ZEB2蛋白表达和E-caderin蛋白在鼻咽癌转移中的临床意义

目的探讨ZEB2蛋白表达和E-caderin蛋白对鼻咽癌转移中价值,判断预后。方法应用免疫组化Maxvision TM法检测132例鼻咽癌患者鼻咽部活检病理标本的ZEB2表达和E-caderin蛋白情况,分析ZEB2的阳性和E-caderin蛋白表达情况与鼻咽癌患者临床病理特征和预后的关系。结果 ZEB2蛋白和E-caderin蛋白表达与淋巴结及远处转移转移密切相关,淋巴结转移者和远处转移患者ZEB2阳性和E-caderin蛋白表达率明显高于无淋巴结转移者; ZEB2蛋白和E-caderin蛋白阳性表达与鼻咽癌TNM分期显著相关。ZEB2蛋白与鼻咽癌病理分型显著相关。鼻咽癌组织的ZEB2蛋白和E-caderin蛋白阳性表达具有负相关性。结论鼻咽癌组织中ZEB2蛋白和E-caderin蛋白阳表达在可以反应患者的预后情况,与浸润密切相关。

卵巢癌组织中差异lncRNAs的筛选及其lncRNA ZEB2-AS1的表达分析

目的通过表达谱芯片筛选卵巢癌(OC)有价值的核心长链非编码RNAs(lncRNAs)分子,并进行表达验证和分析。方法收集宁夏医科大学总医院2018年1月至2019年6月OC组织36份,正常卵巢组织22份,以表达谱芯片检测差异表达lncRNAs和mRNAs分子,以real-time PCR验证lncRNAs表达,原位杂交验证关键核心lncRNA的表达,生物信息学分析lncRNA可能的功能。结果相比于正常组织,癌组织中共有4982个差异表达的lncRNA,以锌指E盒结合同源盒蛋白2-AS1(ZEB2-AS1)的高表达最为显著(P<0.05);ZEB2-AS1在肝癌、结肠癌和肾癌等多个癌组织中过表达;表达水平与肿瘤大小、病理分级、病理分型及临床分期均有相关性(P<0.05),且高表达导致总生存期和无病生存期降低(P<0.05)。ZEB2-AS1具有多个microRNA结合位点,与相应邻近基因ZEB2的表达情况一致。结论ZEB2-AS1在卵巢癌中异常表达,提示ZEB2-AS1具有重要的研究价值。

鼻咽癌组织中ZEB2、AnnexinA2、LMP2A的表达及其与预后情况、恶性分子的相关性

目的:研究鼻咽癌组织中ZEB2、膜联蛋白A2(AnnexinA2)、潜伏膜蛋白2A(LMP2A)的表达及其与预后情况、恶性分子的相关性。方法:选择2015年3月~2018年2月期间在徐汇区大华医院进行纤维鼻咽镜下局部组织活检的患者作为研究对象,根据活检后的病理学结果将符合鼻咽癌诊断的患者纳入鼻咽癌组、符合鼻黏膜炎症的患者纳入研究的对照组。收集活检组织并检测ZEB2、AnnexinA2、LMP2A以及增殖、侵袭相关恶性分子的mRNA表达量。结果:鼻咽癌组肿瘤组织中ZEB2、AnnexinA2、LMP2A、β-catenin、CyclinD1、iASPP、N-cadherin、PARP-1、MMP9的mRNA表达量显著高于对照组的鼻炎黏膜组织,RASSF1A、p21WAF1、E-cadherin、IFR5、TIMP1的mRNA表达量显著低于对照组的鼻炎黏膜组织;鼻咽癌组肿瘤组织中ZEB2、AnnexinA2、LMP2A的mRNA表达量与β-catenin、CyclinD1、iASPP、N-cadherin、PARP-1、MMP9呈正相关,与RASSF1A、p21WAF1、E-cadherin、IFR5、TIMP1呈负相关。结论:鼻咽癌组织中ZEB2、AnnexinA2、LMP2A的高表达与肿瘤分期及恶性分子表达的改变密切相关。

