ZONAB在膀胱癌组织中的表达及其意义

目的:探讨膀胱癌组织中ZONAB的表达及意义。方法:收集2014年至2016年71位手术患者的膀胱癌以及对应的癌旁膀胱上皮标本,采用Realtime-PCR法、Western blot法、免疫组化法等检测ZONAB在膀胱癌组织与癌旁组织中的表达情况,并分析其与临床病理参数的关系,免疫组化法检测E-cadherin在膀胱癌组织中的表达并分析其与ZONAB表达的相关性。结果:Realtime-PCR法和Western blot法测得膀胱癌组织中ZONAB的表达水平高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫组化法测得膀胱癌组织中的ZONAB表达率高(38.0%)大于癌旁组织(11.3%),差异有统计学意义(P<0.05);肌层浸润性膀胱癌中ZONAB表达率较非肌层浸润性膀胱癌高(P<0.05);ZONAB与E-cadherin两种蛋白在膀胱癌中表达呈负相关(P<0.05)。结论:ZONAB在膀胱癌中高表达,ZONAB的表达在肌层浸润性膀胱癌中高于非肌层浸润性膀胱癌,ZONAB的异常表达可能参与了膀胱癌的发生、发展。

ZONAB和E-cadherin在膀胱癌细胞系中的表达及RNA干扰ZONAB表达对癌细胞侵袭力的影响

目的:探讨慢病毒介导ZONAB基因的RNA干扰对膀胱癌侵袭力的影响。方法:用Realtime PCR法分别检测人类尿路上皮永生细胞系sv-huc-1和膀胱尿路上皮癌细胞系UM-UC-3、T24、5637中ZONAB和E-cadherin的mRNA表达水平,用Western blot法分别检测各细胞系中ZONAB蛋白表达水平,设计、合成干扰靶点,构建纯化重组慢病毒,感染人膀胱癌UM-UC-3细胞,根据ZONAB基因的抑制率,筛选最有效的ZONAB基因RNAi靶序列组,验证ZONAB基因的沉默效果,用Transwell侵袭试验检测UM-UC-3细胞体外侵袭力的改变。结果:Realtime PCR法和Western blot法测得UM-UC-3、T24、5637中ZONAB的表达水平高于sv-huc-1,均具有显著性差异(P<0.05);而Realtime PCR法测得UM-UC-3、T24、5637中E-cadherin的mRNA表达水平低于sv-huc-1(P<0.05)。成功构建ZONAB基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应的慢病毒,与对照组相比RNA干扰组UM-UC-3细胞ZONAB基因mRNA水平的抑制率为71.4%(P<0.05),蛋白水平抑制率为76.8%,其穿过人工基底膜的平均细胞数为13.1±2.8/HP,明显少于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论:ZONAB在膀胱癌细胞系中表达上调,慢病毒介导ZONAB基因的RNA干扰能够抑制UM-UC-3细胞侵袭。

ZONAB表达量与膀胱癌恶性程度的相关性研究

目的探讨膀胱癌组织中ZO-1相关性核酸结合蛋白(ZONAB)的表达量与膀胱癌恶性程度的相关性。方法纳入2015年6月至2017年10月在我院泌尿外科接受手术治疗的原发性膀胱癌患者78例,术中留取膀胱癌组织、癌旁正常组织各78份分别作为膀胱癌组织组、癌旁组织组。采用实时荧光定量PCR法检测标本中目标基因表达量,对比两组中ZONAB基因及增殖、凋亡、侵袭基因信使RNA(mRNA)表达量的差异,Pearson检验分析膀胱癌组织中ZONAB m RNA表达量与上述增殖、凋亡、侵袭基因mRNA表达量的关系。结果膀胱癌组织组ZONAB mRNA的表达量高于癌旁组织组(P <0.05);增殖基因(KPNA2、YAP、HSG)、凋亡抑制基因(Bcl-2、Livin、Survivin)和侵袭基因(SNCG、TRPM 8、PARP-1)mRNA的表达量高于癌旁组织组,凋亡基因(Caspase-3、Caspase-7)mRNA的表达量低于癌旁组织组(P <0.05)。Pearson检验发现,膀胱癌组织中ZONAB mRNA表达量与增殖基因(KPNA2、YAP、HSG)、凋亡抑制基因(Bcl-2、Livin、Survivin)、侵袭基因(SNCG、TRPM 8、PARP-1)mRNA的表达量呈正相关,与凋亡基因(Caspase-3、Caspase-7)mRNA的表达量呈负相关(P <0.05)。结论膀胱组织中ZONAB表达量增高,其与癌细胞的增殖、凋亡、侵袭活性相关,可作为膀胱癌辅助诊断及恶性程度判断的可靠指标。

