ZIC1基因过表达激活P53信号通路抑制胸膜间皮瘤细胞增殖

目的探讨小脑锌指结构1(ZIC1)基因过表达对胸膜间皮瘤SMC-1细胞增殖、凋亡的影响以及相应的机制。方法用携带ZIC1基因的慢病毒颗粒转染SMC-1细胞作为过表达组,用空载慢病毒颗粒感染SMC-1细胞作为空载体组,将常规培养未进行转染的SMC-1细胞作为空白对照组,采用Western blot在蛋白水平检测3组细胞中ZIC1蛋白的表达情况;采用CCK-8细胞增殖试验检测各组细胞增殖能力,Hoechst-PI双染法检测各组细胞凋亡情况;采用Western blot检测P53介导的细胞凋亡信号通路的主要基因P53、P21、MDM2及P53磷酸化位点Ser392蛋白表达水平。结果与空载组和对照组相比,ZIC1过表达组中ZIC1蛋白的表达明显增高,差异有统计学意义(F=4.665,P=0.036);ZIC1过表达组中肿瘤细胞的增殖活性明显减弱,而肿瘤细胞的凋亡明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);ZIC1基因过表达组中P53信号通路中的主要基因P53、P21、MDM2及P53-Ser392蛋白表达均明显增加(P<0.05)。结论ZIC1基因过表达可以抑制胸膜间皮瘤SMC-1细胞增殖,促进其凋亡,其可能的机制为通过上调P53基因磷酸化位点的表达激活P53基因介导的细胞凋亡信号通路来实现。

前列腺癌中锌指蛋白ZIC2表达及对细胞增殖和凋亡的影响

背景与目的:锌指蛋白ZIC2在肿瘤中的表达及作用呈组织特异性,其异常表达与肿瘤的预后紧密相关。但ZIC2在前列腺癌中的表达与作用未见相应研究。该研究拟检测前列腺癌组织及细胞中ZIC2蛋白表达情况,明确ZIC2异常与临床病理参数间的关系与及对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用免疫组织化学SP法检测31例经穿刺活检诊断的前列腺癌标本及同期35例经尿道前列腺电切(transurethral resection of the prostate,TURP)获取的良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)组织中ZIC2的表达,分析其异常表达与临床病理参数间的关系;应用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰ZIC2基因并转染前列腺癌DU145细胞,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白水平。采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖,采用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡变化。结果:前列腺癌组织及BPH中ZIC2总阳性表达率分别为90.32%(28/31)及20.00%(7/35),两者间差异有统计学意义(χ^2=32.639,P=0.000)。ZIC2阳性表达率与前列腺癌Gleason评分相关(χ^2=9.753,P=0.003),与前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)、浸润深度无相关性(P均>0.05)。前列腺癌细胞中ZIC2表达明显升高,受干扰后蛋白显著降低;MTT法检测结果显示,ZIC2低表达后细胞生长明显减慢;流式细胞术检测结果显示,ZIC2降低后能有效抑制癌细胞增殖并增加凋亡。结论:ZIC2在前列腺癌中高表达,属癌基因,与Gleason评分密切相关;其表达降低后能有效抑制前列腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。

镉染毒大鼠胚胎神经上皮中Zic2蛋白的表达

目的探讨在神经系统发育过程中镉对 Zic2表达的时空顺序的影响。方法将40只 Wistar 孕鼠随机分为对照组和镉染毒组,镉染毒组孕鼠于胚胎6.5 d(embryonic day 6.5,E6.5)一次性按4 mg/kg 的剂量腹腔注射氯化镉,对照组和镉染毒组各分为4个亚组,分别在E9.0、E9.5、E10.5和 E11.5断椎处死孕鼠。随机取1/2妊娠子宫,在体视显微镜下取出胚胎,对胚胎神经系统分化进行评分。其余的1/2妊娠子宫置于4%多聚甲醛中固定,常规石蜡包埋,从胚体头端向尾端行5μm连续切片,采用二步法免疫组织化学技术检测 Zic2在神经上皮的表达情况。结果镉染毒组大鼠胚胎的神经系统发育异常,主要表现为发育迟缓、前后神经孔延迟闭合或不闭合等。镉染毒组大鼠胚胎的前脑、中脑和后脑的发育评分均低于相应的对照组,除 E9.5的中脑的发育评分与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)外,其余差异均有统计学意义(9<0.05)。E9.5、E10.0、E10.5和 E11.5的镉染毒组的神经系统发育评分低于相应的对照组,差异均有统计学意义(t 值分别为2.71、4.72、3.78、5.61,P 值均小于0.05)。与对照组的大鼠胚胎相比较,镉染毒组 Zic2蛋白在 E9.5的神经板区的表达减少(t=1.978,P<0.05);在 E10.0的神经沟处表达明显减少(t=4.106,P<0.05),神经褶处有少量表达(t=5.677,P<0.05);在E10.5的神经管上表达明显减少(t=5.231,P<0.05);在 E11.5的前、中、后脑及神经管上主要表达在背侧,但是表达量明显低于对照组(t=3.405,P<0.05)。结论镉可以通过影响 Zic2表达的时空顺序,使大鼠胚胎神经系统发育异常。

