ZNF24基因过表达慢病毒载体的构建及其在人结直肠癌HCT116细胞中的表达

目的通过构建ZNF24基因过表达慢病毒载体,建立ZNF24基因过表达的人结直肠癌HCT116细胞株,为开展后续研究提供物质基础。方法通过PCR扩增ZNF24基因序列片段和3FLAG标签序列片段,并将两产物通过同源重组克隆至慢病毒载体pMT406中,构建成重组表达ZNF24慢病毒质粒pMT-ZNF24。将重组质粒pMT-ZNF24与辅助包装载体质粒pCMV-dR8.9和pCMV-VSV-G一起共转染293T细胞并收集慢病毒。应用孔稀释法检测病毒滴度,用qRT-PCR和蛋白印迹法检测慢病毒转染HCT116细胞后ZNF24的表达水平。结果成功构建了重组载体pMT-ZNF24,并获得相应的病毒,病毒滴度为3.25×10^(9) TU/ml。转染重组ZNF24慢病毒的HCT116细胞中ZNF24表达水平显著高于空白组和阴性对照组细胞。结论构建了ZNF24基因过表达慢病毒载体,并获得相应的病毒和稳定表达ZNF24的HCT116细胞株。

转录因子ZNF24在肿瘤中的研究进展

转录因子ZNF24(也称ZNF191或KOX17)是类Krüppel锌指转录因子家族成员,N端有富含亮氨酸(Leu)的SCAN结构域(又称LeR结构域),C端有4个连续的典型的类Krüppel样锌指模体。ZNF24参与激酶转录活性调控、血管增生、发育等,尤其在肿瘤发生或发展中起着重要的作用,是多功能的转录因子。ZNF24通过调控不同靶基因(如VEGF、Wnt8B、Twist1、β-catenin和DGL1等)的转录表达以及竞争性结合蛋白因子(如β-catenin),在肿瘤的发生、发展、侵袭和转移中起着重要复杂的两面性作用(促进和抑制)。因此阐明ZNF24在肿瘤中的作用机理,将为肿瘤的治疗提供线索与思路。本文将对ZNF24在肿瘤中的研究进展作一综述。

GST-pulldown验证转录因子ZNF24与c-Myc的相互作用

目的:前期酵母双杂交实验中,我们以转录因子ZNF24的SCAN结构域为诱饵,筛选到的一个阳性克隆为原癌基因c-Myc,在此进一步验证ZNF24与c-Myc间的相互作用。方法:将ZNF24与c-Myc分别构建到p GEX-4T-2和pc DNA3.1表达载体上,利用GST-pulldown技术体外验证两者表达蛋白的相互作用。结果:电泳鉴定与测序分析表明目的基因克隆正确,载体构建成功;用GST-pulldown技术检测到ZNF24与c-Myc相互作用的蛋白条带。结论:GST-pulldown实验进一步表明ZNF24与c-Myc的相互作用,为验证ZNF24与c-Myc之间存在相互作用奠定了基础。

人源锌指蛋白ZNF24及其锌指结构域的表达、纯化及DNA结合性质的研究

转录因子是调控基因表达的关键蛋白,能够以序列特异性方式结合DNA。ZNF24是Krüppel-like锌指转录因子家族成员之一,在细胞增殖和分化中起重要作用,能促进肝癌细胞的增殖,抑制神经元细胞的分化。ZNF24蛋白N端包含一个SCAN结构域,C端为锌指区,由4个串联的C2H2型锌指结构组成。ZNF24能特异性识别和结合基因的启动子,参与基因的表达调控,但其发挥功能的具体分子机制并不清楚。本文我们在大肠杆菌中成功表达了人源锌指蛋白ZNF24全长和其锌指结构域ZNF24(243~368),ZNF24全长蛋白在溶液中以三聚体形式存在,而锌指结构域在溶液中为单体,表明ZNF24蛋白N端的SCAN结构域能够促进全长蛋白的寡聚化。凝胶迁移实验验证ZNF24全长蛋白和锌指结构域与双链DNA底物结合能力,为进一步研究锌指蛋白ZNF24调控基因表达提供理论基础,相关结果表明SCAN结构域介导的蛋白寡聚可能代表了一种新的转录活性调节机制。

食管鳞状细胞癌中ZNF24蛋白的表达及其预后价值

目的探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中锌指蛋白24(ZNF24)蛋白表达情况及其与临床病理因素的关系和预后预测价值。方法应用免疫组织化学(IHC)检测513例ESCC组织芯片(tissue microarray,TMA)中ZNF24蛋白的表达情况。使用χ^(2)检验和Kaplan-Meier分析进行临床病理特征和生存期的相关性评估。应用单因素和多因素Cox回归模型分析预后因素。结果共有513例ESCC患者被纳入分析,其中男性420例,女性93例,平均年龄为61.2岁(34~83岁),随访时间截至2018年12月。结果显示73.7%的ESCC患者ZNF24蛋白高表达,ZNF24与肿瘤大小(P<0.001)和肿瘤位置(P=0.038)有显著相关性。生存分析显示,ZNF24高表达患者的无病生存期(disease free survival,DFS)和总生存期(overall survival,OS)均有预后较差的趋势(DFS,P=0.524;OS,P=0.527)。尤其是当DFS大于28个月,ZNF24高表达患者生存期显著缩短(P=0.035)。同样,当OS大于35个月,ZNF24高表达患者生存期显著缩短(P=0.036)。但是,ZNF24蛋白高表达并不是ESCC的独立预后因子。结论ZNF24蛋白在ESCC中过表达,高表达患者DFS和OS预后均较差,尤其当DFS大于28个月和OS大于35个月时;ZNF24是ESCC预后不良的重要参考指标。