伤害感受水平指数指导瑞芬太尼输注靶浓度对接受乳腺癌根治术患者细胞免疫和缺氧诱导因子-1α的影响

目的探讨伤害感受水平(NOL)指数应用于乳腺癌根治术对患者的细胞免疫和缺氧诱导因子(HIF)-1α的影响。方法招募2022年12月至2023年12月行乳腺癌根治术的80例患者,随机将患者分为观察组和对照组。观察组控制NOL指数在30~50,依此调整瑞芬太尼靶浓度,对照组起始采用瑞芬太尼4 ng/mL靶控输注,依据血流动力学调整瑞芬太尼靶浓度。记录瑞芬太尼平均靶浓度;记录手术前1 d及手术后1 d患者的静脉血CD4^(+)、CD8^(+)以及NK细胞值,测定血清中HIF-1α水平。结果两组患者的麻醉时间、手术时间、术中MAP、HR、丙泊酚靶浓度和术后VAS评分均差异无统计学意义(P>0.05),观察组术中的瑞芬太尼平均靶浓度低于对照组(P<0.05);在术后1 d,观察组的CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、NK细胞值均高于对照组,HIF-1α水平低于对照组(P<0.05)。相比术前1 d,观察组患者在术后1 d的CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)较低,HIF-1α水平较高(P<0.05);相比术前1 d,对照组患者在术后1天的CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)及NK细胞值较低,HIF-1α水平较高(P<0.05)。结论NOL指数应用于全麻下乳腺癌根治术可以减少术中瑞芬太尼的靶浓度,降低瑞芬太尼对细胞免疫的抑制,保护NK细胞的活性,同时减少HIF-1α升高水平,由此推断对患者肿瘤免疫微环境的影响更小。

circDNMT1 调节 miR-377-3p/PUM1 轴对三阴性乳腺癌细胞增殖、凋亡和上皮-间质转化的影响

目的探讨circDNMT1调节miR-377-3p/PUM1轴对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖、凋亡和上皮-间质转化(EMT)的影响。方法收集儋州市人民医院2018年至2021年收治的24例TNBC患者的TNBC组织和其邻近正常组织,采用qRT-PCR、Western blot法分别检测组织及小鼠正常乳腺上皮细胞系HC11和TNBC细胞系4T1、Eph41424、JC中circDNMT1表达、miR-377-3p表达、PUM1蛋白表达。将4T1细胞分为4T1组(未转染)、si-NC组(转染si-NC)、si-DNMT1组(转染si-DNMT1)、si-DNMT1+anti-NC组(同时转染si-DNMT1和anti-NC)、si-DNMT1+anti-miR-377-3p组(同时转染si-DNMT1和anti-miR-377-3p),qRT-PCR检测各组4T1细胞中circDNMT1、miR-377-3p表达;CCK-8检测各组4T1细胞增殖情况;流式细胞术检测各组4T1细胞凋亡情况;Western blot检测各组4T1细胞PUM1、EMT相关蛋白及凋亡相关蛋白表达;TargetScan网站预测miR-377-3p与circDNMT1、PUM1的结合位点,双荧光素酶报告验证miR-377-3p与circDNMT1、PUM1的靶向关系。BALB/c小鼠接种4T1细胞后随机分为空白对照组(注射等量生理盐水)、阴性对照组(尾静脉注射si-NC)、DNMT1沉默组(尾静脉注射si-DNMT1)、联合对照组(尾静脉注射si-DNMT1和anti-NC)、联合沉默组(尾静脉注射si-DNMT1和anti-miR-377-3p),记录小鼠肿瘤质量,采用苏木精-伊红染色观察肿瘤形态变化。结果在TNBC组织和细胞中circDNMT1、PUM1上调,miR-377-3p下调,且在4T1细胞中表达差异最显著,因此本研究选择4T1细胞进行后续实验。与4T1组、si-NC组比较,si-DNMT1组4T1细胞中miR-377-3p表达、4T1细胞凋亡率及Bax、cleaved caspase-3、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),circDNMT1水平、PUM1蛋白表达水平、24 h和48 h OD值、Bcl-2蛋白表达水平、N-cadherin蛋白表达水平、Vimentin蛋白表达水平均显著减少/降低(P<0.05);与si-DNMT1组、si-DNMT1+anti-NC组比较,si-DNMT1+anti-miR-377-3p组4T1细胞中miR-377-3p表达、4T1细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平、cleaved caspase-3蛋白表达水平、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P<0.05),PUM1蛋白表达水平、24 h和48 h OD值、Bcl-2蛋白表达水平、N-cadherin蛋白表达水平、Vimentin蛋白表达水平均显著增加/升高(P<0.05)。与miR-NC+WT-circDNMT1组比较,miR-377-3p mimic+WT-circDNMT1组细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05);与miR-NC+WT-PUM1组比较,miR-377-3p mimic+WT-PUM1组细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。空白对照组、阴性对照组小鼠肿瘤细胞排列密集,边界清晰;DNMT1沉默组、联合对照组肿瘤细胞排列疏松,胞核固缩,细胞碎片增多;联合沉默组小鼠肿瘤细胞排列比较密集,边界趋于清晰。与空白对照组、阴性对照组比较,DNMT1沉默组小鼠肿瘤质量显著减少(P<0.05);与DNMT1沉默组、联合对照组比较,联合沉默组小鼠肿瘤质量显著增加(P<0.05)。结论沉默circDNMT1可能通过上调miR-377-3p来抑制PUM1表达,进而抑制TNBC细胞增殖和EMT,促进细胞凋亡。

