一例ZMPSTE24基因复合杂合突变导致颅骨下颌骨皮肤发育不全B型的诊断和基因检测分析

颅骨下颌骨皮肤发育不全(mandibuloacral dysplasia,MAD)是一种罕见的常染色体隐性遗传疾病,主要与LMNA及ZMPSTE24基因发生变异有关。本文报道了国内首例颅骨下颌骨皮肤发育不全B型患者,主要表现为特殊面容、喂养困难、体格生长明显落后、全面的发育迟缓伴牙齿和骨骼发育异常。全外显子组家系测序结果显示患者携带ZMPSTE24基因c.743C>T(p.Pro248Leu)(dbSNP:rs121908095)与1~10号外显子缺失的复合杂合突变,经Sanger测序与定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)实验检测显示,两个突变分别遗传自其表型正常的母亲与父亲。通过总结分析该例病例特点及其家系遗传规律,对于临床上难以进行明确诊断的疾病,建议进行全外显子组家系测序,辅助疾病的诊断。该病例的发现提高了临床医师对MAD疾病的认识,也为该疾病后续的遗传学研究提供新的临床资料。

Zmpste24基因缺失与早老症

衰老是一种生理完整性丧失,功能受损,疾病和死亡风险增加的过程。早老症(HGPS)是一种加速化的衰老疾病,是研究人类正常衰老理想的疾病模型。由LMNA基因突变产生prelamin AΔ50在细胞内累积是造成早老症的主要原因,早老症病人表现出寿命急剧缩短,老化特征明显的现象,例如脱发、皮下脂肪减少、骨质疏松以及早逝。锌金属蛋白酶Zmpste24是prelamin A加工成为成熟lamin A蛋白的关键酶。敲除Zmpste24基因的小鼠表现出与早老症高度一致的衰老表型,同时也存在非常相似的发病机制,如染色质异常、DNA损伤和干细胞功能缺失等。Zmpste24缺失小鼠作为典型的早老模型小鼠因其衰老周期短,衰老特征明显而获得广泛应用。本文总结了以Zmpste24缺失早老小鼠为模型取得的早老相关分子机制的研究进展,以及抗衰老策略的最新发现。

miR-23a/27a/24基因簇g.65307469G>A突变对大白猪产仔数和启动子活性的影响

[目的]本文旨在研究大白猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点多态性与产仔数性状的关系及潜在机制,为母猪繁殖性状的分子育种提供新的潜在遗传标记。[方法]利用混池测序技术筛选猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点,直接测序法对大白猪群体(n=345)miR-23a/27a/24基因簇突变位点进行基因分型,计算遗传多样性;用线性模型对突变位点多态性与产仔数性状进行关联性分析;构建不同等位基因类型启动子载体,转染猪卵巢颗粒细胞,通过检测荧光素酶活性分析突变对启动子活性的影响;用生物信息学方法预测不同等位基因类型启动子潜在结合的差异转录因子,用荧光素酶活性分析差异转录因子对不同等位基因类型启动子活性的影响。[结果]在猪miR-23a/27a/24基因簇启动子-648 nt(Chr.2,65307469 nt)处发现1个新的G/A突变,命名为g.65307469G>A。在大白猪群体中发现3种基因型(GG、GA和AA),其中GG为优势基因型(89.57%),G等位基因为优势等位基因(94.64%)。关联性分析发现,GA基因型母猪的总产仔数(TNB)比GG基因型母猪每胎高0.56头(P<0.05)。荧光素酶活性分析结果显示G等位基因类型启动子活性显著高于A等位基因类型(P<0.05)。在不同等位基因类型启动子间发现1个潜在结合的差异转录因子死亡相关蛋白1(THAP1),成功构建猪THAP1基因过表达载体,共转试验结果显示转录因子THAP1对不同等位基因类型启动子活性均无显著影响(P>0.05)。[结论]miR-23a、miR-27a和miR-24是大白猪产仔数性状的候选基因,g.65307469G>A突变抑制miR-23a/27a/24基因簇的启动子活性,但与转录因子THAP1无关。