miR-198通过靶向ZEB2调控EMT过程抑制肝癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的探讨微小核糖核酸-198(miR-198)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织细胞中的表达及其对癌细胞增殖、迁移的影响及其相关机制。方法采用qRT-PCR检测miR-198在HCC组织及细胞(HepG2,Hep3G,MHCC97H,Huh7)中的表达情况;采用脂质体2000向Huh7细胞中单独转染miR-198 mimics,共转染miR-198 mimics和pcDNA3.1-ZEB2;生物信息学网站预测miR-198的潜在靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证;采用Western blot检测E盒结合锌指蛋白2(E-box binding zinc finger protein 2,ZEB2)及上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transformation,EMT)相关蛋白表达;CCK-8法和细胞划痕实验检测Huh7细胞增殖和迁移能力。结果20例HCC组织中miR-198相对表达量(0.354±0.022)明显低于邻近正常组织(4.762±1.135),差异有统计学意义(t=17.365,P<0.001)。HCC细胞系HepG2(0.589±0.103),Hep3G(0.495±0.086),MHCC97H(0.558±0.056)和Huh7(0.362±0.045)中miR-198相对表达量较正常肝细胞LO2(1.823±0.125)显著降低(t=17.159,18.466,17.590,20.315,均P<0.05)。miR-198 mimics组细胞增殖(0.398±0.146 vs 0.691±0.213)和迁移能力(20.012±2.103 vs 84.032±6.512)较对照组明显降低(t=1.965,52.459,均P<0.001)。miR-198 mimics组细胞中E-cadherin表达较对照组明显升高,N-cadherin和Vimentin表达较对照组明显降低(t=18.478,17.550,19.706,均P<0.01)。ZEB2是miR-198的靶基因,miR-198负调控ZEB2。20例HCC组织中ZEB2相对表达量(3.621±1.143)明显高于邻近正常组织(0.736±0.030),差异有统计学意义(t=11.284,P<0.001),与miR-198表达呈负相关(r=-0.702,P<0.05)。共转染过表达ZEB2逆转了miR-198 mimics对HCC细胞增殖、迁移和EMT的抑制作用。结论miR-198在HCC组织和细胞中表达下调,miR-198通过靶向负调控ZEB2的表达抑制Huh7细胞的增殖和迁移。

人胃癌细胞BGC823中miR-200c靶基因产物波形蛋白的检测及功能研究

目的:采用RNA靶向干扰技术,研究人胃癌细胞BGC823中微小RNA(microRNA,miRNA,miR)-200c的靶点锌指E盒增强子结合蛋白2(zinc finger E-box enhancer binding protein 2,ZEB2)基因的表达情况,并检测相关的波形蛋白基因表达情况,观察miR-200c对胃癌BGC823细胞功能的影响。方法:构建ZEB2基因表达的干扰质粒shZEB2,用Lipofectamine 2000转染胃癌BGC823细胞,用G418筛选稳定转染细胞株,进行实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测人BCG823细胞中ZEB2 mRNA、miR-200c及波形蛋白基因的表达水平,并用蛋白印迹法检测ZEB2蛋白、波形蛋白表达水平,噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测细胞增殖能力;Transwell小室检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果:干扰ZEB2分子表达后,miR-200c表达水平增高,而BGC823细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显下降。结论:ZEB2是miR-200c的检测靶点,干扰ZEB2后,胃癌细胞BGC823的增殖、迁移及侵袭能力明显降低。

基于TGF-β/smad信号通路探讨七方胃痛颗粒对人胃腺癌AGS细胞上皮间质转化的影响

目的:基于TGF-β/smad信号通路探讨七方胃痛颗粒对人胃腺癌AGS-EMT细胞ZEB2、E-cad及Vimentin的影响及可能的机制。方法:用TGF-β1处理AGS细胞建立上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)模型,将细胞分为空白组、七方胃痛颗粒(含药血清+EMT模型)组、LY2109761(TGF-β/Smad抑制剂+EMT模型)组,用RT-PCR、Western Blot法检测ZEB2、E-cad及Vimentin的表达。结果:与空白组比较,七方胃痛颗粒及LY2109761干预后能上调E-cad蛋白及其mRNA的表达,下调ZEB2蛋白及其mRNA和Vimentin蛋白及其mRNA的表达(P<0.05),并呈时间依赖性。与七方胃痛颗粒组相比,LY2109761组ZEB2蛋白及其mRNA的表达明显下调(P<0.05)。结论:七方胃痛颗粒与LY2109761作用相似,其可能是通过抑制TGF-β1/Smad信号通路,上调E-cad表达,下调ZEB2及Vimentin表达,抑制EMT形成,从而抑制人胃腺癌AGS细胞的上皮-间质转化。