大黄素通过调节miR-582-3p影响MAP3K1活性抑制乳腺癌细胞增殖并诱导凋亡

目的 探讨大黄素(emodin,EMO)通过microRNA(miR)-582-3p/MAP3K1对乳腺癌细胞增殖、凋亡的作用及分子机制。方法 培养人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231以及人乳腺细胞系Hs578Bst,使用不同浓度的EMO处理细胞,细胞根据培养条件分为对照组、EMO(10μM)组、NC mimics组、NC mimics+EMO组、miR-582-3p mimics组和miR-582-3p mimics+EMO组,检测EMO及miR-582-3p异常表达对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响。荧光定量(qRT-PCR)检测miR-582-3p及MAP3K1的表达。MTT和EdU实验检测乳腺癌细胞增殖,流式细胞术和TUNEL实验检测细胞凋亡及细胞周期。蛋白印迹(Western blot)检测增殖标志蛋白Ki-67及凋亡标志蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3在癌细胞中的表达水平。结果 EMO可以抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7的增殖能力[(17.65±0.96)%比(28.63±2.16)%,(15.02±1.71)%比(28.22±1.89)%,P<0.05]、调节细胞周期并促进细胞凋亡[(23.67±1.25)%比(5.73±0.84)%,(27.33±1.73)%比(5.17±0.85)%,P<0.05]。Western blot结果显示,EMO可抑制细胞中Ki-67及Bcl-2的表达并促进Caspase-3(cleaved)及Bax的表达(P<0.05)。EMO处理乳腺癌细胞后miR-582-3p的表达显著下调[(0.45±0.09)比(1.00±0.10),(0.37±0.05)比(1.00±0.11),P<0.01],而过表达miR-582-3p会逆转EMO对乳腺癌细胞生物学活性的影响(P<0.05)。EMO还会通过miR-583-3p调节癌细胞中MAP3K1的表达(P<0.05)。结论 EMO可能通过调节miR-582-3p影响MAP3K1活性抑制乳腺癌细胞增殖并诱导凋亡。

MiR-6838-5p过表达下调DDR1基因表达抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖

目的探索miR-6838-5p调控DDR1基因表达水平对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。方法采用脂质体转染方法干预乳腺癌MCF-7细胞中miR-6838-5p及DDR1基因表达,设置组别如下:Control mimic;miR-6838-5p mimic;Control inhibitor;miR-6838-5p inhibitor;Control siRNA、DDR1 siRNA、Control vector、DDR1 vector及miR-6838-5p过表达+DDR1过表达共转染组。qRT-PCR实验检测miR-6838-5p在正常乳腺上皮细胞及乳腺癌细胞中的表达;通过TargetscanV 8.0等软件预测miR-6838-5p可能作用的靶基因;双荧光素酶报告基因实验验证miR-6838-5p与DDR1存在靶向结合位点;CCK-8实验及EdU实验检测细胞增殖情况;Western blotting实验检测DDR1表达情况;通过裸鼠荷瘤实验验证miR-6838-5p通过调控DDR1表达抑制了乳腺癌MCF-7细胞增殖。结果miR-6838-5p在乳腺癌细胞中表达量低于乳腺正常上皮细胞(P<0.05);对比对照组,miR-6838-5p能抑制乳腺癌细胞增殖(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证明miR-6838-5p可以靶向结合DDR1(P<0.01),Western blotting实验证明miR-6838-5p能调控DDR1基因表达;DDR1促进乳腺癌细胞的增殖(P<0.05);miR-6838-5p过表达+DDR1过表达共转染后能回复miR-6838-5p对乳腺癌细胞增殖的抑制作用(P<0.05);裸鼠荷瘤实验结果表明过表达miR-6838-5p后肿瘤体积明显减小,Western blotting结果表明肿瘤内miR-6838-5p过表达后抑制了DDR1的表达(P<0.05)。结论miR-6838-5p通过调控DDR1基因表达抑制了乳腺癌细胞的增殖。

