鸡腺胃型传染性支气管炎病毒ZT株的分离与鉴定

1998年以来,枣庄市台儿庄区部分鸡群发生了一种以呼吸道症状,腺胃肿胀为主的疫病,通过鸡胚育传3～5代,电镜观察、动物回归和免疫保护试验、理化特性测定、毒价测定、中和试验,证明该病病原为冠状病毒。

枯草芽孢杆菌菌株ZT4-2电击转化体系的建立

【目的】建立枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株ZT4-2的高效电击转化体系。【方法】带有荧光蛋白标记的穿梭质粒pGFP78,通过电击转化法将其转入枯草芽孢杆菌菌株ZT4-2。【结果】菌株培养阶段、感受态细胞浓度、感受态细胞量、质粒体积量、转化电压等条件的不同,会对电击转化效率造成影响。其中试验条件:制备感受态细胞的菌株培养阶段的OD_(600 nm)值=1.0,重悬菌体时每100mL起始菌液加入600μL的40%PEG6000;电击转化体系中,感受态细胞量200μL,质粒体积10μL,转化电压2.5kV。最高转化效率可达6823.67CFU/μg。【结论】建立了枯草芽孢杆菌菌株ZT4-2的电击转化体系,电击转化效率较高。

汉坦病毒东方田鼠分离株ZT10的分子特性研究

目的测定从东方田鼠分离到的汉坦病毒ZT10株的全基因序列，了解该株分子基础。方法提取ZT10病毒总RNA，对L、M、S基因进行RT-PCR扩增，产物经琼脂糖电泳分析，回收纯化后，将其克隆至pGEM-T载体中，然后进行核苷酸序列的测定及分析。结果L基因组片段长度为6530个核苷酸，编码2151个氨基酸，与3株Seoul型汉坦病毒的L片段同源性为95.8％－99.7％，而与HTN型汉坦病毒的同源性则较低。将推导的ZT10株编码的氨基酸序列与其他汉坦病毒L片段氨基酸序列进行比较。显示ZT10编码的RNA聚合酶也有6个比较保守的区域。基因组M片段长度为3651个核苷酸，编码1133个氨基酸。结论序列分析表明，与Seoul型汉坦病毒的M片段同源性为84.0％－96.3％。而与HTN型汉坦病毒的同源性则较低，与从田鼠分离的汉坦病毒（Prospect Hill virus，Tulavirus，khabarovsk virus，Isla vista virus）M片段核苷酸同源性仅为57.5％－60.9％。S基因片段与SEO型病毒核苷酸和氨基酸同源性分别为87．9％－96．0％和96．9％－97．9％，与HTN型病毒株76－118的核苷酸和氨基酸同源性分别为71．3％和81．9％，与其他型汉坦病毒的同源均很低。表明ZT10属于SEO型汉坦病毒。

浙江东方田鼠分离汉坦病毒株S基因的克隆和序列分析

目的对国内首次从东方田鼠分离到的汉坦病毒(HV)ZT10 S基因克隆进行序列分析.方法参考GenBank发表的汉坦病毒核蛋白基因序列,设计合成一对引物,提取分离株ZT10细胞培养物的总RNA,对ZT10 S基因进行RT-PCR扩增,产物经琼脂糖电泳分析,呈现一条约1.7 kb的条带,回收纯化后,将其克隆至pGEM-T载体中,然后进行核苷酸序列的测定及分析.结果与4株SEO型病毒(SR-11、R22、Guo3、8610)核苷酸和氨基酸同源性分别为87.9%～96.0%和96.9%～97.9%,与HTN型病毒株76-118的核苷酸和氨基酸同源性分别为71.3%和81.9%,与其他型汉坦病毒的同源性均很低,表明此分离株ZT10为SEO型汉坦病毒.结论为进一步研究其进化和变异提供了有利条件,也为生产SEO型汉坦病毒特异性核蛋白抗原,免疫血清学诊断试剂的制备和分子生物学研究奠定了基础.