ZIC5在前列腺癌中的表达及意义

目的研究ZIC5(Zic family member 5)在前列腺癌中的异常表达及其对前列腺癌生物学表型的影响。方法实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR)检测ZIC5在前列腺癌组织标本和对应癌旁正常组织、PC3和LNCa P细胞株及正常前列腺上皮中的表达水平。siRNA干扰ZIC5后,CCK-8法和Transwell试验检测前列腺癌细胞PC3和LNCa P的增殖、迁移和侵袭。生物信息学分析可能调控ZIC5的miRNA并进行验证。结果 ZIC5在前列腺癌组织中表达水平上升(t=4.2,P<0.001),并且与Gleason评分分级具有相关性(P<0.05),在前列腺癌细胞株中表达水平显著高于正常前列腺癌上皮(P<0.01)。前列腺癌细胞株PC3和LNCa P中siRNA干扰ZIC5 24 h后,细胞增殖减慢,迁移和侵袭能力被抑制。生物信息学及双荧光素酶报告显示,ZIC5受miR-449家族调控,ZIC5与miR-449家族在前列腺癌标本中表达水平呈负相关(ZIC5 vs miR-449a:r=-0.64,P<0.05,ZIC5 vs miR-449b,r=-0.52,P<0.05),双荧光素酶报告基因检测显示miR-449家族结合ZIC5 3’UTR。异常表达的ZIC5可激活EMT通路,干扰ZIC5和过表达miR-449可抑制ZIC5蛋白表达,并逆转前列腺癌细胞中EMT状态。结论 ZIC5受miR-449家族调控,促进前列腺癌生长和侵袭。

ZIC1、cyclinD1和p16在脂肪肉瘤中的表达及临床意义

目的探讨ZIC1、cyclinD1和p16蛋白在脂肪肉瘤(LPS)中的表达及临床意义。方法运用免疫组化MaxVision快捷法检测52例LPS、20例脂肪瘤、15例正常脂肪组织中ZIC1、cyclinD1和p16蛋白的表达。结果ZIC1、cyclinD1和p16在LPS中过表达率分别为76.9%(40∕52)、67.3%(35∕52)和80.8%(42/52),表达水平明显高于脂肪瘤和正常脂肪组织(P<0.01)。ZIC1和cyclinD1的表达与LPS浸润或转移有关(P<0.05),而与肿瘤的发生部位、不同分化程度、原发与复发无关(P>0.05)。p16过表达与各项临床病理参数无关(P>0.05)。LPS中ZIC1过表达与cyclinD1高表达呈正相关(P<0.05),与p16过表达无关(P>0.05)。结论 ZIC1、cyclinD1和p16蛋白在LPS中高表达,表明三者在LPS的发生、发展过程中具有重要作用。三者在LPS中过表达对脂肪肿瘤的鉴别诊断有一定的意义。