M1巨噬细胞培养液对ER阳性乳腺癌细胞上皮-间质转换的影响及Calpain的介导作用

目的 探讨M1巨噬细胞对乳腺癌细胞上皮细胞-间充质转换(EMT)的影响及钙蛋白酶(Calpain)在其中的介导作用。方法 以人乳腺癌细胞系雌激素受体阳性(ER+)细胞MCF-7、T47D及雌激素受体阴性(ER-)细胞MDA-MB-231为模型细胞,实验分为MCF-7细胞及T47D细胞的RPMI-1640组(RPMI-1640纯培养基培养)、M1巨噬细胞条件培养液培养组(M1-CM组)、M1-CM+Calp组[M1-CM联合Calpain抑制剂Calpeptin(50μmoL/L)处理]、M1-CM+CI-Ⅲ组[M1-CM联合Calpain抑制剂Calpain inhibitorⅢ(50μmoL/L)处理],MDA-MB-231细胞的RPMI-1640组、M1-CM组;采用划痕实验和侵袭实验检测各组中MCF-7细胞、T47D细胞、MDA-MB-231细胞的迁移能力及MCF-7细胞的侵袭能力,采用qRT-PCR检测M0巨噬细胞、M1巨噬细胞趋化因子受体7CCR7、趋化因子配体10(CXCL10)及白细胞介素-12(IL-12) mRNA表达水平,采用Western blot实验检测MCF-7细胞、T47D细胞及MDA-MB-231细胞中上皮-钙黏素(E-cad)、纤连蛋白(FN)、波形蛋白(Vim)蛋白水平表达。结果 与RPMI-1640组相比,M1-CM组ER+细胞MCF-7及T47D迁移能力增强(P<0.05),MCF-7细胞侵袭能力增强(P<0.05);ER+细胞MCF-7及T47D E-cad蛋白表达水平下调,而FN、Vim表达上调(P<0.05),而ER-细胞MDA-MB-231中只有E-cad表达上调(P<0.05);与M1-CM组相比,ER+细胞MCF-7及T47D的M1-CM+Calp组、M1-CM+CI-Ⅲ组中M1-CM诱导的ER+乳腺癌细胞EMT效应被逆转(P<0.05)。结论 M1巨噬细胞条件培养液可以促进ER+细胞人乳腺细胞的EMT,但对ER-细胞EMT无明显影响,其促进ER+乳腺癌细胞EMT信号机制可能与Calpain通路有关。

Th1/Th2细胞因子、白细胞介素-17和血清肿瘤标志物在乳腺癌诊断、预后与复发中的应用价值研究

目的:探究Th1/Th2细胞因子、白细胞介素-17(IL-17)和血清肿瘤标志物在乳腺癌诊断、预后与复发中的应用价值。方法:选取2021年12月至2022年12月于北京大学肿瘤医院内蒙古医院收治的200例乳腺癌患者为研究对象,并将其按免疫组织化学指标检测后分为阴性组(60例)、弱阳性组(80例)及阳性组(60例);另选60名体检健康人员为健康对照组。观察Th1/Th2、IL-17、糖类抗原(CA125)、细胞角质蛋白19片抗原21-1(CYFRA21-1)、糖类抗原(CA153)、癌胚抗原(CEA)水平变化,探究6项指标联合检测预测乳腺癌预后及复发的临床价值。结果:对比分析临床病理特征与复发、组织学分级、肿瘤直径、淋巴结转移有关,差异有统计学意义(x^(2)=7.552、12.037、12.063、8.543,P<0.05)。多因素分析显示,肿瘤复发、组织分级、肿瘤直径、淋巴结转移为乳腺癌患者预后的重要因素(OR=3.096、3.050、3.425、3.031,P<0.05)。与Th1/Th2、IL-17、CA125、CYFRA21-1、CA153、CEA单项预测相比,6项指标联合预测对乳腺癌患者预后及复发临床价值较高,灵敏度96%,准确率93.46%,特异度85%。结论:观察乳腺癌患者体内Th1/Th2、IL-17、CA125、CYFRA21-1、CA153及CEA的6项指标联合预测水平变化,联合检测具有高灵敏度和高准确率的特点,其高效便捷的检测方式可以为改善预后,降低复发,提升评估准确率提供参考。

