肝癌组织中ZHX2基因启动子甲基化及其与临床病理特征的关系

目的运用变性高效液相色谱(Denature High-Performance Liquid Chromatography,DHPLC)法检测原发性肝癌细胞中ZHX2基因启动子甲基化的情况,为进一步探讨其与原发性肝细胞癌(HCC)临床病理特征之间的关系奠定基础。方法采用亚硫酸氢钠-DHPLC技术,以体外甲基化的DNA和人类胎盘DNA分别为甲基化和非甲基化对照,建立ZHX2基因启动子甲基化DHPLC分析方法。在55℃部分变性条件下,对ZHX2基因启动子重要区域甲基化水平进行检测,并对24例HCC癌组织及癌旁肝组织和6例正常肝组织标本进行检测。结果建立了ZHX2基因启动子甲基化DHPLC分析方法,使用该方法检测结果显示正常肝组织未检测到甲基化,24例HCC癌组织中有11例存在甲基化(45.8%),而24例HCC癌旁组织中有3例(16.6%)存在甲基化。结论本研究建立了ZHX2基因启动子甲基化DHPLC分析方法,并首次将其应用于肝癌组织标本的检测,为深入探讨ZHX2基因与HCC发生发展之间关系奠定了基础。

ZHX2基因在肝细胞癌中表达水平及其临床意义

目的检测新型转录抑制因子ZHX2基因mRNA在肝细胞癌(HCC)中的表达水平,分析探讨ZHX2mR-NA的表达及其与肝细胞癌发病机理之间的关系。方法建立了SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,检测了正常肝组织、24例HCC及其癌旁组织中ZHX2基因的mRNA表达水平。结果 ZHX2基因的mRNA在6例正常肝组织中均有表达;在HCC癌组织中ZHX2mRNA的阳性率为33.3%,癌旁非瘤组织中ZHX2 mRNA的阳性率为62.5%;ZHX2mRNA在HCC组织中的表达明显低于对应的癌旁肝组织,差异具有显著性;将HCC按不同的临床病理特征分组比较ZHX2mRNA的表达,结果显示,ZHX2mRNA的表达与HCC患者的性别、年龄、分化程度、肿瘤大小、有无静脉浸润以及肝硬化程度无关,而与有无肝外转移灶、HBV感染和血清AFP值有关。结论 ZHX2mRNA表达量的减少与HCC的发生、发展以及侵袭转移密切相关。

转录抑制因子ZHX2功能片段原核表达载体的构建及表达

目的从人正常组织中克隆人转录抑制因子ZHX2功能片段,构建其原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,纯化获得蛋白,用于下一步探讨ZHX2基因的功能。方法根据GenBank中ZHX2功能片段已知序列设计引物,从正常人组织中通过RT-PCR方法扩增ZHX2基因功能片段,克隆到原核表达载体pET28a(+)中,转化Ecoli.BL21(DE3)I,PTG诱导表达,采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。结果测序结果显示克隆的ZHX2基因序列正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确,Western-blot鉴定结果显示表达产物为人ZHX2功能片段特异性蛋白。结论本研究成功构建了含有ZHX2功能片段的原核融合表达载体,并实现了ZHX2功能片段的表达,获得了纯化的蛋白,为进一步研究ZHX2基因的功能奠定了基础。