Zic3基因在小梅山猪骨髓间充质干细胞中的表达

构建含有Zic3基因的真核表达载体pEGFP-Zic3,并转染小梅山猪骨髓间充质干细胞(BMSC),观察BMSC中Zic3的表达情况。用RT-PCR技术获得Zic3基因,并将其连接到真核表达载体pEGFP-C1中,获得真核表达载体质粒pEGFP-Zic3,采用双酶切法和DNA测序鉴定构建的载体是否正确。体外培养小梅山猪BMSC,通过免疫细胞化学法检测小梅山猪BMSC表面标志。采用脂质体法将pEGFP-Zic3转染BMSC,通过荧光显微镜观察确定重组质粒在小梅山猪BMSC内的表达和定位,用RT-PCR法检测Zic3的表达情况,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况。双酶切和测序证实已成功构建含目的基因Zic3的真核表达载体pEGFP-Zic3;小梅山猪BMSC体外培养状态良好,且表达CD29,不表达CD34和CD45;pEGFP-Zic3转染BMSC后可见大量绿色荧光,与对照组相比,转Zic3基因BMSC增殖能力提高,但细胞凋亡率未发生明显变化。结论:成功构建了含目的基因Zic3的真核表达载体pEGFP-Zic3,并高效转染BMSC,Zic3表达增加,且Zic3可提高细胞增殖能力。

肝细胞癌ZIC1基因启动子区甲基化与临床病理特征的关系

目的:探讨肝细胞癌ZIC1基因启动子区甲基化与临床病理特征的关系。方法:采集2008年8月至2014年8月武警陕西总队医院63例肝细胞癌患者手术切除的肿瘤组织标本,通过Real-time PCR法检测肝细胞组织及癌旁组织中ZIC1 mRNA表达水平;用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)法检测癌组织及癌旁组织中ZIC1基因启动子区甲基化状态。结果:ZIC1 mRNA在肝细胞癌组织中呈低表达与其启动子区甲基化有关;ZIC1基因在肝细胞癌中频发甲基化(P<0.05),并与肿瘤分化程度及分级显著相关(均P<0.05)。结论:启动子区甲基化是ZIC1基因失活的重要机制,ZIC1基因启动子区异常甲基化可能参与了肝细胞癌的发生发展。

ZIC1基因在恶性肿瘤中的研究进展

ZIC1(zinc finger of the cerebellum 1)基因是一种重要的肿瘤相关基因。近年来研究发现ZIC1基因在多种恶性肿瘤中都有表达并与肿瘤的发生、发展密切相关,但其具体的作用机制仍未完全阐明。随着对ZIC1基因研究的进一步深入,其有可能为肿瘤的早期诊断、基因治疗和预后评估提供新的思路。

ZIC1联合苦参碱对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的:探讨ZIC1联合苦参碱对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移能力及凋亡的影响。方法:将慢病毒载体r LV-Zic1-PGK-puro稳定转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞株并得到稳定传代的细胞株,Western blot法检测转染效果。以人乳腺癌MDA-MB-231细胞及ZIC1基因稳定转染的细胞为研究对象进行药物实验,MTT法筛选出苦参碱的半数抑制浓度(IC50)后分组,划分A空载不加药组(阴性对照组),B空载加药组,C转染不加药组和D转染加药组。对四组细胞采用黏附试验检测细胞黏附(增殖)能力、划痕实验检测细胞迁移能力、流式细胞术检测细胞凋亡。结果:ZIC1或苦参碱单独作用均可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞黏附(增殖)、迁移及增强其凋亡,差异较对照组有统计学意义(P<0.05),且在抑制细胞迁移上存在时间依赖性。两者联合作用抗癌效果更明显,差异较其它三组有统计学意义(P<0.05)。结论:苦参碱联合ZIC1可明显增强对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑癌效果。

大鼠小脑特异基因Zic的克隆、序列分析和初步表达

EST(AW0 55732 )片段是 SD大鼠脑内一特异表达基因 c DNA的 3′-端片段 ,与小鼠和人的Zic基因同源 .基于小鼠及人的 Zic基因的同源序列 ,设计引物用 PCR方法从 SD大鼠脑中克隆得到该基因的编码区序列 (r Zic) .该基因编码一锌指蛋白 ,其锌指结构域与线虫的 tra- 1基因 ,果蝇的ci D基因 ,人的 Gli癌基因和果蝇的 opa基因的锌指结构域高度同源 .用 RT- PCR方法分析了 r Zic基因在大鼠脑区分布状况 .结果表明 ,r Zic基因在小脑中高表达 .将该 r Zic基因克隆至带有 6个组氨酸的表达载体 p ET- 32 a(+)中 ,用 IPTG诱导 r Zic融合蛋白在大肠杆菌 BL2 1菌株中表达 ,诱导后重组蛋白质占菌体总蛋白的 2 0 .8% .