槲皮素通过雌激素受体下调长非编码RNA MALAT-1并发挥抗乳腺癌的作用机制

目的探索槲皮素抑制乳腺癌细胞恶性生物学行为的分子机制。方法以乳腺癌细胞系MCF-7和MB231作为研究对象,用慢病毒LV-ERα、LV-MALAT-1转染乳腺癌MB231细胞和MCF7细胞,RT-qPCR检测MALAT-1表达,Western blot检测肿瘤细胞中ERα蛋白表达,CCK-8细胞实验、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,PI染色法检测细胞周期,通过mRFP-GFP-LC3荧光双标腺病毒转染检测自噬水平,观察槲皮素和雌二醇对乳腺癌细胞增殖能力的影响。结果17β-雌二醇(E2)可以促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖,而5μmol·L^(-1)槲皮素可以明显逆转E2对增殖的促进作用(P<0.05)。槲皮素对不表达雌激素受体α(estrogen receptor-α,ERα)的乳腺癌细胞MB231不表现抑制作用;而过表达ERα后,槲皮素则抑制了E2对MB231-ERα的促进作用。同时槲皮素可以抑制E2激活的MALAT-1表达;并且其抑制作用被过表达MALAT-1所逆转,包括细胞增殖,细胞周期进展以及克隆形成能力。结论槲皮素依赖于ERα的表达对乳腺癌的增殖等恶性行为起抑制作用,并且很可能是通过抑制MALAT-1的表达来发挥作用。

IL-35、Beclin-1在乳腺癌患者外周血中的水平及意义

目的探讨白细胞介素(IL)-35、自噬相关蛋白Beclin-1在乳腺癌患者外周血中的水平及意义。方法选取2022年5-10月在上海市嘉定区妇幼保健院诊治的原发性乳腺癌女性患者44例(乳腺癌组)、乳腺良性肿瘤女性患者40例(乳腺良性肿瘤组)及体检的健康者40例(健康对照组)作为研究对象。采用酶联免疫吸附试验检测并比较各组外周血中IL-35和Beclin-1水平,同时检测乳腺癌患者糖类抗原15-3(CA15-3),比较不同临床病理特征的乳腺癌患者IL-35、Beclin-1、CA15-3水平;分析乳腺癌患者外周血IL-35、Beclin-1、CA15-3水平之间的相关性。结果乳腺癌组和乳腺良性肿瘤组外周血IL-35水平均高于健康对照组(P<0.05),Beclin-1水平均低于健康对照组(P<0.05)。乳腺癌组外周血IL-35水平高于乳腺良性肿瘤组(P<0.05),Beclin-1水平低于乳腺良性肿瘤组(P<0.05)。不同病理分级、淋巴结转移情况的乳腺癌患者外周血IL-35、Beclin-1水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);不同雌激素受体(ER)检测结果的乳腺癌患者外周血IL-35水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),而Beclin-1水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌患者外周血IL-35水平与Beclin-1水平呈负相关(r=-0.484,P<0.05);IL-35、Beclin-1水平与CA15-3水平均无相关性(均P>0.05)。结论乳腺癌患者外周血IL-35水平升高、Beclin-1水平降低。不同病理分级、淋巴结转移情况的乳腺癌患者外周血IL-35、Beclin-1水平有明显差异。乳腺癌患者外周血IL-35水平与Beclin-1水平呈负相关,而IL-35、Beclin-1水平与肿瘤标志物CA15-3水平均无关。

CIK细胞对乳腺癌细胞株ZK-75-1的杀伤作用及其机制

目的：研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killing cells,CIK）对乳腺癌细胞株ZK-75-1的杀伤作用,并探讨其作用机制.方法：通过HE染色观察凋亡细胞ZK-75-1的形态学改变.应用TUNEL（TdT-mediated dUTPnick end labeling）法检测CIK细胞的凋亡.通过免疫细胞化学染色法检测ZK-75-1细胞中p53、p16、C-myc、Bcl-2及Bax的表达率.结果：HE染色显示,CIK细胞向ZK-75-1细胞靠近,形成典型的玫瑰花环状;肿瘤细胞的胞浆中出现颗粒状物,有的肿瘤细胞只见颗粒状碎片;而作为对照的乳腺癌细胞生长良好.TUNEL法检测显示,对照组细胞未染色或染呈均匀的淡蓝色;实验组凋亡的细胞缩小,核或核周染呈深蓝色.CIK细胞作用4～12 h ZK-75-1细胞的凋亡率上升,作用12～24h细胞的凋亡率下降,与对照组相比较有统计学意义（P＜0.01）.免疫细胞化学染色的结果表明,CIK细胞实验组p53、pi6、C-myc及Bcl-2蛋白随作用时间的延长均下降,Bax蛋白的表达上调,与对照组相比较均有统计学意义（P＜0.01）.结论：CIK细胞对乳腺癌细胞ZK-75-1杀伤作用的机制之一,可能与p53、p16、C-myc、Bcl-2蛋白表达的下调及Bax蛋白表达的上调有关,并与CIK细胞作用的时间关系密切.

