JAZ蛋白介导的茉莉酸信号传递

当植物受到生物或非生物因素胁迫时,体内会合成茉莉酸类物质,启动自身的防御反应。茉莉酸途径的抑制因子JAZ(Jasmonate ZIM-domain)蛋白近期被确认,该文对JAZ蛋白在茉莉酸信号传递中的作用作一综述。

玉米JAZ家族基因ZmJAZ4的克隆及功能分析

JAZ(Jasmonate ZIM-domain)蛋白是植物特有的一类转录因子,通过抑制茉莉素调控基因的表达,在植物的生长发育及非生物胁迫等方面发挥重要的功能。从玉米B73自交系中克隆到一个新的JAZ家族基因Zm JAZ4,该基因c DNA全长为651bp,编码蛋白含有216个氨基酸,分子量约为23.1 k D,p I为10.78,属于碱性蛋白。Real-time RT-PCR结果表明,Zm JAZ4主要在茎端分生组织、雄穗、发育早期的种子以及胚乳中表达。系统进化分析显示,Zm JAZ4与At JAZ10转录因子相似性较高。亚细胞定位试验表明,Zm JAZ4定位于细胞核内。Zm JAZ4在酵母细胞中不具有转录激活活性。激素及胁迫处理表明,Zm JAZ4在地上部的表达受PEG、Na Cl、SA、GA和ABA诱导,而在地下部的表达受到ABA和GA诱导。结果分析表明,Zm JAZ4可能是一个重要的转录调控因子,参与调控多种激素信号通路及非生物胁迫响应。

茉莉酸信号转录抑制关键组分JAZ与NINJA互作体系建立及复合体结晶条件筛选

[目的]本文旨在建立JAZ与NINJA蛋白离体和活体互作以及2个蛋白复合体晶体筛选的体系,并获得2个蛋白复合体晶体。[方法]采用酵母双杂交和双分子荧光互补法用于活体条件下JAZ与NINJA蛋白互作区域的验证;在离体条件下,通过氢氘交换质谱(HDX)和Alpha Screen验证JAZ与NINJA蛋白的互作区域并进一步筛选2个蛋白互作的最小区域;使用原核(大肠杆菌)表达系统、亲和层析和凝胶过滤层析纯化等手段获得NINJA截短蛋白。将NINJA截短蛋白与JAZ多肽按照物质的量比为1∶1.5混合孵育一段时间,通过坐滴结晶方法进行复合体结晶,最终获得复合体晶体。[结果]成功创建了JAZ与NINJA离体和活体互作体系;获得JAZ多肽与NINJA(342~406)的复合体晶体的条件分别是0.2 mol·L^(-1) CaCl_(2)·2H_(2)O、0.1 mol·L^(-1) BIS-Tris(pH6.5)、45%2-甲基-2,4-戊二醇与0.2 mol·L^(-1)醋酸铵、0.1 mol·L^(-1) Tris(pH8.5)、45%2-甲基-2,4-戊二醇。[结论]JAZ蛋白ZIM结构域的TIFY基序和羧基端与NINJA(342~406)是JAZ与NINJA蛋白互作所必需的;JAZ蛋白ZIM结构域是JAZ同源和异源互作所必需的;成功获得了JAZ与NINJA复合体晶体。