ZIC1基因转染联合姜黄素对人乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨ZIC1基因转染联合姜黄素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法:将慢病毒载体p LV-Zic1-PGK-Puro稳定转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过蛋白质印迹法检测转染后MDA-MB-231细胞ZIC1蛋白的表达水平。通过MTT法检测抑制率在50%左右的姜黄素浓度,并作为后续实验的标准加药浓度。以ZIC1空载不加姜黄素为对照组,空载加姜黄素、转染不加姜黄素及转染加姜黄素为实验组,以MTT法检测ZIC1、姜黄素及ZIC1联合姜黄素对MDA-MB-231细胞黏附的影响;用划痕实验检测各组细胞的迁移能力;用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。结果:乳腺癌细胞转染ZIC1质粒后,ZIC1蛋白呈阳性表达,而转染空载体细胞中ZIC1蛋白表达阴性。细胞增殖抑制率在50%左右的姜黄素浓度为5 mg/L,以此作为标准加药浓度。与对照组比较,转染组、姜黄素组及转染联合姜黄素组乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖受到明显抑制,凋亡率明显增高(均P<0.05)。其中,ZIC1转染联合姜黄素对细胞增殖的抑制及凋亡诱导作用更明显(P<0.05)。结论:ZIC1基因与姜黄素对乳腺癌的抑制存在协同作用。

ZIC1过表达对结直肠癌HCT-116细胞增殖及对苦参碱类生物碱药物敏感性的影响

目的:检测ZIC1基因在结直肠癌细胞内过表达后对癌细胞增殖能力的影响,以及对苦参碱类生物碱药物敏感性的改变情况。方法:首先从五种结直肠癌细胞株中筛选出ZIC1基因表达最低的一株,对其进行慢病毒转染,使其稳定表达ZIC1基因或空载体,再利用Western blot技术和qRT-PCR技术鉴定ZIC1蛋白/mRNA表达情况。通过CCK-8法和平板克隆形成实验检测过表达ZIC1基因后细胞增殖能力的改变,并利用CCK-8法分析稳转细胞株对苦参碱类生物碱药物敏感性的改变。结果:HCT116细胞株中ZIC1 mRNA/蛋白表达均显著低于其他四株(P <0. 001);慢病毒转染后,含r LV-ZIC1-PGK-Puro的重组慢病毒转染HCT116细胞内ZIC1 mRNA/蛋白表达水平显著高于对照组(P <0. 001)。CCK-8实验结果示,ZIC1基因过表达后HCT116细胞增殖能力明显降低(P <0. 01);实验组克隆形成率明显低于对照组(P=0. 003)。CCK-8法发现ZIC1过表达后HCT116结直肠癌细胞对苦参碱及槐定碱的药物敏感性得到明显的升高,而对氧化苦参碱及槐果碱的药物敏感性无明显改变。结论:HCT116结直肠癌细胞内ZIC1基因过表达后能有效抑制癌细胞的增殖,并增敏苦参碱及槐定碱对结直肠癌HCT116细胞的药理作用。

对海南省210例散发性先天性单纯性心脏病患者NKX2-5、GATA4、ZIC3基因突变的筛选研究

目的:心脏发育异常可导致先天性心脏病(congenital heart disease,CHD),是国内外最常见的先天性畸形,已知NKX2-5、GATA4和ZIC3基因突变可引起CHD。本实验探讨了海南省NKX2-5、GATA4、ZIC3基因突变和散发性先天性单纯性心脏病之间的关系。方法:收集210例散发性CHD患者,提取患者血液DNA,扩增目的基因片段,利用高分辨熔解曲线(high-resolution melting,HRM)技术和DNA测序技术,分析NKX2-5、GATA4和ZIC3基因的序列。结果:对210例CHD患者NKX2-5、GATA4、ZIC3基因测序,发现7个基因突变,包括1个NKX2-5杂合错义突变(c.178G>T),GATA4的3个杂合突变(c.677C>T,c.928A>G,c.1123G>A),ZIC3的3个杂合突变(c.19G>C,c.1255C>G,c.1348C>T)。其中NKX2-5(c.178G>T)、GATA4(c.1123G>A)、ZIC3(c.19G>C,c.1255C>G,c.1348C>T)为新突变位点。通过生物信息学软件预测这些基因突变为致病性突变。结论:在210例患者中发现了7个基因突变,首次报道海南省NKX2-5、GATA4和ZIC3的基因突变与CHD发病相关。

