基于网络药理学和实验验证探讨小儿止哮平喘颗粒治疗儿童哮喘机制

目的基于网络药理学及动物实验验证探究小儿止哮平喘颗粒治疗儿童哮喘的潜在作用机制。方法检索TCMSP、BATMAN-TCM、UniProt数据库并筛选小儿止哮平喘颗粒的药物活性成分及其相关靶点,利用GeneCards、DisGeNET、OMIM数据库筛选儿童哮喘疾病靶点,将二者交集靶点通过STRING数据库获取靶点蛋白相互作用(PPI)关系,并导入Cytoscape3.8.0软件构建PPI网络,通过Metascape平台进行GO和KEGG通路富集分析,得出潜在作用通路。制备卵清蛋白致敏幼龄小鼠哮喘模型,予不同浓度小儿止哮平喘颗粒进行干预,通过HE染色和PAS染色评估组织病理学改变,通过Western blot验证网络药理学预测结果。结果筛选得到小儿止哮平喘颗粒活性成分154种,涉及儿童哮喘作用靶点283个。KEGG通路富集分析显示,交集靶点富集度高的信号通路有PI3K-Akt信号通路、TNF信号通路、MAPK信号通路等。活性成分-靶点-信号通路网络拓扑分析获得13个关键靶点。动物实验表明,小儿止哮平喘颗粒可明显改善卵清蛋白诱导的气道炎症和杯状细胞增生,并显著下调PI3K-Akt信号通路关键蛋白表达(P<0.05)。结论小儿止哮平喘颗粒治疗儿童哮喘通过多途径、多靶点发挥临床效用,其中PI3K-Akt信号通路可能是关键分子机制。

基于网络药理学探讨加味止哮平喘汤治疗支气管哮喘的作用机制

目的基于网络药理学探讨加味止哮平喘汤治疗支气管哮喘的作用机制。方法获取药物活性成分及关键靶点,然后运用相应数据库预测支气管哮喘的相关靶点,两者取交集后,运用STRING数据库和Cytoscape 3.9.1软件构建蛋白相互作用网络及药物-靶点网络,进行基因本体(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果筛选出核心药物的活性成分404个,交集靶点202个。GO功能分析得到180条分子功能,KEGG通路富集分析得到179条通路。结论通过网络药理学分析,预测了加味止哮平喘汤治疗支气管哮喘的作用机制,为临床研究提供了参考。

中药止哮平喘方抗哮喘豚鼠模型气道炎症的实验研究

[目的] 探讨中药止哮平喘方(主要由法半夏、瓜蒌皮、薤白、白芍、柴胡、黄芩、麻黄、枳壳、射干、甘草等中药组成)对哮喘豚鼠模型气道炎症的影响。[方法]复制卵蛋白致敏哮喘模型,观察支气管及肺的病理学改变;测量全血及肺泡灌洗液(BALF)中血细胞计数;免疫组织化学法测定外周血单核细胞(PBMC)中CD_4^+、CD_8^+T细胞的含量。[结果]病理研究显示哮喘模型组豚鼠气道周围大量炎性细胞浸润,以嗜酸性粒细胞(EOS)和淋巴细胞为主。哮喘模型组全血及BALF中炎性细胞数显著高于正常组(P<0.01);中药大剂量组和西药对照组炎性细胞数均显著降低(P<0.05或P<0.01)。哮喘模型组CD_4^+T细胞高于正常组(P<0.05);中药大剂量组和西药对照组CD_4^+ T细胞均有下降(与哮喘模型组比较,P<0.05)。[结论] 中药止哮平喘方能降低气道及外用血炎性细胞的数量,具有抗气道炎症的作用;降低CD_4^+细胞数量,相对增加CD_8^+ T细胞,使CD_4^+/CD_8^+恢复正常状态,从而起到调节其紊乱的免疫功能状态的作用,这可能是止哮平喘方抗气道炎症的作用机理之一。

中药止哮平喘方对哮喘豚鼠模型Th1/Th2细胞的影响

目的 :探讨中药止哮平喘方对哮喘豚鼠模型 Th1/ Th2细胞的影响。方法 :采用免疫组织化学 (组化 )方法测定模型动物外周单个核细胞 (PBMC)中 CD+ 4、CD+ 8T细胞的数量 ;用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TU NEL )标记的流式细胞术检测 T淋巴细胞凋亡情况。结果 :哮喘模型组 CD+ 4T细胞高于正常对照组(P<0 .0 5 ) ;中药大剂量组 CD+ 4T细胞显著降低 (P<0 .0 5 )、CD+ 8T细胞与正常对照组无明显差异 (P>0 .0 5 )。哮喘模型组 T淋巴细胞凋亡率显著低于正常对照组 (P<0 .0 1) ;中药大剂量组 T淋巴细胞凋亡率显著增加(P<0 .0 5 )。结论 :中药止哮平喘方可降低 CD+ 4细胞数量 ,具有抗气道炎症作用 ,其诱导 T淋巴细胞凋亡可能是主要机制之一。

