新型胰岛素增敏剂ZG02在大鼠肝微粒体中的代谢稳定性研究

目的:建立测定大鼠肝微粒体孵育体系中新型胰岛素增敏剂ZG02质量浓度的方法,并探讨ZG02的体外代谢稳定性。方法:分别将ZG02溶解于还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)启动的大鼠肝微粒体Ⅰ相孵育体系、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸(UDPGA)启动的Ⅱ相孵育体系以及二者联合启动的两相孵育体系中,置于37℃水浴中进行孵育,分别于孵育0、5、10、15、20、30、45 min时终止反应;以吲哚美辛为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定ZG02的质量浓度。色谱柱为Waters BEH C18,流动相为水(含0.01%甲酸)-乙腈(含0.01%甲酸)(35∶65,V/V),流速为0.4 mL/min,柱温为35℃,进样量为2μL;离子源为电喷雾离子源,以多反应监测模式进行负离子扫描,用于定量分析的离子对分别为m/z 458.115 9→323.073 0(ZG02)、m/z356.069 0→312.080 4(内标)。以孵育0 min时ZG02的质量浓度为参照,计算其在不同孵育体系中的剩余百分比、酶动力学参数和各代谢酶的贡献率。结果:ZG02检测质量浓度线性范围为1～400μg/L,定量下限为1μg/L,最低检测限为0.25μg/L;日内、日间RSD均小于10%,准确度为87.26%～94.58%,提取方法和基质效应均不影响待测物的测定。孵育45 min时,ZG02在Ⅰ相、Ⅱ相和两相孵育体系中的剩余百分比分别为(73.33±1.53)%、(50.63±3.42)%、(45.81±2.56)%,半衰期分别为67.28、30.26、25.57min,清除率分别为20.60、45.80、54.20μL/(mg·min),Ⅰ相、Ⅱ相代谢酶的贡献率分别为38.01%、84.50%。结论:本研究建立的UPLC-MS/MS法简便、快速、专属性强,可用于大鼠肝微粒体孵育体系中ZG02质量浓度的测定及体外代谢稳定性的研究。ZG02在Ⅰ、Ⅱ相孵育体系中的代谢稳定性中等,在两相孵育体系中的代谢稳定性较差,其代谢反应可能以Ⅱ相代谢酶介导的葡萄糖醛酸化结合反应为主。