神经管畸形患者锌指蛋白ZIC2基因编码区罕见突变的分子遗传分析

目的筛选ZIC2外显子区域基因突变,分析突变对神经管畸形(NTDs)的影响。方法采用病例对照研究方法,收集来自山西省和江苏省苏州市经孕期B超或病理学解剖证实为NTDs的胎儿为NTDs组,以常规体检排除出生缺陷和重大疾病的胎儿和健康成年人为对照组。采用酚-氯仿法抽提基因组DNA,通过PCR扩增ZIC2的3个外显子及邻近的部分内含子序列,扩增产物采用ABI Prism Bigdye system进行测序,对于测序发现的基因突变进行反向测序验证。结果 NTDs组163例,对照组576例。在NTDs组中发现一个同义突变c.1140G>A,未发现错义突变或重复缺失。同义突变c.1140G>A位于第2外显子,为1例妊娠期37周诊断为枕部脑膜脑膨出的女性胎儿。KEGG数据库分析ZIC2结构发现该同义突变位于ZIC2的一个C2H2锌指结构中。在对照组中未检测到相同突变。结论 ZIC2是一个高度保守基因,其编码区不含有与NTDs相关的SNP和罕见突变。

沉默ZIC1基因联合氧化苦参碱对子宫内膜癌KLE细胞生物学行为的影响

目的:探讨沉默ZIC1基因转染联合氧化苦参碱对人子宫内膜癌KLE细胞生物学行为的影响。方法:将慢病毒载体pLV-shZIC1-PGK-Puro稳定转染人子宫内膜癌KLE细胞,通过Western blot法检测转染后ZIC1蛋白的表达水平。通过MTT法筛选出氧化苦参碱的IC 50浓度后,分为空载不加氧化苦参碱组(A组)、空载加氧化苦参碱(B组)、转染不加氧化苦参碱组(C组)及转染加氧化苦参碱组(D组),分别采用MTT法检测对KLE细胞黏附的影响,划痕实验检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。结果:子宫内膜癌细胞转染shZIC1后,ZIC1蛋白表达明显下调。氧化苦参碱或沉默ZIC1单独作用均可抑制KLE人子宫内膜癌细胞的黏附、迁移及促进细胞凋亡(P<0.05),且在抑制细胞迁移上存在时间依赖性。沉默ZIC1联合氧化苦参碱可影响子宫内膜癌KLE细胞的凋亡和侵袭,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:沉默ZIC1与氧化苦参碱对子宫内膜癌的抑制存在协同作用,联合应用可明显增强对人子宫内膜癌KLE细胞的抑癌效果。

ZIC1过表达对三阴性乳腺癌细胞增殖及药物敏感性的影响

目的探讨ZIC家族成员1(Zic family member 1,ZIC1)过表达对三阴性乳腺癌细胞增殖及药物敏感性的影响。方法将转染ZIC1基因和空载体的三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231分别作为A组和B组,将转染ZIC1基因和空载体的三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468分别作为C组和D组。分别采用蛋白质印迹(Western blot)法和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ZIC1蛋白和ZIC1 mRNA的相对表达量,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力及对化疗药物顺铂、环磷酰胺、多西他赛、姜黄素、斑蝥素和芹菜素的敏感性。结果A组细胞中ZIC1 mRNA和ZIC1蛋白的相对表达量均明显高于B组(P﹤0.01),C组细胞中ZIC1 mRNA和ZIC1蛋白的相对表达量均明显高于D组(P﹤0.01)。培养24、36、48、60、72 h时,A组细胞的光密度(OD)值均低于同时间点B组细胞(P﹤0.05),C组细胞的OD值均低于同时间点D组细胞(P﹤0.05)。环磷酰胺、多西他赛、芹菜素对A组细胞的半数抑制浓度(IC50)均低于B组细胞(P﹤0.05),多西他赛和芹菜素对C组细胞的IC50均低于D组细胞(P﹤0.05)。结论ZIC1基因过表达能有效抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468的增殖,并能增强乳腺癌细胞对环磷酰胺、多西他赛及芹菜素的药物敏感性。

