ZCCHC12对分化型甲状腺癌细胞上皮-间质转化和侵袭的作用及其机制

目的 探讨ZCCHC12对分化型甲状腺癌细胞上皮-间质转化和侵袭的作用及其机制。方法 选取2017年5月-2018年12月河北省人民医院收治的50例分化型甲状腺腺癌患者作为分化型甲状腺癌组,另选取该院同期50名健康体检者作为健康对照组。采用ELISA法检测血清中PKA/cAMP反应元素结合蛋白(CREB)和p21的含量。采用Western blotting检测HUM-CELL-0097、TPC-1和FTC-133细胞系中CREB和p21蛋白的相对表达量。取TPC-1细胞和FTC-133细胞,分别设置空白对照组(正常培养TPC-1或FTC-133细胞)、NC si组(转染non-specific siRNA)、ZCCHC12 si组(转染ZCCHC12siRNA)、ZCCHC12si+NCpc组(转染ZCCHC12siRNA后,转染pcDNA.3.1)、ZCCHC12si+CREBpc组(转染ZCCHC12 siRNA后,转染pcDNA.3.1-CREB)、ZCCHC12 si+NC si组(转染ZCCHC12 siRNA后,转染non-specific siRNA)、ZCCHC12si+p21si组(转染ZCCHC12siRNA后,转染p21siRNA),采用Westernblotting检测ZCCHC12、CREB、P21、E-cadherin和N-cadherin蛋白的相对表达量,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 与健康对照组比较,分化型甲状腺癌组血清中CREB含量升高(P<0.05),p21含量降低(P<0.01)。与HUM-CELL-0097细胞比较,TPC-1和FTC-133细胞中CREB含量升高(P<0.01),p21含量降低(P<0.01)。与NC si组比较,ZCCHC12 si组E-cadherin、p21蛋白相对表达量升高,CREB、N-cadherin蛋白相对表达量及细胞迁移数降低(P<0.01)。ZCCHC12 si+CREB pc组p21蛋白相对表达量较ZCCHC12si+NCpc组降低(P<0.01),逆转了干扰ZCCHC12对p21蛋白表达的促进作用。与ZCCHC12si+NCsi组比较,ZCCHC12 si+p21 si组E-cadherin蛋白相对表达量明显下降,N-cadherin蛋白相对表达量及细胞迁移数明显升高(P<0.01),逆转了干扰ZCCHC12对分化型甲状腺癌细胞上皮-间质转化和侵袭能力的抑制作用。结论 干扰ZCCHC12可通过CREB/p21信号通路有效抑制分化型甲状腺癌细胞的上皮-间质转化和侵袭,为分化型甲状腺癌的治疗提供了一定的理论基础。

ZCCHC12对甲状腺细胞恶性转化的影响与作用机制

目的分析含CCHC结构域的锌指蛋白12(ZCCHC12)在甲状腺癌组织与甲状腺癌细胞系中的表达,并探讨其对甲状腺细胞恶性转化的影响与机制。方法采用RT-PCR与Western blot检测30例甲状腺癌患者肿瘤组织和10例良性甲状腺组织以及甲状腺癌细胞系中ZCCHC12的表达。以ZCCHC12腺病毒载体或siRNA转染法处理甲状腺癌细胞,检测细胞增殖、侵袭能力以及相应分子的表达变化情况。结果与良性甲状腺组织相比,甲状腺癌肿瘤组织中ZCCHC12的mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05);同时与甲状腺滤泡上皮细胞HUM-CELL-0097相比,甲状腺癌细胞中ZCCHC12的MRNA和蛋白表达也明显升高(P<0.05)。ZCCHC12过表达后甲状腺癌细胞增殖与侵袭能力显著上升(P<0.05),相反,ZCCHC12沉默后其增殖和侵袭能力受到抑制(P<0.05)。与对照组相比,ZCCHC12过表达后细胞周期蛋白D(cyclin D)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平增加;ZCCHC12沉默后则降低(P<0.05)。结论ZCCHC12在甲状腺癌组织及细胞中表达升高,其过表达后甲状腺癌细胞增殖活力与侵袭能力上升。ZCCHC12异常表达可激活细胞周期相关蛋白及胞外基质相关酶的表达,加剧甲状腺细胞的恶性转化。

锌指蛋白12过表达促进甲状腺癌细胞的增殖并抑制其凋亡

目的探讨SMAD-相互作用锌指蛋白12(ZCCHC12)对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用Western blot检测30例甲状腺癌患者癌组织和癌旁组织中ZCCHC12的蛋白表达及细胞中cleaved caspase-3、caspase-9、BMP-2、p-SMAD1、SMAD1和ID3的蛋白表达。ZCCHC12过表达质粒pcDNA3.1-ZCCHC12或抑制质粒ZCCHC12 siRNA转染甲状腺癌细胞系CGTH W-3和FTC-133。MTT法检测细胞增殖。流式细胞仪检测细胞凋亡。结果ZCCHC12的表达在甲状腺癌组织较癌旁组织中显著增加(P<0.05)。ZCCHC12过表达显著增强了CGTH W-3和FTC-133的细胞增殖、降低了细胞凋亡、抑制了凋亡蛋白cleaved caspase-3和caspase-9的表达并升高了BMP-2、p-SMAD1和ID3的蛋白表达(P<0.05)。ZCCHC12抑制质粒则与过表达质粒作用相反。结论ZCCHC12通过调控BMPs/SMAD通路增强甲状腺癌细胞CGTH W-3和FTC-133的增殖并抑制其凋亡。