罕见β-珠蛋白基因Codon 24(GGT>GGA)突变导致β-地中海贫血1例及文献分析

目的:分析罕见β-珠蛋白基因突变类型、血液学及临床特征。方法:收集疑为β-地中海贫血的病例120例。对病例进行全血细胞分类及计数、血红蛋白(Hb)电泳分析检测。用跨越断裂点PCR方法、荧光PCR熔解曲线方法、DNA测序等分析α-和β-珠蛋白基因突变类型。结果:120例β-地中海贫血病例中,检出1例为罕见β-珠蛋白基因突变,基因分析为Codon 24(GGT>GGA,HBB:c.75T>A)杂合子。该病例为男性,39岁,血常规检测显示:Hb 127.3 g/L,血红细胞(RBC)5.81×10^(12)/L,红细胞平均体积(MCV)70.29 fL,红细胞平均血红蛋白量(MCH)21.94 pg,红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)312.10 g/L。Hb分析显示Hb A_(2)4.5%,Hb F 0.4%。a-地中海贫血基因分析未发现常见的基因突变类型。结论:首次在国内发现罕见β-珠蛋白基因Codon 24(GGT>GGA,HBB:c.75T>A)突变导致β-地中海贫血。该病例在临床上易漏诊,应引起重视。

老年人群24 h脉压、脉压指数水平及ApoE基因型频率分布与脑微出血关系研究

目的探讨老年缺血性脑血管病患者24 h脉压、脉压指数水平及ApoE基因型频率分布与脑微出血的关系。方法纳入2022年7月至2023年7月蚌埠医科大学附属蚌埠市第三人民医院神经内科住院的缺血性脑血管病患者146例,根据磁敏感加权成像(SWI)检测结果分为非CMBs组和CMBs组。收集并记录入组患者临床资料及24 h脉压、脉压指数,并检测ApoE基因多态性。结果非CMBs组与CMBs组24 h脉压、脉压指数水平、ApoE基因型及等位基因频率分布差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,ε4等位基因携带组(OR=5.321,95%CI:1.849~15.318)、24 h脉压(OR=1.086,95%CI:1.031~1.143)是老年缺血性脑血管病发生脑微出血的危险因素;ε4等位基因携带组增加了脑叶、深部/幕下组微出血发生率,24 h宽脉压增加了深部/幕下组CMBs发生率。结论24 h脉压、脉压指数水平以及ApoE基因型频率分布与老年缺血性脑血管病发生脑微出血具有一定的关系,ε4等位基因、24 h宽脉压增加脑微出血风险。

基于CRISPR/Cas9系统建立新吉富罗非鱼双等位基因敲除技术——以SLC24A5基因为例

目前,簇状规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)相关蛋白Cas9系统(CRISPR/Cas9)已经成为提高真核生物基因组编辑效率的主要技术。然而,对于像罗非鱼这样繁殖周期较长的物种,CRISPR/Cas9技术由于低纯合效率,在进行大规模遗传筛选研究时面临一定的困难。为了解决这一问题,以罗非鱼为模型,以SLC24A5基因为例,开发了一种高效的CRISPR/Cas9方法,能够在注射的胚胎中以相对稳定的概率直接实现F_(0)代的双等位基因敲除。具体而言,采用两个高效的gRNA进行混合,Cas9蛋白的浓度为800 ng·μL^(-1),Cas9蛋白与gRNA的质量比例为4:1,注射剂量控制在1 nL,即800 pg的Cas9蛋白和200 pg的gRNA。这一敲除技术使得在新吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)的F_(0)代注射胚胎中,能够直接产生表型外显率(Lv.1、Lv.2、Lv.3和Lv.4)为71%的个体,其中显著表型外显率(Lv.1和Lv.2)为17%。这一技术突破为罗非鱼的遗传筛选提供了便利和高效的手段。

CYP24A1基因多态性与结直肠息肉和结直肠癌的相关性研究

目的:分析CYP24A1基因多态性与结直肠息肉、结直肠癌发病的关系。方法:以110例健康者、118例结直肠息肉患者、139例结直肠癌患者作为本次研究对象,健康者纳入对照组,结直肠息肉患者纳入结直肠息肉组,结直肠癌患者纳入结直肠癌组,三组对象均行CYP24A1基因检测,对比三组对象rs114368325、rs2296239二个位点的基因多态性。结果:测序结果显示,CYP24A1基因rs114368325、rs2296239两个位点分别测出2种、3种基因型,前2种基因型分别为GG、AG,后3种基因型分别为CC、CT、TT,这些位点测序结果符合哈.温平衡定律与酶切结果。且各组位点突变基因型AG和等位基因A的携带频率在对比均无显著差异(P>0.05)。结论:CYP24A1rs114368325、rs2296239二个位点的基因多态性与结直肠息肉和结直肠癌无明显相关性。

