ZNF268基因在实体瘤中的差异拼接模式

为研究ZNF268基因在癌症发生过程中的作用,以17例正常人外周血为对照,收集并分析了5例实体瘤标本。通过提取总RNA反转录合成cDNA,使用PCR、巢式PCR和测序的方法调查ZNF268在样本中的表达模式。结果显示,ZNF268基因在实体瘤中的差异拼接模式明显不同于正常人外周血。剪切本ZNF268a在正常人外周血中表达概率为100%,而在实体瘤样本中为0。该结果提示剪切本ZNF268a消失与细胞癌变密切相关,是潜在的癌症诊断分子标记。

ZNF268基因启动子区的克隆及功能分析(英文)

锌指基因家族是人体中最大的基因家族 ,它参与细胞分化、胚胎发育 ,并与许多疾病的发生相关。人类ZNF2 68基因是一个在人胚肝中特异性表达的C2 H2 型锌指基因 ,并可能在人的早期肝脏发育中起重要作用。为了研究ZNF2 68基因表达调控的分子机制 ,以正常人总基因组为模板PCR扩增了ZNF2 68基因的 5′调控区 2 53 3bp片段 ,并将此片段插入启动子缺失的EGFP(增强型绿色荧光蛋白 )载体构建了重组质粒pZNF2 68 EGFP。用脂质体介导的方法将pZNF2 68 EGFP转染NIH 3T3、COS7、K562、HeLa 4个细胞系。在激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光的表达 ,发现在每个细胞系中 ,转染了重组质粒pZNF2 68 EGFP的细胞均有荧光表达 ,但其起始表达时间均晚于转染了阳性对照质粒pEGFP C1的细胞且荧光较弱。这表明ZNF2 68基因的 5′调控区 2 5kb片段是一个有功能的启动子 ,但该启动子与CMV启动子相比活性较弱。选择易培养的HeLa细胞系用于缺失研究。将一系列 5′端 -2 456bp至-2 0bp缺失、3′端均为 + 77bp的缺失片段插入启动子缺失的CAT(氯酶素酰胺转移酶 )载体构建了一系列重组质粒。将这些重组质粒转染HeLa细胞系进行缺失分析 ,并通过共转染pCMV Sport βgal质粒校正转染效率。结果表明 ,ZNF2 68启动子 -2 456～ -163