miR-200及其靶基因ZEB1/2在急性肺损伤后早期肺纤维化中上皮-间质转化(EMT)过程

目的观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱发小鼠急性肺损伤后早期肺纤维化过程中miR-200b/c及其靶基因ZEB1/2的表达变化.方法应用LPS 3次打击的方法构建小鼠急性肺损伤后早期肺纤维化模型,分别于造模后第3、7、14、21天处死小鼠,留取肺组织备用.各组小鼠肺组织切片行HE和Masson染色并在光学显微镜下观察病理改变;Real-time PCR检测肺组织miR-200b、miR-200c、ZEB1 m RNA、ZEB2 m RNA表达;Western blot检测肺组织ZEB1、ZEB2、E-cadherin、Vimentin、α-SMA蛋白表达.结果 (1)病理结果:与对照组相比,LPS处理后第3天肺组织胶原纤维开始沉积,随着时间延长,肺纤维化程度逐渐加重;(2)Real time-PCR结果:随着肺纤维化程度加重,miR-200b、miR-200c水平均呈下降趋势,第7、14、21天时均显著低于对照组(P<0.01);ZEB1 m RNA、ZEB2 m RNA水平呈上升趋势,且ZEB2 m RNA较ZEB1 m RNA表达增加更显著;(3)Western blot结果:随着急性肺损伤后肺纤维化的进展,ZEB1、ZEB2蛋白表达亦升高,与其m RNA表达变化相一致;上皮标志物E-cadherin蛋白表达逐渐减少,间质标志物Vimentin、α-SMA蛋白表达逐渐增多.结论在LPS诱发急性肺损伤后早期肺纤维化过程中miR-200b/c表达降低,并通过负性调控其靶控基因转录抑制因子ZEB1/2的表达促进上皮向间质转化.

miR-205通过下调ZEB1和ZEB2表达抑制肾小管上皮细胞转分化

目的探讨miR-205在肾小管上皮细胞转分化的作用机制。方法将miR-205 mimics和scrambled control分别转染HK-2转分化细胞株,采用real-time q PCR检测miR-205和ZEB1、E-cadherin、α-SMA mRNA的表达水平;运用Western blotting检测ZEB1、ZEB2、E-cadherin、α-SMA的表达水平。通过细胞免疫组化检测β-catenin的异位表达情况和E-cadherin的表达情况。结果miR-205 mimics转染HK-2转分化细胞株后,ZEB1和ZEB2的表达水平较高糖组得到大幅下调(P<0.01),而E-cadherin的表达水平较高糖组显著提高(P<0.01),同时间质细胞特征分子α-SMA的表达水平显著降低(P<0.01)。miR-205 mimics也显著抑制了HK-2转分化过程中β-catenin异位表达,在维持上皮细胞的形态方面也起着重要的作用。结论 miR-205可通过下调ZEB1和ZEB2的表达,抑制了肾小管上皮间质转分化进程。

HER-2通过ZEB1促进乳腺癌细胞上皮间质转化

背景与目的:人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)是表皮生长因子受体家族中的一员,它参与细胞多个生物过程,如细胞增殖、侵袭和凋亡等。有研究表明,HER-2与细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程相关,但具体机制有待进一步探讨,本研究旨在探讨HER-2对EMT的调节机制。方法:用Transwell小室模拟细胞的迁徙侵袭能力;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测目的基因的表达;用活性氧检测试剂盒检测细胞活性氧的水平。结果:Transwell小室模拟实验发现,HER-2过表达能促进乳腺癌细胞的侵袭转移;机制研究表明,HER-2能上调ZEB1,用si RNA降低ZEB1表达使HER-2过表达细胞的侵袭能力受损;此外,HER-2过表达乳腺癌细胞中活性氧水平较低。结论:HER-2可以上调ZEB1的表达而赋予乳腺癌细胞EMT相关特性,ZEB1可作为进一步研究HER-2与EMT调节关系的靶点。

软坚散结颗粒对人胃腺癌SGC-7901细胞EMT的抑制作用及相关机制

目的:上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)现象的发生发展是肿瘤转移的关键因素之一,对胃癌EMT现象的研究可能有助于控制胃癌转移。本课题旨在研究软坚散结方(RJSJ)对人胃腺癌SGC-7901细胞EMT的抑制作用并探讨相关机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法观察RJSJ对SGC-7901细胞的抑制作用;采用transwell方法观察RJSJ对SGC-7901细胞侵袭的抑制作用;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)观测SGC-7901细胞EMT过程中锌指E盒结合同源盒蛋白1(Zinc finger E-box binding homeobox 1,Zeb1),锌指E盒结合同源盒蛋白2(Zinc finger E-box binding homeobox 2,Zeb2)以及E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白的表达。结果:(1)MTT结果显示,不同浓度RJSJ组均能有效抑制SGC-7901细胞的增殖(P<0.05),RJSJ对SGC-7901细胞的抑制作用呈剂量和时间依赖。(2)transwell侵袭实验结果显示,不同质量浓度RJSJ(250,500,1 000 mg·L-1)对SGC-7901细胞的穿膜能力有不同程度的抑制作用(P<0.05)。(3)Real-time PCR和Western blot结果显示,与空白组比较,RJSJ各组均能使E-cadherin mRNA和蛋白表达增加,Zeb1,Zeb2mRNA和蛋白表达减少,其中RJSJ高剂量组能够明显上调E-cadherin mRNA和蛋白表达,下调Zeb1,Zeb2 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:RJSJ对SGC-7901细胞有直接的抑制作用;RJSJ对SGC-7901细胞EMT有抑制作用,其机制可能与下调Zeb1,Zeb2 mRNA及蛋白表达,上调E-cadherin mRNA及蛋白表达有关。