓度雌二醇处理不同时间的情况下,人胃癌细胞系SGC7901中NF-B蛋白表达量的变化,探讨胃癌中雌激素对NF-B蛋白表达可能存在的影响.方法:SGC7901细胞经10 10mol/L和10 8mol/L的17-雌二醇(17β-estradiol,E2)处理6 h、12 h和24 h,应用Western Blot及灰度分析的方法检测蛋白表达量的改变,平均光密度值采用t检验分析.结果:E2作用于SGC7901细胞6h后,NF-κB蛋白表达量在10 10mol/L浓度组与对照组无明显差异,而10 8mol/L浓度组明显高于对照组(P<0.05).12h后,NF-κB蛋白表达量在10 10mol/L浓度组和10 8mol/L浓度组明显低于对照组(P<0.05).24 h后,NF-κB蛋白表达量在10 10mol/L浓度组和10 8mol/L浓度组低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05).结论:雌激素可对胃癌细胞系SGC7901中NF-κB蛋白表达量产生影响.

Fas抗体对人胃癌SCG—7901细胞系生长的影响及可能的作用机制

探讨 Fas抗体对人胃癌细胞系 SCG— 790 1生长的影响及其可能的作用机制。采用免疫组织化学技术结合细胞计数法观察 Fas抗体作用 48h后 ,人胃癌细胞中 p5 3、 PCNA的表达率的变化 ,以 PCNA阳性表达率作为细胞的增殖指数 ;用流式细胞技术观测 Fas抗体作用 48h后细胞周期的改变 ,并与未用 Fas抗体的对照组进行对比。所得数据分别用 χ2或 μ检验进行统计学处理。结果显示 :实验组人胃癌细胞 PCNA增殖指数 (6 5 .5 % )明显低于对照组 (89.35 % ) ,二者相比较差异显著 (P<0 .0 1) ;而 p5 3的阳性表达率实验组 (10 .0 % )较对照组 (0 .9% )明显增加 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。流式细胞仪检测结果显示 :实验组 G1期细胞 (6 4.5 % )较对照组 (5 7.4% )明显增加 (P<0 .0 1,μ=5 .384) ,而 S期细胞 (2 7.4% )较对照组 (36 .1% )明显减少 (P<0 .0 1,μ=6 .95 6 6 ) ,两组间比较 G2期细胞无明显差异 (实验组 8.1% ,对照组为 6 .6 % ;P>0 .0 5 )。结果表明 Fas抗体具有显著的抑制人胃癌 SCG— 790 1细胞系生长的作用 ,此作用由 Fas抗原 / Fas抗体系统介导 ,且抑癌基因 p5

TOE1敲低和过表达稳转细胞系的构建及其在胃癌细胞中的定位分析

TOE1(target of Egr1)是DEDD家族脱腺苷酸化酶Caf1新发现的一个同工酶。构建TOE1敲低和过表达的稳转细胞系,并分析其在细胞内的定位,可为进一步研究TOE1基因的功能提供基础。首先将靶向沉默TOE1基因的shRNA序列插入慢病毒载体pLVX-shRNA2-Puro,构建敲低TOE1基因的慢病毒载体pLVX-shTOE1。然后通过PCR扩增TOE1基因序列克隆至慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro,构建TOE1基因过表达的慢病毒载体pCDH-TOE1。同时构建pEGFPTOE1真核表达载体,转染人胃癌细胞SGC-7901,激光共聚焦显微镜观察TOE1的亚细胞定位。慢病毒包装完成后分别感染SGC-7901细胞,用嘌呤霉素筛选稳定沉默TOE1的细胞系SGC-7901-shTOE1和稳定过表达TOE1的细胞系SGC-7901-oeTOE1,接着通过RT-qPCR和Western blot技术分别验证稳转细胞系中TOE1在mRNA和蛋白水平的表达水平。鉴定结果表明,SGC-7901-shTOE1细胞中TOE1的表达量显著降低,SGC-7901-oeTOE1细胞中TOE1的表达量明显升高,提示TOE1敲低和过表达的SGC-7901胃癌稳转细胞系构建成功。激光共聚焦显微镜观察结果显示,TOE1定位在细胞核中。研究结果为后期深入探究TOE1在胃癌中的功能以及作用机制奠定了基础。

mdr1基因在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系的表达

目的探讨mdr1在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系中的转录、翻译、P-gp功能变动趋势。方法培养SGC7901/VCR(人胃癌多药耐药细胞亚系)、SGC7901和BGC823(人胃腺癌细胞系)于RPMI1640,用RT-PCR和原位杂交检测mdr1mRNA的表达,用免疫印迹和免疫组化检测P-gp的表达,用流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积。结果半定量RT-PCR显示,SGC7901/VCRmdr1和β-actin吸收峰面积之比为5.63,SGC7901为0.61,BGC823为0.85。杂交信号呈紫蓝色颗粒,分布于胞质。免疫印迹显示SGC7901/VCRP-gp的表达最强,SGC7901最弱。P-gp阳性呈棕黄色颗粒,位于细胞膜上。SGC7901中,少数细胞P-gp表达极强。SGC7901/VCR平均光密度为(1.8310±0.8401),SGC7901为(0.3590±0.2512),BGC823为(0.6260±0.4996)(P<0.05)。SGC7901/VCR阿霉素特异荧光强度为(6.59±50.30),SGC7901为(35.88±14.55),BGC823为(27.44±7.06)(P<0.001)。结论在多药耐药相关的人胃癌细胞系SGC7901/VCR、SGC7901和BGC823中,mdr1基因均表达,P-gp具有药物外排功能,SGC7901/VCR的mdr1表达最强,SGC7901最弱,BGC823居中。

紫杉醇对人胃癌SGC7901细胞株增殖机制影响的实验研究

目的:观察紫杉醇(PA)抑制人胃癌SGC7901细胞增殖机制影响的实验研究。方法:采用MTT法、集落形成实验、流式细胞仪(FCM)和检测端粒酶活性来观察PA作用于人胃癌SGC7901细胞48h后对肿瘤细胞增殖机制、细胞生长抑制率和细胞周期的变化。结果:0.4、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0、64.0μg/mL的PA对人胃癌SGC7901细胞生长抑制率分别为10.9%、12.7%、24.1%、30.2%、32.5%、45.6%、59.3%和73.4%,PA处理后SGC7901细胞集落形成明显受到抑制,使细胞周期阻滞于S期,端粒酶活性水平下降。结论:PA对人胃癌SGC7901细胞的增殖抑制作用明显。

胃癌及胃腺癌细胞系中PPAR-γ的表达及其临床意义

目的观察过氧化酶体激活物增殖受体y（PPAR-y）在胃癌组织及胃腺癌细胞系（SGC7901）中的表达，并探讨其临床意义。方法采用免疫组化SP法，检测50例胃癌、癌旁组织以及SGC7901中PPAR-y的表达。结果PPAR-y蛋白在胃癌中的表达为58％，明显高于癌旁组织的表达（28％）（P〈0．01）。PPAR-y蛋白在SGC7901细胞系中呈阳性表达。PPAR-y蛋白在低分化癌组织、侵及浆膜层、有淋巴结转移（P〈0．01）和分期晚（P〈0．05）的胃癌组织中表达增高，与性别、年龄、肿瘤大小及肿瘤部位无关（P〉0．05）。结论PPAR-y蛋白在胃癌组织表达上调，提示PPAR-y蛋白不仅与胃癌的发生有关，而且与其进展有关，有可能作为检测胃癌的分子标志物并可提示其预后。