CYP24A1酶多态性rs2762939与冠状动脉疾病的相关性

目的:探讨CYPs 24亚家族A成员1(CYP24A1)酶多态性rs2762939和环境因素的交互作用及其与冠状动脉疾病(CAD)的相关性。方法:选取2019年2月—2021年2月我院收治的230例CAD病人作为观察组,另选取同期于我院进行体检的183名冠状动脉无明显病变的健康者作为对照组。比较两组一般资料;采用Sanger测序法检测CYP24A1基因rs2762939多态性;采用多因素非条件Logistic回归分析影响CAD发生的因素;比较rs2762939不同基因型病人间的临床特征;分析rs2762939基因型与环境因素的交互作用。结果:两组收缩压、舒张压、糖尿病、高血压、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、同型半胱氨酸(Hcy)、rs2762939基因型、等位基因比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。糖尿病、高血压、TC、TG水平升高、CYP24A1酶多态性rs2762939基因型为GC型、CC型、C等位基因是导致CAD发生的独立危险因素(P<0.05)。GG型、GC型、CC型糖尿病、高血压比例、TC、TG比较,差异均有统计学意义(P<0.05);CC型糖尿病、高血压比例、血清TC、TG水平高于GG型、GC型,差异均有统计学意义(P<0.05)。rs2762939基因型GC型、CC型与糖尿病、高血压、TC、TG存在明显的交互作用(P<0.05)。结论:携带rs2762939基因型为GC型、CC型属于CAD高危人群,这些基因型与糖尿病、高血压、TC、TG之间的交互作用促进了CAD的发生发展。

血清Ⅱ型鸡马立克氏病毒的分离鉴定及SW14分离株pp24基因的序列分析

为了解鸡马立克氏病毒(MDV)在我国鸡群中的流行情况,本研究于2021年从福建省已免疫鸡马立克氏病(MD)疫苗鸡群且发生疑似MD病例的鸡场采集21份疑似发病蛋鸡外周血,分离其淋巴细胞接种鸡胚成纤维细胞(CEF),5 d后收集病毒,盲传1~2代后获得21株能够形成典型MDV蚀斑的分离株,依次命名SW1~SW21,采用PCR分别扩增MDV血清Ⅰ型(MDV-1) Meq基因、Ⅱ型(MDV-2) ORF873基因、Ⅲ型(MDV-3) US3基因进行MDV分型鉴定,扩增鸡传染性贫血病毒(CAV) VP3基因、禽网状内皮组织增殖病病毒(REV) LTR基因、禽白血病病毒A亚群(ALV-A)、B亚群(ALV-B)、J亚群(ALV-J)的env基因进行外源病毒检测,结果显示MDV-1均为阴性,MDV-2均为阳性,MDV-3阳性率为38.1%(8/21),未检测到外源病毒基因。在MDV-2分离株中选择SW14株进行pp24基因的PCR扩增,测序后与MDV-2参考株SB-1、301B/1、HPRS24的pp24基因进行基因序列比对分析,结果显示,SW14和SB-1株同源性(96.3%)最高。通过透射电镜观察SW14,可见分离株呈双环型,直径约110 nm,符合MDV病毒粒子形态特征。本研究证实该鸡场中存在MDV-2流行,可能会影响疫苗的免疫效果,但其致病性有待进一步研究。本研究从疑似发病蛋鸡中分离到新的MDV-2株,为我国MDV-2的研究提供重要参考依据,同时为我国MD疫情防控提供有价值的研究材料。

