法洛四联症患者ZFPM2/FOG2基因编码区突变检测

目的 探讨心脏正常发育相关基因改变导致法洛四联症（TOF）的发生机制.方法 通过聚合酶链反应,并结合DNA测序分析方法检测散发106例TOF患者ZFPM2/FOG2基因编码区的突变或单核苷酸多态性位点.结果 在16例不同的患者ZFPM2/FOG2基因的外显子2、6、8上,分别发现多个位点基因改变,并将新发现的基因改变位点在110名健康人中进行验证,证实其改变位点均为突变位点.结论 ZFPM2/FOG2基因新位点的突变可能通过不同的机制进一步导致转录蛋白的改变,推测是法洛四联症发病的重要遗传基础.

鸡miR-17-92基因簇靶基因ZFPM2的鉴定及功能分析

miR-17-92基因簇在哺乳动物的许多生理和病理过程中发挥重要作用。本实验室前期研究发现,miR-17-92基因簇促进鸡前脂肪细胞的增殖,但其作用机制尚不清楚。为了揭示miR-17-92基因簇促进鸡前脂肪细胞增殖的作用机制,本研究采用CCK-8细胞增殖检测方法分析干扰ZFPM2对前脂肪细胞的影响,结果发现,干扰ZFPM2能显著促进鸡前脂肪细胞的增殖(P<0.01);与CCK-8分析结果相一致,干扰ZFPM2可致使细胞增殖标志基因PCNA、Ki67、Cyclin D1的mRNA表达量明显升高(P<0.01或P<0.05)。进一步对鸡ZFPM2基因进行生物信息学分析,发现该基因mRNA的3′UTR有两个区域存在miR-17-92基因簇4个成员(miR-17-5p、miR-20a、miR-19a及miR-19b)的潜在结合位点。为验证miR-17-92基因簇是否靶作用于鸡ZFPM2基因,构建了鸡ZFPM2基因3′UTR区的荧光素酶报告基因载体(野生型)(psi-CHECK2-ZFPM2-3′UTR-WT)及其突变型的荧光素酶报告基因载体(psi-CHECK2-ZFPM2-3′UTR-MUT)。报告基因活性分析显示,过表达mi-17-92基因簇能极显著地抑制野生型ZFPM2的报告基因活性(P<0.01);转染miR-17-5p、miR-20a及miR-19a的抑制剂均能显著地提高野生型ZFPM2报告基因的活性(P<0.01或P<0.05),但这些抑制剂对突变型ZFPM2报告基因的活性无明显影响。q RT-PCR分析发现,miR-17-5p、miR-19a及miR-20a的抑制剂能显著提高内源性ZFPM2基因mRNA的表达水平(P<0.01或P<0.05)。共转染分析发现,尽管差异不显著,但miR-17-5p和miR-19a的抑制剂均倾向于降低ZFPM2干扰片段的促细胞增殖作用。本研究结果表明:miR-17-92基因簇成员miR-17-5p、miR-20a、miR-19a及miR-19b靶作用于ZFPM2;miR-17-92基因簇至少部分通过抑制ZFPM2基因表达从而促进鸡前脂肪细胞的增殖。

法洛四联症与FOG2基因研究进展

法洛四联症(TOF)是最常见的发绀型先天性心脏病,发病率为1/3000,占所有先心病的10%,严重危害患儿健康。FOG2基因编码一种富含锌指结构的蛋白,与转录因子GATA4相互作用调控心脏锥干的发育。FOG2基因敲除的小鼠拥有类TOF样的心脏畸形,被认为是TOF的一种易感基因。TOF的形成和锥干发育异常有关,研究证实FOG2基因突变可以导致TOF。对ZFPM2/FOG2基因的研究可以帮助我们了解法洛四联症的病因,也可能促进法洛四联症的基因诊断和基因治疗。

FOG2基因在圆锥动脉干发育畸形患者中的外显子突变和拷贝数量变化的研究

目的了解FOG2(Friend of GATA4)基因外显子突变在中国圆锥动脉干发育畸形(CTD)病人中情况和比例,以及在TOF病人中,检测是否存在FOG2基因的拷贝数量变化。方法在南京市儿童医院收集从2004年1月到2006年1月的199例CTD病人的血样,包括145例法洛四联症(TOF),37例右心室双出口(DORV),17例大动脉错位(TGA)。100例健康患者作为对照组,利用一代测序检测FOG2基因的外显子突变,利用多重连接探针扩增(MLPA)检测FOG2基因的拷贝数量变化。结果在6个CTD病人发现了4种错义突变,分别在2个DORV病人中发现了p.V339I、p.A426T3个TOF病人中发现了p.M703L,在1个TOF病人中发现了p.T843。总比例为3.0%。所有的这些突变都并没有在100个正常人中发现。MLPA检测没有发现在TOF病人中存在着拷贝数量变化。结论 FOG2基因的外显子突变在中国CTD病人中是相对比较常见的,而FOG2基因的拷贝数量变化不是引起CTD的原因。但依然需要更大样本的研究来提高我们对FOG2基因在CTD中的作用的认识。

法乐四联征相关基因研究进展

法乐四联征(Fallot's tetrad)为一种多基因遗传性先天性心脏病,患者对该病的易感性与某些特殊染色体的特殊基因或基因群有关。因此,可能的相关基因的研究对研究法乐四联征的发生、发展和治疗具有重要意义。已有报道:CSX基因、Jagged1基因、DHCR7基因、FOG2基因以及21号染色体三体型与22q11微缺失等与法乐四联征有关。基因研究可以帮助我们了解法乐四联征的病因,也可能促进法乐四联征的基因诊断和基因治疗。