SNHG5调控的ZC3HAV1在胶质母细胞瘤的表达与作用

目的 探索ZC3HAV1在多形性胶质母细胞瘤(GBM)中的表达及作用。方法 收集35例于2018年1月-2020年10月于河北医科大学第二医院手术治疗的胶质母细胞瘤患者肿瘤标本(肿瘤组)及同期重度颅脑创伤患者正常脑组织标本(对照组)20例,利用Western blot与PCR方法检测两组ZC3HAV1的表达水平;通过慢病毒转染U87细胞下调ZC3HAV1的表达水平,再利用CCK、Transwell与流式测凋亡实验验证ZC3HAV1低表达对GBM细胞增殖、侵袭与凋亡的作用;利用PCR检测35例肿瘤组织中SNHG5与ZC3HAV1的表达水平并分析两者表达的相关性;通过pcDNA及siRNA转染U87细胞上调或下调中SNHG5的表达水平,再利用Western blot检测ZC3HAV1的表达水平的变化来探索在GBM中SNHG5对ZC3HAV1表达的影响。结果 肿瘤组中ZC3HAV1的表达水平显著高于对照组(P<0.05);下调U87细胞中ZC3HAV1的表达水平可有效抑制U87细胞的增殖、侵袭并促进其细胞凋亡。GBM标本组织中SNHG5与ZC3HAV1的表达水平呈正相关,抬高U87细胞中SNHG5表达后3HAV1ZC的表达水平显著上升,下调U87细胞中SNHG5表达后ZC3HAV1表达水平明显下降(P<0.05)。结论 ZC3HAV1在多形性胶质母细胞瘤呈显著高表达并促进肿瘤的发生与进展,在胶质母细胞瘤中SNHG5可正向调控ZC3HAV1的表达。

环状RNAhsa＿circ＿0082626的特征分析及过表达载体构建

目的环状RNA是目前非编码RNA的研究热点,文章旨在研究由抗病毒基因ZC3HAV1基因转录而来的环状RNA hsa_circ_0082626的基本特征以及过表达载体的表达效果。方法利用反向剪切位点的验证、RNA酶消化试验和提取细胞质、细胞核RNA进行细胞内分布定位研究了hsa_circ_0082626的基本特征,RNA酶消化试验中将样品分为RNase R处理组与对照组,RNase R处理组加入20 U(2 U/μg)的RNase R,对照组用等量ddH2O替代,以此检测经RNA酶处理后的表达量变化。转染24、48和72 h后分别收集以转染重组质粒的细胞为过表达组、未经转染的细胞作为阴性对照组,RT-qPCR检测环状RNA表达效果。结果与对照组比较,RNase R处理组ZC3HAV1、GAPDH表达均降低(0.144±0.002 vs 1.000±0.016,0.772±0.058 vs 1.000±0.122,0.077±0.009 vs 1.000±0.164,P<0.05)。hsa_circ_0082626可以抵抗RNase R的处理,主要分布于细胞质。过表达组的hsa_circ_0082626表达量明显较阴性对照组明显增高,而且在转染48 h时的表达量最高(表达量约为对照组的1000倍)。结论成功分析了hsa_circ_0082626的反向剪切位点、RNA酶的抵抗性和在细胞中的表达定位等特征,证明了hsa_circ_0082626确实具有环状结构及成功构建了hsa_circ_0082626的过表达载体,为深入研究环状RNA hsa_circ_0082626的生物功能和机制提供了实验基础。