基于网络药理学探讨小儿止哮平喘颗粒治疗支气管哮喘的作用机制

目的运用网络药理学探讨小儿止哮平喘颗粒治疗支气管哮喘的作用机制。方法通过TCMSP和SymMap数据库筛选小儿止哮平喘颗粒的活性成分及其作用靶点,通过NCBI Gene、GeneCards、TTD、KEGG、MalaCards、PharmGKB、OMIM等数据库筛选支气管哮喘的疾病相关靶点,获取活性成分作用靶点与疾病相关靶点的交集靶点(共同靶点),即小儿止哮平喘颗粒治疗支气管哮喘的潜在作用靶点。运用Cytoscape3.2.1软件构建“中药-成分-靶点-疾病”网络,将上述共同靶点导入String数据库,获取数据后在Cytoscape3.2.1软件中构建“成分靶点-疾病靶点”(T-D)网络,利用Metascape数据库进行GO和KEGG通路富集分析。结果共筛选得到289个活性成分及470个潜在作用靶点;获得豆甾-4-烯-3-酮、白矢车菊素、丹参醌酚I、飞燕草素、(E)-(4-甲基亚苄基)-(4-苯基三唑-1-基)胺、油酸等核心活性成分;RAC-α丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RAC-alpha serine/threonine-protein kinase,AKT1)、p53蛋白(cellular tumor antigen p53,TP53)、黏着连接蛋白β1(cateninβ1,CTNNβ1)、转录因子激活蛋白-1(transcription factor AP-1,JUN)、Harvery鼠肉瘤病毒癌基因(GTPase HRas,HRAS)、生长因子受体结合蛋白2(growth factor receptor-bound protein 2,GRB2)、过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARG)等核心靶点;筛选得到AGE-RAGE信号通路、钙信号通路、cAMP信号通路、TNF信号通路、PI3K-Akt信号通路等关键信号通路。结论小儿止哮平喘颗粒可通过多成分、多靶点调控多种通路达到治疗小儿支气管哮喘的作用,为其分子机制研究奠定了一定的基础。

止哮平喘方对哮喘大鼠肺组织EOS凋亡及Fas,Bcl-2基因表达的影响

目的:观察止哮平喘方对哮喘大鼠肺组织嗜酸性粒细胞(EOS)凋亡及Fas,B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)mRNA表达的影响,探讨止哮平喘方影响哮喘大鼠肺组织EOS凋亡的机制。方法:SD大鼠60只,随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组(1 mg·kg-1·d-1)、止哮平喘方低、中、高剂量组(11,22,44 g·kg-1·d-1),每组10只。采用卵蛋白(OVA)致敏和激发复制哮喘大鼠模型,共治疗14 d。取右中肺组织4%多聚甲醛固定,石蜡切片,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肺组织EOS凋亡,原位杂交检测Fas,Bcl-2 mRNA的表达。结果:与正常组比较,哮喘模型组大鼠肺组织中EOS的数量较多,EOS凋亡减少,同时FasmRNA表达明显降低、Bcl-2 mRNA的表达明显增加(P<0.01)。药物干预后,各治疗组EOS凋亡增加,Fas mRNA表达增加、Bcl-2 mRNA表达降低(P<0.01或P<0.05)。Fas mRNA表达与EOS凋亡呈正相关(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达与EOS凋亡呈负相关(P<0.01)。结论:止哮平喘方可促进肺组织Fas mRNA表达、抑制Bcl-2mRNA的表达,促进肺组织EOS凋亡,减轻气道炎症,从而发挥平喘作用。

止哮平喘方联合子午流注针灸治疗老年支气管哮喘急性发作期患者的临床研究

目的:探讨止哮平喘方联合子午流注针灸治疗老年支气管哮喘急性发作期患者的临床效果。方法:选取2017年2月~2019年1月期间我院治疗的老年支气管哮喘急性发作期患者80例为研究对象。将所有患者根据随机数字表法分为对照组(n=40)和研究组(n=40),对照组给予常规西医治疗,研究组在对照组基础上给予止哮平喘方联合子午流注针灸治疗。比较两组患者临床疗效、肺功能、症状积分、免疫功能、不良反应。结果:研究组治疗后临床总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗后研究组咳痰、呼吸困难、咳嗽、喘息等症状积分改善情况优于对照组(P<0.05)。两组患者治疗后CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均升高,且研究组高于对照组(P<0.05);CD8^(+)水平降低,且研究组低于对照组(P<0.05)。两组患者治疗后第1秒用力呼气量占预计值的百分比(FEV1%pred)、用力肺活量占预计值的百分比(FVC%pred)、最大呼气峰流速占预计值的百分比(PEF%pred)均升高,且研究组高于对照组(P<0.05)。两组不良反应的发生率对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:止哮平喘方联合子午流注针灸可提高老年支气管哮喘急性发作期患者的治疗效果,改善其临床症状、肺功能以及免疫功能。