ZDHHC5对结肠癌细胞Ⅰ型干扰素表达和细胞增殖及迁移的调控作用

目的探讨ZDHHC5对Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)表达的调节作用以及对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法利用慢病毒感染和质粒瞬转技术对小鼠结肠癌细胞株MC38ova进行ZDHHC5敲低和过表达,并进行ZDHHC5和Zeste同源物增强子2(EZH2)双重敲低;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验检测MC38ova细胞株敲低和过表达ZDHHC5后IFN-Ⅰ表达水平,并检测同时敲低ZDHHC5和EZH2后IFN-Ⅰ表达水平变化;免疫共沉淀实验检测ZDHHC5与EZH2蛋白相互作用;细胞计数试剂盒(CCK 8)增殖实验、克隆形成实验和划痕实验检测MC38ova细胞株敲低ZDHHC5后细胞增殖和迁移能力变化。结果qRT-PCR结果显示,与NC-gfp组IFN-α(1.00±0.05)和IFN-β(1.00±0.06)mRNA水平相比,KD-ZDHHC5#1-gfp组IFN-α(5.72±0.27,t=29.56,P<0.001)和IFN-β(2.59±0.03,t=42.90,P<0.001)mRNA水平升高;与NC组IFN-α(1.00±0.13)和IFN-β(1.00±0.10)mRNA水平相比,KD-ZDHHC5#2组IFN-α(4.74±0.58,t=11.64,P=0.001)和IFN-β(3.85±0.34,t=13.97,P<0.001)mRNA水平升高;与OE-NC组IFN-α(1.00±0.07)和IFN-β(1.00±0.06)mRNA水平相比,OE-ZDHHC5组IFN-α(0.33±0.02,t=16.64,P<0.001)和IFN-β(0.47±0.03,t=14.29,P<0.001)mRNA水平降低;与KD-EZH2组IFN-α(1.00±0.16)mRNA水平相比,KD-EZH2+KD-ZDHHC5组IFN-α(1.82±0.06,t=8.15,P=0.001)mRNA水平升高。免疫共沉淀实验结果显示,FLAG-ZDHHC5能够结合HA-EZH2蛋白。CCK 8结果显示,与NC-gfp组相比,KD-ZDHHC5#1-gfp组细胞增殖能力降低(48 h,t=29.89,P<0.001;72 h,t=32.94,P<0.001);与NC组相比,KD-ZDHHC5#2组细胞增殖能力降低(48 h,t=20.95,P<0.001;72 h,t=28.67,P<0.001)。克隆形成实验结果显示,与NC-gfp组和NC组相比,KD-ZDHHC5#1-gfp组(t=11.44,P<0.001)和KD-ZDHHC5#2组(t=6.02,P=0.004)细胞增殖能力降低。划痕实验结果显示,与NC-gfp组和NC组相比,KD-ZDHHC5#1-gfp组(t=5.78,P=0.029)和KD-ZDHHC5#2组(t=15.22,P=0.004)细胞迁移能力降低。结论ZDHHC5通过与EZH2相互作用,抑制IFN-α和IFN-β表达,增强结肠癌细胞的增殖和迁移能力。