Use of Polymerase Chain Reaction for Identification of the Pathogen and Management of Potato Soft Rot with Zinc Application

Effect of different Zinc doses was investigated against Erwinia carotovora ssp. atroseptica, the potato blackleg/soft rot causing organism, during 2009 and 2010 in Department of Plant Pathology and Institute of Biotechnology and Genetic Engineering, The University of Agriculture, Peshawar-Pakistan. Out of 200 tested samples, 21 of them were proved to be Eca. However, these tentative Eca isolates showed some characteristics which were unexpected for Eca. We, therefore, decided to perform Polymerase Chain Reaction using Eca-specific primers, Eca1F and Eca2R for confirm identification. For disease management, at the time of sowing, pots containing 5 kg sterilized soil were applied with Zinc in four different treatments i.e. 8 mg, 10 mg, 12 mg and 14 mg along with one control. Results indicated that 12 mg (4.8 kg Zn ha-1) were better doses in controlling the disease up to 73% and increasing the yield up to 117% as compared to control plants.

云南省马蹄莲细菌性软腐病原鉴定

2005年在云南省花卉公司种植的马蹄莲上发现有软腐症状,马蹄莲最初在受害部位出现水浸状坏死,病部很快扩大,病组织开始软化、变色,病斑边缘初有明显界限,随着病势的发展界限逐渐模糊不清,然后软腐.从病株上分离得到20株菌,菌株接种于马蹄莲上,发病症状与田间自然症状一致,并从回接病株上重新分离得到此病原细菌.经16S-23S rDNA转录间隔区PCR(ITS-PCR)分析、测序及BIOLOG生理生化测定,确定该病原菌为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(Pectobacterium carotovorasubsp.carotovora,p.c.c.)和菊果胶杆菌(Pectobacterium chrysanthemi,p.ch.)两种,而主要是Pectobacterium carotovorasubsp.carotovora,p.c.c..

马蹄莲细菌性软腐病菌的鉴定

从美国进口马蹄莲种球种植后发生较多的软腐病 ,从病叶上分离到一种引起软腐症状的病原细菌。该病原菌为革兰氏阴性杆菌 ,兼性厌气 ,鞭毛周生 2～ 6根 ,接触酶阳性 ,氧化酶阴性 ,能引起马铃薯和大白菜软腐。经致病性、形态特征、培养特征、生理生化和Biolog测试 ,鉴定为Erwiniacarotovorasubsp .carotovora。

西葫芦软腐病病原的初步研究

2004～2006年,在山东省的临淄、聊城、寿光、临沂等12个县市保护地栽培的西葫芦中发现一种严重危害茎基部的细菌性病害。从22批次55株西葫芦病株标本中,经分离纯化获得135个菌株,从中选出部分菌株按柯赫法则对其进行致病性测定,均产生与田间相同症状。对病原菌形态、染色反应、培养性状和生理生化等几项试验结果表明,病原菌为胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜软腐亚种Erwinia carotovora subsp.carotovora。

彩色马蹄莲欧文氏菌PCR检测

采用聚合酶链式反应(PCR)技术检测彩色马蹄莲欧文氏菌纯培养和彩色马蹄莲样品,并用分离培养技术加以验证。结果表明,PCR能特异地检测出所有10个彩色马蹄莲欧文氏菌菌株,并证实了昆明地区侵染彩色马蹄莲的细菌为胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwiniacarotovorasubsp.carotovora)。PCR与分离培养技术检测结果基本一致,但总体上PCR检测阳性率稍高于分离培养检测的发病率。接种马铃薯、大白菜24h后接种点处均出现明显软腐症状。该项技术具有更高的灵敏度,适用于彩色马蹄莲种苗的检测和病害流行学研究。

魔芋软腐病病原细菌的初步鉴定

近年来随着魔芋栽培面积的迅速扩大,病害问题日趋严重,其中软腐病是魔芋最主要的病害之一,常导致受害植株的叶片和块茎变软、腐烂,严重时成片倒伏。为了查清我国南方地区引起魔芋软腐病的病原细菌种类,我们对该菌的形态、染色反应、培养性状、生理生化反应和致病性等方面进行了初步的研究。一。材料和方法魔芋植株是1986年从湖北省崇阳县移栽至我校,10株菌株均先后从腐烂的魔芋茎上按常规方法分离而得。供试菌株均保存于灭菌的蒸馏水中,使用前进行纯化。然后移至NA培养基上进行一系列的测定。

风信子软腐病病原的鉴定和杀菌剂试验

在上海生长的风信子发生软腐病的球茎中分离了菌株EP,对纯化的菌株EP进行传统方法鉴定;并进行16SrDNA序列同源性分析,结果表明EP与Erwinia carotovorasubsp.carotovora同源性达到97%,确定风信子软腐病病原为Erwinia carotovora subsp.carotovora。风信子软腐病病菌在不同杀菌剂浓度下的生长试验表明,杀毒矾抑菌效果最好,有效浓度0.64×10-6g/mL时细菌停止生长,其次为吗啉胍乙铜和农用链霉素可溶性粉剂,有效浓度分别为2×10-4g/mL和5.76×10-4g/mL时,细菌停止生长。

甜瓜细菌性软腐病病原鉴定

近年来,浙江义乌等地的甜瓜(CucumismeloL.)果实上普遍发生一种外观褐色小斑,果肉水渍状腐烂现象,局部田块发病率高,损失严重。为确定病原,从病果上分离到4个细菌菌株,分别定名为M1、M2、M3和M4。烟草过敏性反应和致病性测定表明M2和M4不具致病性,而M1和M3在烟草上能引起典型的过敏性坏死反应,接种甜瓜24h内即导致果实的明显腐烂,所引起的腐烂症状与田间发病果实一致。对M1和M3进行培养性状、革兰氏染色、形态学和鞭毛观察、马铃薯薯块腐烂试验,以及16SrRNA基因测序和比较,结果证明该病害是由软腐欧氏杆菌软腐亚种Erwiniacarotovorasubsp.carotovora引起。

门冬酰胺酶效价和纯度测定方法研究

目的:建立和优化鉴别、纯度和效价测定等质量控制方法,提高和完善大肠埃希菌(Escherichia coli)、欧文氏菌(Erwinia carotovora)来源的门冬酰胺酶的质量标准。方法:考察了Xbridge protein BEH SEC(300 mm×7.8 mm,3.5μm,200A)和TSK G3000swxl(300 mm×7.8 mm,5μm)2款色谱柱在纯度测定方法中的分离情况,并对流动相进行了优化;考察了效价测定方法中反应的量效关系和线性范围,探讨了斜率比模型和标准曲线法的效价计算方式。结果:以0.1 mol·L^(-1)磷酸盐缓冲液(pH 6.7)为流动相,采用Xbridge protein BEH SEC色谱柱进行分离,主峰前后各杂质峰分离度有了较大改善。2种菌种来源的门冬酰胺酶效价反应剂量在2~30 U·mL^(-1)范围内均呈直线反应,r均大于0.995,标准曲线测定方法更为简单、准确,样品采用高低双剂量可以有效消除实验误差,双剂量测定偏差可小于±2.0%。结论:与绝对法相比,相对法在效价测定的准确度和重现性方面都有较大提高;优化后的纯度测定方法提高了杂质峰的分离度,可以更好地避免因积分方式带来的结果误差。