血清lncRNA DUXAP8及miR-24-3p在子痫前期诊断及妊娠结局评估中的价值

目的分析血清长非编码RNA双同源盒A伪基因8(lncRNA DUXAP8),微小RNA(miR)-24-3p在子痫前期(PE诊断及妊娠结局评估中的价值。方法选取2019年3月至2022年9月承德市中心医院妇儿院区产科124例PE患者为PE组,同期健康孕妇124例为对照组。根据妊娠结局分为不良组27例和良好组97例。均采用qRT-PCR法测定血清lncRNA DUXAP8、miR-24-3p水平。采用多因素Logistic回归分析PE孕妇妊娠结局影响因素。采用ROC曲线分析血清lncRNA DUXAP8、miR-24-3p水平诊断PE及预后的价值。结果PE组血清lncRNA DUXAP8水平低于对照组,miR-24-3p水平高于对照组(P<0.05)。TargetScanHuman网站预测显示,lncRNA DUXAP8与miR-24-3p间可能存在靶向关系。相关性分析表明,lncRNA DUXAP8与miR-24-3p呈负相关(r=-0.471,P<0.001)。血清lncRNA DUXAP8、miR-24-3p联合诊断PE的AUC显著高于单独诊断(Z_(lncRNA DUXAP8-联合)=3.285,P=0.001;Z_(miR-24-3p-联合)=3.020,P=0.003),联合诊断的敏感性为92.74%,特异性为72.31%。良好组孕妇血清lncRNA DUXAP8水平高于不良组,miR-24-3p水平低于不良组(P<0.05)。良好组孕妇收缩压、舒张压、产前血糖、血红蛋白、24 h尿蛋白、白细胞计数、LDH低于不良组,血小板计数、血清白蛋白高于不良组(P<0.05)。lncRNA DUXAP8是PE孕妇妊娠结局不良保护因素,miR-24-3p是危险因素(P<0.05)。血清lncRNA DUXAP8、miR-24-3p联合诊断PE孕妇妊娠结局的AUC显著高于单独诊断(Z_(lncRNA DUXAP8-联合)=2.113,P=0.035,Z_(miR-24-3p-联合)=3.033,P=0.002),联合诊断的敏感性为88.89%,特异性为80.41%。结论PE孕妇lncRNA DUXAP8水平降低,miR-24-3p水平升高,可能与PE的发生和孕妇妊娠结局相关。

醛缩酶A对膀胱癌T24细胞增殖和侵袭的影响

目的探索醛缩酶A(ALDOA)过表达和基因敲减对膀胱癌T24细胞生长和侵袭的影响,为探讨泌尿系统肿瘤发病机制提供理论依据。方法通过慢病毒感染构建稳定表达的ALDOA过表达和基因敲减膀胱癌T24细胞重组细胞株,采用荧光定量PCR(RT-PCR)法检测重组细胞ALDOAmRNA的表达情况;采用CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell小室实验检测重组T24细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果RT-PCR检测结果显示,过表达组重组T24细胞ALDOAmRNA的相对表达量较对照组更高,基因敲减组较对照组更低,证实膀胱癌T24细胞重组细胞株构建成功;CCK-8法检测重组细胞增殖结果显示:在培养72、96 h时,过表达组重组T24细胞生存率均较对照组更高;在培养96 h时,基因敲减组T24细胞生存率较对照组更低;划痕愈合实验结果显示:在培养24 h时,过表达组重组T24细胞划痕愈合率较对照组更高;Transwell小室细胞实验结果显示:在培养48 h时,过表达组重组T24细胞迁移数较对照组更多,过表达组重组T24细胞侵袭数较对照组更多(均P<0.05);培养24 h时,基因敲减组重组T24细胞划痕愈合率较对照组更低;在培养48 h时,基因敲减组重组T24细胞迁移数较对照组更少,但差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论ALDOA过表达可促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭,ALDOA基因敲减可减少膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭。