ZIC2在恶性肿瘤中的研究进展

ZIC2属于小脑锌指基因家族,是脊椎动物脑发育过程中的重要基因。近年,ZIC2在恶性肿瘤中的作用越来越受到重视,其表达异常可促进恶性肿瘤的发生、发展,并与患者预后密切相关。然而,ZIC2在各种肿瘤中的功能和机制异常复杂,其具体机制尚不完全清楚。该文现总结ZIC2在恶性肿瘤中的作用、机制及其临床意义,为恶性肿瘤的诊断和预后提供参考。

前列腺癌中ZIC2与驱动蛋白KIF18B表达及相互关系与预后风险评估

目的检测前列腺癌中ZIC2、KIF18B表达水平和二者相关性及与预后风险的评估价值。方法收集根治性切除的前列腺癌组织标本32例及同期良性前列腺增生(BPH)组织36例,免疫组化SP法检测ZIC2及KIF18B的表达,分析其表达变化相关性及与前列腺特异抗原(PSA)、Gleason评分[国际泌尿病理(ISUP)分级]和T分期等预后风险因素的关系。结果ZIC2在PCa组织中和BPH中的阳性表达率分别为87.5%(28/32)及19.4%(7/36),有统计学差异(χ^(2)=28.976,P=0.000);前列腺癌及BPH中KIF18B阳性表达率分别为84.4%(27/32)及38.9%(14/36),有统计学差异(χ^(2)=14.641,P=0.000);ZIC2表达与T分期密切相关(χ^(2)=15.013,P=0.000);KIF18B表达与Gleason评分(ISUP分级)存在相关性(χ^(2)=5.709,P=0.038)。结论前列腺癌中ZIC2、KIF18B表达异常升高,均属癌基因;二者异常表达分别与T分期及Gleason(ISUP分级)相关,同时检测有助于前列腺癌预后的临床判定。

非小细胞肺癌患者外周血和肺癌组织中ZIC1启动子甲基化检测的临床意义

目的探讨ZIC1基因在NSCLC患者外周血和肺肿瘤组织中的甲基化状态,及其对NSCLC的预后评估意义。方法选取95例NSCLC患者外周血、癌和癌旁组织,另选取95例健康体检者外周血为对照组。用MSP法比较外周血和癌组织的ZIC1甲基化检出率;分析ZIC1在外周血和癌组织的甲基化和NSCLC临床病理因素的相关性。结果NSCLC患者的外周血和肺肿瘤组织中ZIC1甲基化检出率显著高于健康人群的外周血和NSCLC患者的癌旁组织(P<0.05),其中ZIC1甲基化在肿瘤组织诊断中的敏感度和特异性较高。NSCLC患者外周血和肿瘤组织ZIC1基因甲基化检出率与肿瘤直径、转移、分期及胸腔积液有显著相关性(P<0.05)。结论ZIC1基因甲基化与NSCLC患者肿瘤发生、发展、转移、分期等有关,可能作为NSCLC诊断及预后指标。

Screening of NKX2-5,GATA4,ZIC3 gene mutations in sporadic congenital simple heart disease in Hainan Province

Objective:Congenital heart disease(CHD)is caused by abnormal cardiac development,which is the most common congenital malformation at home and abroad.NKX2-5,GATA4 and ZIC3 have been shown to be associated with CHD.This experiment explored the relationship between NKX2-5,GATA4 and ZIC3 gene mutations and sporadic CHD in Hainan Province.Methods:To collect 210 sporadic CHD patients in Hainan,the DNA of patients was extracted from blood,and the target gene fragments were amplified.Using high-resolution melting(HRM)and DNA sequencing technology,and we analyzed the sequences of NKX2-5,GATA4 and ZIC3 genes.Results:NKX2-5,GATA4 and ZIC3 genes were sequenced in 210 CHD patients,and seven gene mutations were found,including NKX2-5 heterozygous missense mutation(c.178G>T)and three heterozygous mutations in GATA4(c.677C>T,c.928A>G,c.1123G>A),three heterozygous mutations in ZIC3(c.19G>C,c.1255C>G,c.1348C>T),in which NKX2-5(c.178G>T),GATA4(c.1123G>A),and ZIC3(c.1255C>G,c.1348C>T)are new mutation sites.These gene mutations were predicted to be pathogenic mutations by bioinformatics software.Conclusion:Conclusion:Seven gene mutations were found in 210 patients,and it was the first report that the gene mutations of NKX2-5,GATA4 and ZIC3 in Hainan Province associated with the pathogenesis of CHD.