四嗪二甲酰胺环糊精包合物制备研究

目的:制备四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)环糊精包合物,对其质量进行表征。方法:采用饱和水溶液法制备四嗪二甲酰胺的甲基-β-环糊精包合物体系,通过高效液相色谱法检测药物含量,通过扫描电镜、差示扫描量热分析、包合率和溶出度对包合物质量进行考察。结果:四嗪二甲酰胺含量检测在1.078~107.9μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,扫描电镜观察和差示扫描量热分析表明四嗪二甲酰胺以无定型状态被包埋在辅料空腔内,包合物中四嗪二甲酰胺的平均包合率为87.19%,包合物体系显著提高了四嗪二甲酰胺的溶出度,80 min累积溶出度为82.60%。结论:四嗪二甲酰胺环糊精包合物制备方法简便,包合率高,对体外溶出具有良好的改善效果。

四嗪二甲酰胺抑制胰腺癌细胞AsPC-1增殖及其机制研究

目的观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外对AsPC-1细胞增殖、凋亡及细胞周期阻滞的影响。方法以不同浓度ZGDHu-1(0、0.025、0.125、0.25、0.5、1.25、2.5、12.5μmol·L^(-1))体外作用于AsPC-1细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;瑞氏染色、Hoechst 33258荧光染色观察细胞形态;Annexin-V/PI双标记分析细胞凋亡率;流式细胞术分析细胞周期变化;Western blot分析凋亡相关蛋白的表达变化。结果 ZGDHu-1对AsPC-1细胞有明显的增殖抑制作用,呈现时间和浓度依赖性;ZGDHu-1能促进细胞凋亡,染色后出现典型的凋亡特征性改变,Annexin V^+/PI^-表达明显高于对照组(P<0.05);当ZGDHu-1浓度达到0.25μmol·L^(-1)时,开始阻滞AsPC-1细胞周期于G_2/M期,当浓度达1.25μmol·L^(-1)时,大部分细胞停留于G_2/M期;ZGDHu-1作用AsPC-1细胞48 h后,能明显激活caspase-3酶原;促凋亡蛋白Bax的表达水平较对照组升高。结论 ZGDHu-1在体外能够抑制AsPC-1的增殖,其主要通过激活caspase-3诱导细胞凋亡,同时ZGDHu-1能阻滞AsPC-1细胞周期于G_2/M期。

四嗪二甲酰胺体外诱导NB4细胞增殖、凋亡与分化作用的研究

为了观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)对白血病细胞株NB4的增殖、分化和凋亡作用,并对其作用机制进行初步探讨。将不同浓度的ZGDHu-1与NB4细胞在体外培养,并以全反式维甲酸作阳性药物对照,观察ZGDHu-1对NB4细胞增殖抑制、凋亡和分化的作用。用流式细胞术检测ZGDHu-1诱导NB4细胞分化和调亡过程中bcl-2和bax的表达变化,以及P38MAPK和STAT3磷酸化水平,同时利用实时荧光PCR定量检测端粒酶hTERT-mRNA表达的变化。结果表明:ZGDHu-1对NB4细胞增殖和活力抑制呈时间和剂量的量效关系,48和72小时的IC50分别为450和200ng/ml。NB4细胞经ZGDHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期,G0/1期细胞减少;细胞出现典型的形态改变,DNA片段化,亚G1峰检出并显著增加,Annexin-V/PI标记升高;Hoechst33258荧光染色后见凋亡细胞的特征性改变,这些均证实ZGDHu-1能诱导NB4细胞凋亡。NB4细胞经2-100ng/mlZGDHu-1作用3天后,细胞部分分化,NBT阳性率增加,细胞表面CD11b、CD13表达增高。ZGDHu-1作用NB4细胞后,bcl-2表达无变化,但bax表达显著增加,bax/bcl-2的比值升高,磷酸化P38MAPK表达增强,而磷酸化STAT3表达无变化,端粒酶hTERT-mRNA的表达随ZGDHu-1作用的浓度增加而显著下调。结论:ZGDHu-1能抑制NB4细胞增殖,诱导细胞分化,促进细胞凋亡,其机制可能与bax表达上调、P38MAPK活化增强和端粒酶逆转录酶受抑有关。

四嗪二甲酰胺抑制肺癌细胞株A549、EBC-1、MA增殖并诱导细胞凋亡的研究

目的 观察四嗪二甲酰胺（ZGDHu-1）体外抑制肺癌细胞株A549、EBC-1、MA增殖并诱导细胞凋亡作用.方法 将不同浓度的ZGDHu-1与A549、EBC-1、MA细胞在体外培养,用锥虫蓝染色、噻唑蓝（MTT）比色法、5＇-溴-2脱氧尿苷（HrdU）-酶联免疫吸附试验（ELISA）法观察ZGDHu-1对A549、EBC-1、MA细胞增殖的抑制作用 用细胞形态学、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记、Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡.结果 ZGDHu-1能抑制A549、EBC-1、MA细胞增殖和活力,呈现作用时间和剂量的量效关系.A549、EBC-1、MA细胞经ZGDHu-1作用48 h后,其IC50分别为165、106、210μg/L 72h后的IC50分别为42、18、90μg/L.大部分细胞阻滞于G2～M期 出现典型的细胞形态改变,亚G1峰检出并显著增加,Annexin-V＋/PI-表达升高,细胞内DNA片段含量增加,Hoechst33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变,证实ZGDHu-1能诱导A549、EBC-1、MA细胞凋亡.结论 ZGDHu-1能抑制A549、EBC-1、MA细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡.

四嗪二甲酰胺抑制T淋巴细胞活化的实验研究

目的研究四嗪二甲酰胺（ZGDHu-1）对植物血凝素（PHA）刺激的T淋巴细胞体外活化的影响，初步探讨其免疫抑制作用。方法从健康人外周血分离淋巴细胞，经PHA刺激诱导淋巴细胞活化，ZGDHu-1单独或联合环孢霉素A（CSA）作用24h、48h，检测各组T淋巴细胞的增殖、凋亡情况。采用流式细胞仪检测CD3^＋CD69^＋、CD3^＋CD25^＋、CD4^＋CD25^＋、CD8^＋CD25^＋和CD3^＋Fas^＋、CD4^＋Fas^＋、CD8^＋Fas^＋。用Annexin V／PI染色结合流式细胞术，分析淋巴细胞早期凋亡。酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养上清IL-2和转化生长因子-β1（TGF-β1）。结果ZGDHu-1能明显降低PHA活化的CD3^＋CD69^＋、CD3^＋CD25^＋、CD4^＋CD25^＋和CD3^＋Fas^＋、CD4^＋Fas^＋、Annexin V^＋／PI^-，并降低活化T淋巴细胞的IL-2分泌及促进TGF—β1的分泌，联合CSA应用效果更明显。结论ZGDHu—1能抑制T淋巴细胞活化，降低T淋巴细胞凋亡，和CSA联合具有一定的协同效应。