紫花苜蓿MsBBX24基因的克隆及耐盐性分析

盐胁迫是影响植物生长发育的主要非生物胁迫因子之一,BBX家族转录因子在植物色素积累、光形态发生、种子生长发育以及逆境适应等方面具有重要的调节作用。为明确紫花苜蓿BBX基因的功能,本研究使用Primer Premier 5软件根据NCBI数据库MsBBX24基因的序列设计特异性引物,以紫花苜蓿的cDNA为模板克隆MsBBX24基因。利用生物信息学软件对基因序列和结构进行分析,并与其他植物的BBX24进行比对和进化树构建,分析它们之间的进化关系。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析MsBBX24基因的表达模式。利用DNA的酶切与连接方法构建MsBBX24过表达载体,采用农杆菌介导法将其转入野生型拟南芥,通过除草剂Basta筛选,以半定量RT-PCR鉴定获得阳性转基因植株。通过对野生型和MsBBX24转基因拟南芥植株的表型观察和生理指标测定分析它们的耐盐性。研究结果表明,MsBBX24基因编码区序列长723 bp,编码240个氨基酸,分子量为30.58 kDa,等电点为7.74,MsBBX24与鹰嘴豆和蒺藜苜蓿的BBX24具有较高的同源性。qRT-PCR检测结果表明,MsBBX24基因的表达量受盐胁迫(150 mmol·L^(-1)NaCl)诱导。在拟南芥中过表达MsBBX24基因分析表明,在NaCl胁迫下,MsBBX24基因的过表达能够促进幼苗根和侧根的生长,提高子叶绿化率,同时显著降低了转基因植株的相对电导率(IL)、丙二醛(MDA)和过氧化氢(H_(2)O_(2))含量,提高了叶绿素(Chl)和脯氨酸(Pro)含量、过氧化氢酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。MsBBX24基因响应盐胁迫,主要通过提高抗氧化防御系统清除活性氧以增强转基因植株的耐盐性,MsBBX24基因可为紫花苜蓿耐盐分子育种提供重要的候选基因。

叶艺兰CcMYB24基因克隆及生物信息学分析

以叶艺兰(Cymbidium tracyanum var.‘huanghua’×C.iridioides D.Don.‘Yeyi’)为试材,以课题组前期获得的叶艺兰上调表达CcMYB24基因的EST序列为基础,采用PCR技术扩增全长,并进行生物信息学分析和亚细胞定位,研究了CcMYB24基因功能,以期为植物MYB24的结构与功能利用提供参考依据。结果表明:CcMYB24基因全长908 bp,编码301个氨基酸,生物信息学分析预测CcMYB24蛋白是偏碱性、不稳定、亲水、非跨膜的非分泌蛋白;CcMYB24氨基酸序列具有1个特定匹配的保守MYB蛋白DNA结合域,且含有2个R结构,属于R2R3-MYBs家族;亚细胞定位结果显示CcMYB24蛋白定位在细胞核上。系统进化树表明,其与建兰(Cymbidium ensifolium)亲缘关系最近,与建兰CeRAX2-like同源性最高,为95.99%。因CcMYB24基因属于R2R3-MYBs家族,推测CcMYB24转录因子可能发挥着与R2R3-MYB转录因子相似的作用。

ZMPSTE24基因杂合变异致不典型下颌骨发育不良伴B型脂肪代谢障碍1例

目的 报道1例ZMPSTE24基因复合杂合变异c.743C>T(p.P248L)/loss1(EXON:1-10)(all)导致的下颌骨发育不良伴B型脂肪代谢障碍(MADB,OMIM#608612)病例,总结临床特征及基因突变的特点,为进一步了解MADB提供参考。方法 对1例ZMPSTE24基因复合杂合变异的不典型MADB患儿的临床资料和测序结果进行分析,结合人类基因突变数据库和PubMed,对ZMPSTE24基因突变所致疾病临床表型进行文献复习。结果 1例患儿具有MADB临床表型,外周血染色体及基因测序检测到ZMPSTE24基因复合杂合变异(c.743C>T (p.P248L)/loss1(EXON:1-10)(all)),查询MAF数据库、gnomAD数据库和千人基因组数据库,目前未见该变异类型。结论 本例检测到的ZMPSTE24基因复合杂合变异与MADB高度相关。本研究提示ZMPSTE24基因存在多种变异形式,可导致多种形式的临床表型,基因检测可明确诊断。早期基因诊断可为临床及时干预和遗传咨询提供依据。