PDHA1促进三阴性乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移

目的:三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)的发生发展重要特征之一是细胞代谢异常。本研究旨在探究丙酮酸脱氢酶复合体中的关键酶组分丙酮酸脱氢酶E1亚基α1(pyruvate dehydrogenase E1 subunit alpha 1,PDHA1)影响TNBC增殖、转移和侵袭能力的分子机制。方法:(1)运用UALCAN数据库、KM-plotter数据库、String数据库和TCGA数据库分析PDHA1在乳腺癌组织和癌旁组织的表达水平,根据肿瘤病理分期、亚型分型和乳腺癌生物标志物的表达,比较PDHA1的表达情况,并且富集PDHA1在TNBC中的相关信号通路。(2)进行免疫组化实验检测PDHA1在人TNBC癌旁和肿瘤组织样本的表达情况。(3)构建稳定敲除PDHA1和回补PDHA1的TNBC细胞系MDA-MB-231。运用集落形成实验和细胞计数实验检测PDHA1对MDA-MB-231细胞增殖的影响。使用划痕实验和Transwell方法检测PDHA1对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移的调节作用。通过Western blot实验,研究PDHA1缺失对MDA-MB-231细胞上皮-间充质转化通路相关蛋白的影响。结果:在数据库分析显示,乳腺癌高表达PDHA1组的生存期较短,预后较差。在临床样本中,肿瘤组织的PDHA1表达高于癌旁正常组织。敲除PDHA1会抑制MDA-MB-231细胞的增殖、转移与侵袭,抑制MDA-MB-231细胞上皮-间充质转化。结论:PDHA1在TNBC中过表达,促进TNBC细胞系MDA-MB-231的增殖、转移和侵袭。

miR-92a、sICAM-1、VEGF在乳腺癌组织中的表达及其与超声血流参数的相关性研究

目的探讨微小核糖核酸-92a(miR-92a)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、血管内皮生长因子(VEGF)在乳腺癌组织中的表达差异,并分析其与患者超声血流参数的相关性。方法选取乳腺癌患者102例作为乳腺癌组,同期收集乳腺良性肿瘤患者100例作为对照组。比较miR-92a、sICAM-1、VEGF在两组间的表达,分析其诊断价值。采用多普勒超声检测患者病变部位的血流参数,主要包括动脉血流峰值速度(PSV)、舒张末期血流速度(EDV)、脉动指数(PI)、阻力指数(RI),分析miR-92a、sICAM-1、VEGF与乳腺超声血流参数的相关性。结果乳腺癌组患者miR-92a、sICAM-1、VEGF水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),三项联合检测诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)为0.897,灵敏度为89.3%,特异度为90.0%。Logistic回归分析显示miR-92a、sICAM-1、VEGF是乳腺癌发生的重要危险因素(P<0.05)。乳腺癌组患者的PSV、EDV明显高于对照组,PI、RI明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示miR-92a、sICAM-1、VEGF水平与PSV、EDV呈正相关,与PI、RI呈负相关(P<0.05)。结论miR-92a、sICAM-1、VEGF在乳腺癌患者中明显升高,且与患者超声血流参数密切相关,是乳腺癌发生的重要危险因素,三项联合检测有助于乳腺癌的早期诊断及病情评估。

水疱性口炎病毒对小鼠乳腺癌4T1细胞荷瘤小鼠抗肿瘤免疫、移植瘤生长与肺转移的影响

目的:探究野生型水疱性口炎病毒印第安纳株(VSV-IN)对小鼠三阴性乳腺癌4T1细胞移植模型小鼠的免疫调节及肿瘤转移的影响。方法:VSV以MOI=1、MOI=10、MOI=100感染4T1细胞12、24、48 h后,CCK-8法检测4T1细胞死亡率,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,qPCR检测细胞中E-cadherin、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达。于雌性BALB/c小鼠脂肪垫接种1×10^(6)个/mL的4T1细胞0.1 mL,构建4T1细胞荷瘤小鼠模型,待小鼠肿瘤体积达200 mm3,分别向移植瘤内注射PBS、紫杉醇(TAX)(15 mg/kg)、VSV-IN(1×10^(6)pfu/只),每周1次。给药4次后,处死小鼠、剥离完整移植瘤组织,测量肿瘤体积及质量,肺组织病理切片经H-E染色后观察肿瘤肺部转移结节,流式细胞术检测脾组织中T细胞亚群比例,ELISA法检测小鼠血清IL-6及TNF-α水平,利用GEPIA在线分析乳腺肿中迁移相关蛋白mRNA的表达,免疫组化法检测肿瘤中MMP-2、MMP-9与E-cadherin的表达,利用蛋白-蛋白对接技术预测VSV-IN的G蛋白、M蛋白与ERK2、E-cadherin的亲和力。结果:经MOI=10、100的VSV-IN处理48 h后,4T1细胞死亡率显著高于对照组(均P<0.01);与对照组相比,VSV-IN组(MOI=10)细胞迁移率明显降低(P<0.01),MMP-9 mRNA的相对表达量明显降低(P<0.05);与对照组小鼠相比,VSV-IN组移植瘤生长较对照组减缓且终点体积显著减小(P<0.05),VSV-IN组小鼠肺转移结节数量显著减少[(12.86±1.86)vs(24±3.67)个,P<0.01],脾内CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞比例显著升高(均P<0.05),血清TNF-α、IL-6含量显著升高(均P<0.01);GEPIA分析发现在乳腺癌中E-cadherin、MMP-9表达水平均高于癌旁组织(P<0.05);VSV-IN组小鼠肿瘤细胞内MMP-9表达明显低于对照组(P<0.05);VSV-IN的G、M蛋白与ERK2的结合自由能分别为–11.7 kcal/mol、–6.4 kcal/mol。结论:野生型VSV-IN可抑制4T1细胞荷瘤小鼠的移植瘤生长及转移,这可能与其促进抗肿瘤免疫及调控迁移相关蛋白表达有关。