转录因子ZONAB研究进展

ZONAB是一种Y-box转录因子，具有促进上皮细胞增殖、抑制上皮细胞分化、调节紧密连接功能及促进上皮间质转化等生物学作用。ZONAB与紧密连接中的其他成分及多种调控细胞周期的基因、蛋白、酶、转录因子等相互作用，发挥其转录活性。同时ZONAB转录活性也受多种因素调节。ZONAB参与细胞增殖、分化、应激、器官发生、肿瘤形成过程，与多种疾病发生、发展密切相关。近年来，有关ZONAB的调控机制及临床意义的研究已逐渐成为国内外研究的热点。

ZO-1/ZONAB信号通路与细胞的增殖分化

闭合小带蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)相关性核酸结合蛋白(ZO-1-associated nucleic acid binding protein,ZONAB)是一种Y-box转录抑制因子。ZONAB结合于ZO-1的SH3(Src homology 3)结构域,并与多种调控细胞周期的基因、蛋白质、酶、转录因子等相互作用,共同构成ZO-1/ZONAB信号通路。研究证实,ZO-1/ZONAB信号通路参与多种细胞的增殖与分化、基因表达及器官发生等过程的调控,主要涉及肾小管、视网膜、角膜、肺泡上皮、神经胶质细胞及肿瘤等组织细胞。ZO-1/ZONAB信号通路调控细胞增殖分化的具体机制尚未完全阐明,但已在细胞再生、干细胞医学及肿瘤学等领域显示出潜在而巨大的研究价值。该文主要针对ZO-1/ZONAB信号通路与细胞增殖分化的最新研究进行综述。

缓激肽对体外培养兔角膜内皮细胞增殖状况及对闭锁小带蛋白-1与相关性核酸结合蛋白表达的影响

目的观察缓激肽(bradykinin,BK)对体外培养家兔角膜内皮细胞增殖及对紧密连接相关蛋白闭锁小带蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)、闭锁小带蛋白-1相关性核酸结合蛋白(zonula occludens-1-associated nucleic-acid-binding protein,ZONAB)表达的影响,初步探讨BK促进角膜内皮细胞增殖的作用机制。方法选择对数生长期的兔角膜内皮细胞,向培养基中分别加入0.01、0.10、1.00、10.00μmol·L-1BK(BK组),对照组不做加药处理,倒置相差显微镜下观察细胞的形态变化和增殖状况,MTT法检测各组细胞在24 h、48h、72 h、96 h的吸光度(A)值,Western blot检测72 h各组细胞中紧密连接处ZO-1与核内ZONAB蛋白的表达。结果加药72 h,各组细胞融合成片并紧密连成单层,加药96 h后各组细胞生长受限,细胞间隙变大,脱落细胞增多。与对照组相比,除0.01μmol·L-1BK组24 h外,其余浓度BK处理后A值升高、增殖活力增强,差异均有统计学意义(均为P<0.001),并呈现出一定的浓度依赖性,其中1μmol·L-1BK作用最强(P<0.001)。Western blot结果显示BK可促进紧密连接处ZO-1与核内ZONAB蛋白的表达,且呈一定的浓度依赖性。结论 BK体外刺激可促进兔角膜内皮细胞的增殖,具有浓度和时间的依赖性,其作用机制可能与ZO-1与ZONAB介导的信号通路有关。