ZMPSTE24表达水平与原发性胶质瘤的关系:一项基于CGGA数据库的研究

目的探讨ZMPSTE24表达水平与原发性胶质瘤的关系。方法从中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)下载325例胶质瘤患者的临床数据和mRNA测序数据。提取ZMPSTE24基因表达量并与临床数据配对合并,同时剔除相关临床数据缺失的病例。依据ZMPSTE24基因在原发性胶质瘤患者(n=210)组织中表达量的中位值(18.61)将入选病例分为高表达组(105例)和低表达组(105例)。采用Wilcoxon符号秩检验和Logistic回归分析ZMPSTE24表达水平与各临床因素的相关性。使用Cox回归和Kaplan-Meier方法评估ZMPSTE24表达水平与胶质瘤患者总生存期的影响。通过基因富集和共表达分析,推测ZMPSTE24可能参与的分子通路和上下游分子。用STRING数据库,寻找与ZMPSTE24存在相互作用的分子并评价其价值。利用TIMER2.0数据库探究ZMPSTE24表达水平与胶质瘤免疫浸润细胞之间的相关性。最后利用人类蛋白图谱数据库(HPA)和临床胶质瘤病理组织行免疫组织化学和蛋白免疫印迹实验进行验证。结果在CGGA数据库中,原发性胶质瘤患者ZMPSTE24高表达组的总生存率显著低于低表达组(P<0.001),并与WHO分级、IDH分型、年龄等相关(P<0.001)。Cox回归分析显示,ZMPSTE24可能是胶质瘤患者的独立预后因素(P<0.001)。蛋白印迹实验提示,肿瘤分级级别越高,ZMPSTE24的表达水平相对越高。结论ZMPSTE24表达水平越高,提示胶质瘤肿瘤分级较高,预后较差。

鹌鹑SLC24A5基因多态性与羽色性状的关联性分析

为研究SLC24A5基因与鹌鹑羽色性状的关系,试验采用RT-qPCR方法研究朝鲜鹌鹑和北京白羽鹌鹑在胚胎不同发育时期的mRNA表达水平。结果显示:SLC24A5基因在朝鲜鹌鹑胚胎发育时期的表达水平极显著高于北京白羽鹌鹑(P<0.01);鲜鹌鹑和北京白羽鹌鹑的3种基因型频率分布差异极显著(P<0.01)。位于外显子1的SNP1(c.A5T)和外显子6的SNP2(c.G703A)均为中性位点,但SNP2(c.G703A)位点造成的编码蛋白G235S位点突变并不保守,属于多变性位点。研究表明,SLC24A5基因与鹌鹑羽色性状有关联性,可以为鹌鹑羽色育种提供理论依据。

ZM PSTE24基因突变致限制性皮病1例病例报告并文献复习

目的报告1例ZMPSTE24基因突变致胎儿死亡的限制性皮病(RD)病例,总结临床特征及基因突变的特点,为产前咨询提供依据。方法对1例ZMPSTE24基因突变的RD患儿的临床资料和测序结果进行分析,结合人类基因突变数据库(HGMD)和PubMed,对ZMPSTE24基因突变所致疾病临床表型进行文献复习。结果男,死胎,G1P1。母亲孕27周行超声检查,胎儿臀位、羊水过少、羊水指数1.9 cm、胎儿右侧胸腔少量积液。孕31+3周因胎膜早破入院,伴妊娠期糖尿病,超声示胎儿宫内重度生长受限。孕32+2周娩出一男死胎,具有典型RD表型。为明确病因诊断行新生儿panel测序并行Sanger测序验证,检测到ZMPSTE24基因的一个纯合移码突变(c.1085dupT,p.Leu362PhefsTer19),为已报道的RD热点突变,突变频率达57.14%。检索HGMD和PubMed,共检索到ZMPSTE24基因的32种致病突变(63例),导致4种不同的疾病表型。检索万方、中国知网和PubMed数据库,检索时间从建库至2019年7月25日,共有49例(包括本文1例)ZMPSTE24突变导致RD。ZMPSTE24突变的临床表型严重程度与锌金属蛋白酶活性和核纤层蛋白前体蛋白的堆积程度相关。结论本例检测到的Leu362PhefsTer19突变为ZMPSTE24基因热点突变,ZMPSTE24基因型与临床表型呈高度相关。本研究提示妊娠期胎儿发育异常应注意RD可能,基因检测可明确诊断。早期基因诊断可为临床及时干预和遗传咨询提供依据。