PD-L1在三阴性乳腺癌中的表达及临床病理意义

目的 探讨细胞程序性死亡配体1(PD-L1)在三阴性乳腺癌(TNBC)间质浸润免疫细胞中的表达及其临床病理意义。方法 选取2017年1月至2019年12月嘉兴市第二医院经外科手术切除的77例TNBC组织(TNBC组)及80例非三阴性乳腺癌组织(非TNBC组),采用免疫组化法检测PD-L1在两种组织间质浸润免疫细胞中的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果 PD-L1在TNBC组间质浸润免疫细胞中的阳性表达率(40.3%)显著高于非TNBC组(16.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。不同组织学级别、淋巴结转移、Ki-67表达以及间质浸润免疫细胞密度TNBC患者PD-L1阳性表达率比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 TNBC患者间质浸润免疫细胞中PD-L1阳性表达率显著高于非TNBC患者,PD-L1表达与TNBC患者组织学级别、淋巴结转移、Ki-67表达以及间质浸润免疫细胞密度等临床病理特征有关。

S6K1调控的蛋白表达图谱及其对乳腺癌细胞恶性表型的影响

目的:探究核糖体蛋白S6激酶β-1(S6K1)所调控的蛋白表达图谱及其对乳腺癌细胞恶性表型的影响。方法:通过cBioPortal和GEPIA数据库分析S6K1基因在乳腺癌组织中的扩增及表达,并评估其表达对乳腺癌患者临床特征的影响;利用小干扰RNA在乳腺癌MCF7细胞中敲降S6K1,通过质谱技术检测S6K1所调控的蛋白表达图谱;采用细胞成球实验探究S6K1表达水平改变对乳腺癌细胞干性的影响;通过细胞迁移实验探究S6K1对乳腺癌细胞迁移能力的影响。结果:S6K1基因在乳腺癌组织中存在高频扩增现象,在浸润性乳腺癌中的扩增率高于非浸润性乳腺癌(P<0.05),且S6K1的高频扩增与患者的不良预后相关(P<0.01);S6K1在乳腺癌组织中的表达水平较癌旁组织高(P<0.01),而S6K1在乳腺癌不同临床分期中表达水平无明显差异(P>0.05)。质谱检测表明敲降S6K1后,乳腺癌MCF7细胞中有251个蛋白表达上调,224个蛋白表达下调;GO通路富集分析表明,差异表达蛋白参与了细胞质翻译、蛋白质稳定、干细胞群体维持、细胞迁移等多个生物学过程相关通路;与对照组相比,成球实验和迁移实验表明敲降S6K1可显著抑制乳腺癌细胞干性表型和迁移能力(P<0.01)。结论:S6K1在乳腺癌细胞中调控多个生物学过程相关蛋白的表达,敲降S6K1明显抑制了乳腺癌细胞的干性和迁移能力,表明S6K1可能成为乳腺癌治疗的新靶点。

免疫检查点细胞程序性死亡蛋白-1和淋巴细胞活化基因-3在三阴性乳腺癌中的研究进展

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,其中三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)是一种特殊的乳腺癌亚型,占所有乳腺癌类型的15%~20%。由于TNBC患者无法从内分泌治疗及分子靶向治疗中获益,其预后往往较差,且易复发。化疗是晚期TNBC的标准治疗方法,但患者常出现化疗耐药。因此,为TNBC患者寻找新的治疗方法迫在眉睫。目前,免疫检查点抑制剂在TNBC的治疗中取得了一定突破。基于此,本文将对免疫检查点细胞程序性死亡蛋白-1和淋巴细胞活化基因-3在TNBC中的研究进展做一综述。

JAG1影响单核-巨噬细胞重塑三阴性乳腺癌转移前微环境:基于外泌体中的LncRNA MALAT1

目的探讨JAG1对单核-巨噬细胞在三阴性乳腺癌(TNBC)中肿瘤转移前微环境(PMN)中作用的影响及其可能的调控机制,以期为TNBC诊疗提供新的思路和靶点。方法人TNBC细胞MDA-MB-231,MDA-MB-231B体外培养,qRT-PCR检测JAG1的表达。动物实验将雌性裸鼠分为MDA-MB-231组和MDA-MB-231B组,5只/组,分别往乳腺脂肪垫注射细胞5×10^(6),6周取肿瘤组织进行免疫组化分析。人源单核细胞THP-1为研究对象,分别经人源JAG1重组蛋白(rhJAG1)直接处理或经TNBC条件培养基(CM)处理,通过单核-内皮粘附、Transwell、qRT-PCR和Western blot实验检测JAG1对单核细胞的直接作用和在PMN中的影响。实验分为5组:Control组:THP-1正常培养;231-CM组:THP-1+231-CM;231-JAG1-CM组:THP-1+rhJAG1处理后231-CM;231B-CM组:THP-1+231B-CM;231-DAPT-CM组:THP-1+DAPT处理后231-CM。透射电镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析(NTA)检测JAG1对TNBC外泌体分泌影响。生物信息学筛选与LncRNA MALAT1相互作用的miRNA并行qRT-PCR验证。结果与MDA-MB-231相比,侵袭株MDA-MB-231B的JAG1表达更高(P<0.01),肝转移面积更大;rhJAG1直接处理和TNBC条件培养基处理均能促进单核细胞的黏附、迁移,并影响其分化(均P<0.05);透射电镜和NTA检测显示JAG1能促进MDA-MB-231外泌体分泌数量增多(P<0.01),外泌体中LncRNAMALAT1含量升高(P<0.0001)。生物信息学分析得到与LncRNA MALAT1和JAG1相关的5个候选miRNA,实验证实miR-26a-5p在TMN中的单核-巨噬细胞中受到MALAT1的靶向调控(P<0.0001)。结论JAG1能促进TNBC的外泌体分泌并影响其中Lnc MALAT1的表达,从而靶向PMN中单核-巨噬细胞miR-26a-5p的表达,从而使单核-巨噬细胞中JAG1表达升高,进而影响单核-巨噬细胞在PMN中的黏附、迁移和破骨分化作用。

胰岛素样生长因子-1、肝细胞生长因子、肿瘤间质比值诊断乳腺癌患者淋巴结转移的价值及与预后的关系

目的:探讨血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、肝细胞生长因子(HGF)、肿瘤间质比值(TSR)诊断乳腺癌发生淋巴结转移的价值及与患者预后的关系。方法:采取回顾性研究方法,选取2015年6月—2017年8月北京市通州区妇幼保健院乳腺科收治的120例乳腺癌患者作为研究对象,根据手术后病理学结果患者是否发生淋巴结转移将其分为复发转移组24例、未复发转移组96例,对比两组患者的血清IGF-1、HGF、TSR值,采用受试者工作特组(ROC)曲线分析三项指标诊断乳腺癌患者发生淋巴结转移的价值;采用Logistic回归模型分析乳腺癌病理学特征、治疗方法及IGF-1、HGF、TSR与乳腺癌患者预后结局的关系。结果:乳腺癌淋巴结转移组患者的IGF-1、HGF测定值高于未转移组,TSR水平低于未转移组,差异均有统计学意义(P<0.05);IGF-1、HGF、TSR测定值诊断乳腺癌发生淋巴结转移的ROC曲线下面积值分别为0.837(0.766~0.907)、0.842(0.773~0.911)、0.880(0.821~0.938);Logistic回归分析结果显示:TNM分期≥Ⅱ期、发生淋巴结转移、IGF-1水平增高、HGF水平增高、TSR低水平会增加乳腺癌患者手术治疗后复发转移的风险(P<0.05)。结论:IGF-1、HGF水平增高及TSR降低会增加乳腺癌患者发生手术后复发的风险,术前检查IGF-1、HGF及TSR可以评估是否发生淋巴结转移,对手术方案制定有一定的参考价值。