Myod1通过调节lncRNA SNHG15和miR-24-3p对氧糖剥夺SH-SY5Y细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨肌源性分化蛋白1(Myod1)对氧糖剥夺(OGD)诱导的SH-SY5Y细胞增殖抑制和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测正常对照组研究对象和缺血性脑梗死组患者外周血及正常培养的SH-SY5Y细胞(对照组)和OGD细胞模型(OGD组)细胞中Myod1和长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)mRNA表达水平。分别采用si-Myod1、pcDNA3.0-Myod1、si-SNHG15、pcDNA3.0-SNHG15、si-NC、空载质粒(Vector)、miR-NC和miR-24-3p模拟物(miR-mimics)质粒转染SH-SY5Y细胞后,进行OGD处理,将SH-SY5Y细胞分为对照组、OGD组、OGD+Vector组、OGD+Myod1组、OGD+si-NC组、OGD+si-Myod1组、OGD+si-SNHG15组、OGD+si-SNHG15+Vector组、OGD+si-SNHG15+Myod1组、OGD+miR-NC组、OGD+miR-mimics组、OGD+miR-mimics+Vector组和OGD+miR-mimics+SNHG15组。采用CCK-8法检测各组细胞活性,采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)染色法检测各组EdU阳性细胞率,采用原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测各组TUNEL阳性细胞率,采用Western blotting法检测各组细胞中裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved caspase-9)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。染色质免疫共沉淀(CHIP)法评估Myod1和SNHG15之间的关联。双荧光素酶报告基因实验评估Myod1与SNHG15及SNHG15与miR-24-3p的靶向关系。结果:与正常对照组比较,缺血性脑梗死组患者外周血中Myod1和SNHG15 mRNA表达水平均升高(P<0.05)。与对照组比较,OGD组细胞中Myod1和SNHG15 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05)。与OGD组比较,48和72 h时OGD+Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率均降低(P<0.01),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.01);OGD+si-Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率均升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01)。Myod1可与SNHG15的启动子序列结合。SNHG15可吸附miR-24-3p,Myod1与SNHG15及SNHG15与miR-24-3p存在靶关系。敲低SNHG15后,与OGD组比较,48和72 h时OGD+si-SNHG15组细胞活性和EdU阳性细胞率均升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.01);与OGD+si-SNHG15组比较,48和72 h时OGD+si-SNHG15+Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.05),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-24-3p和SNHG15后,与OGD组比较,48和72 h时OGD+miR-mimics组细胞活性和EdU阳性细胞率升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.01);与OGD+miR-mimics组比较,48和72 h时OGD+miR-mimics+SNHG15组细胞活性和EdU阳性细胞率降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.05),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:Myod1可通过与SNHG15启动子区结合进而吸附miRNA-24,促进OGD诱导的SH-SY5Y细胞的增殖抑制和细胞凋亡。

小麦抗叶锈病基因Lr24的一个新STS标记

来源于长穗偃麦草的基因Lr24对小麦叶锈病具有很高的抗性,本研究旨在开发用于Lr24基因分子标记辅助育种的新的分子标记。从定位于小麦3D染色体的22对SSR、EST-SSR引物中筛选出4对揭示TcLr24多态性的引物,用468株F2抗感群体对这4对引物进一步检测,得到1个与Lr24共分离的EST-SSR标记Xcwem17。对该标记进行测序,并设计了STS引物。用该STS引物及已知的Lr24SCAR引物对试验群体进行验证,两对引物在该F2群体中均表现共分离,且Xcwem17可在TcLr24单基因系和已知含Lr24的农家品种泰山1号中可扩增出180bp单一条带,感病对照及其余7个近等基因系无扩增。该EST-SSR标记可直接用于分子标记辅助选择。

重庆市山羊博尔纳病病毒P24基因的检测

为了解重庆市山羊博尔纳病隐性带毒情况,分析博尔纳病病毒(BDV)的种系来源。采用巢式逆转录酶PCR结合荧光定量PCR(FQ-nRT-PCR)技术对重庆市60只山羊外周血单核细胞 (PBMCs)及脑组织中的BDV P24基因片段进行了检测,将阳性产物测序,并与国外BDV毒株进行了比较。结果,山羊外周血检测阳性率为8．3％(5／60),脑组织检测阳性率为10％(6／60)。该 BDV P24片段核苷酸序列与马源BDV H1766株同源性最高,达96．51％,与标准株Strain V和 He／80同源性为95．35％,并且编码的氨基酸序列也相同。表明,重庆市山羊中存在动物源性博尔纳病隐性带毒。该BDV P24核苷酸序列与Strain V和He／80株具有高度同源性。