抑癌基因PTEN对乳腺癌ZR-75-1细胞增殖和转移的抑制作用

背景与目的:研究表明,抑癌基因PTEN不仅能抑制肿瘤细胞的增殖,还能抑制其转移,但其机理还不甚明了。本文研究抑癌基因PTEN对人乳腺癌ZR-75-1细胞增殖和转移的作用。方法:以脂质体介导法分别将野生型PTEN质粒和磷酸酶缺陷的PTEN质粒转染人乳腺癌ZR-75-1细胞,用MTT法测定细胞增殖抑制率;转染后用嘌呤霉素筛选阳性克隆。用Western blot法检测细胞中PTEN蛋白的表达。通过细胞-基质粘附实验和人工重组基底膜侵袭实验,检测细胞粘附抑制率与侵袭抑制率。结果:野生型PTEN质粒转染的ZR-75-1细胞增殖明显被抑制,并伴有部分细胞凋亡;该细胞与未经转染的和磷酸酶缺陷的PTEN质粒转染的ZR-75-1细胞比较,细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(42.7% vs.0%及2.7%,P<0.01),细胞增殖抑制效应随细胞培养时间与质粒浓度的增加而增强。而磷酸酶缺陷的PTEN质粒转染的与未经质粒转染的ZR-75-1细胞比较,细胞增殖抑制率差异无统计学意义(2.7%vs.0%,P>0.05)。在两种PTEN质粒转染的ZR-75-1细胞中PTEN蛋白均明显表达,其中转染野生型PTEN质粒的细胞的粘附抑制率与侵袭抑制率分别达65.7%和70.4%,而转染磷酸酶缺陷的PTEN质粒的ZR-75-1细胞的粘附抑制率与侵袭抑制率分别只有8.8%和6.9%(P<0.05)。结论:具有双特异磷酸酶活性的野生型PTEN基因对ZR-75-1细胞的增殖和转移有一定的抑制作用。

^(188)Re诱导乳腺癌ER-75-30细胞凋亡及其与bcl-2、bax基因表达的研究

目的 研究放射性核素188铼 (188Re)诱导乳腺癌ER 75 3 0细胞凋亡及其与bcl 2和bax基因表达的关系。方法 应用光镜、电镜、流式细胞仪和免疫组化图像分析技术 ,检测不同浓度188Re作用于体外培养的乳腺癌ER 75 3 0细胞后 ,不同时间点诱导细胞凋亡情况及其与bcl 2和bax基因表达情况。结果 188Re能诱导乳腺癌ER 75 3 0细胞发生凋亡形态学变化 ,并且随着188Re浓度增大和作用时间延长 ,凋亡率增加 ,bcl 2表达减弱 ,bax表达增强。结论 188Re能诱导乳腺癌ER 75 3 0细胞凋亡且具有浓度、时间和周期依赖性 ,bcl

重组人TNF-α诱导乳腺癌细胞ZR75-1凋亡及其机制的初步研究

背景与目的:肿瘤坏死因子α(TNF-α)是抗肿瘤活性较强的细胞因子,是重要的抗肿瘤生物治疗制剂之一,但由于其对人体有较严重的副作用,临床应用受到了限制。为了降低其毒副作用,同时保留其抗肿瘤能力,TNF-α的突变体——突变型471TNF-α应运而生。本研究对重组人突变型471rhTNF-α与野生型rhTNF-α蛋白的抗肿瘤能力进行了比较,并对突变型471rhTNF-α诱导ZR75-1细胞发生凋亡的作用机制进行初步研究。方法:以乳腺癌细胞系ZR75-1为靶细胞,以基因组DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞技术分析100"g/L突变体471rhTNF-α与100"g/L野生型rhTNF-α作用ZR75-1细胞12h,肿瘤细胞发生凋亡的情况;利用以ELISA为基础的TransAMTMNF-κBp65试剂盒检测10μg/L、50μg/L和100μg/L突变体471rhTNF-α或野生型rhTNF-α作用ZR75-1细胞4h后核因子NF-κB的活化情况。结果:2%琼脂糖凝胶电泳显示,突变体471rhTNF-α处理组的ZR75-1细胞基因组DNA呈现明显的“ladder”状分布,野生型rhTNF-α处理组的“ladder”条带明显减弱;流式细胞仪分析显示,突变型471rhTNF-α诱导的凋亡峰面积为(44.6±3.6)%,野生型rhTNF-α诱导凋亡峰面积占(24.7±2.7)%,两组差异具有显著性(P<0.05);从细胞周期结果来看,突变型471rhTNF-α处理组G1期细胞占(66.6±4.2)%,比例明显高于对照组[(34.8±3.1)%]与野生型hTNF-α[(46.2±3.8)%],S期细胞占(33.2±2.9)%,比例明显低于对照组[(50.1±3.8)%]与野生型hTNF-α处理组[(45.7±2.9)%],G2期细胞比例为(0.2±0.1)%,明显低于对照组[(15.1±2.2)%]和野生型hTNF-α处理组[(8.1±3.1)%],而野生型hTNF-α处理组与对照组相比均无明显变化(P>0.05)。NF-κB活化检测结果显示,50"g/L野生型rhTNF-α处理ZR75-1细胞4h后NF-κB的活化量(A值为3.27±0.1)明显高于突变型471rhTNF-α处理组(A值为1.51±0.2)。结论:突变型471rhTNF-α比野生型rhTNF-α具有更强的诱导ZR75-1细胞凋亡的能力;ZR75-1细胞内NF-κB活化明显受限是突变型471rhTNF-α诱导凋亡能力增强的主要原因之一。