铁冬青-单面针浸膏中紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱含量测定

开展了HPLC法测定铁冬青-单面针及其浸膏中紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱含量的方法学研究。确定了铁冬青的最优测定条件(流动相为乙腈-水;检测波长210 nm;流速1.0 mL/min;柱温30℃;进样量10μL)、单面针的最优测定条件(流动相为甲醇-0.1%甲酸水;检测波长272 nm;流速1.0 mL/min;柱温30℃;进样量10μL)、铁冬青-单面针浸膏的最优测定条件(流动相为乙腈-0.4%磷酸水;长梗冬青苷、白鲜碱检测波长为210 nm;紫丁香苷、氯化两面针碱检测波长为272 nm;流速1.0 mL/min;柱温30℃;进样量5μL)。在上述条件下,开展了HPLC测定法的线性范围、精密度、稳定性、重复性、回收率等实验,结果表明HPLC法可以较好地用于测定铁冬青-单面针及浸膏中紫丁香苷、长梗冬青苷、氯化两面针碱、白鲜碱的含量。

蚬壳花椒组培苗的增殖研究

为了筛选蚬壳花椒组培苗增殖的最优培养方案,对影响组培苗增殖的因素进行了单因素试验.结果显示,以MS为基本培养基,添加0.5～1.0mg/L6-BA,0.05～0.1mg/LNAA和使用添加物D对增殖影响显著,但不同浓度差异不显著.对各单因素进行L9(34)正交试验,结果表明,MS+0.5mg/L6-BA+0.05mg/LNAA+添加物D1.0mg/L为蚬壳花椒增殖的最适培养基,增殖系数可达到4.

蚬壳花椒愈伤组织诱导的影响因素

以蚬壳花椒组培苗的叶片和茎段为外植体,研究不同的基本培养基、不同种类和浓度的激素及不同的培养条件对蚬壳花椒愈伤组织诱导及其生长的影响.结果表明,MS为最适培养基;单独使用6-BA不能诱导出愈伤组织,但配合生长素使用有利于愈伤组织的形成.诱导蚬壳花椒愈伤组织的较优激素组合为6-BA0.5mg/L+NAA1.5mg/L+2,4-D0.1mg/L,诱导率达65.72%.在蚬壳花椒愈伤组织诱导过程中,2,4-D是最重要的因素.在培养过程中,以暗培养14d为最适暗处理时间.

药用植物蚬壳花椒的离体培养及再生体系的建立

为了研究蚬壳花椒的离体培养并建立再生体系,用蚬壳花椒的二年生植株的幼茎作为起始外殖体,接种在含不同激素的MS培养基上,结果为最佳腋芽诱导培养基为:MS+2.0 mg.L-16-BA+0.05 mg.L-1NAA,诱导率达64.0%;最佳丛生芽诱导培养基为:MS+2.0 mg.L-1ZT+0.2 mg.L-1NAA,诱导率达90.0%;最佳增殖培养基为:MS+6-BA0.5 mg.L-1+NAA0.05mg.L-1+生物素1.0 mg.L-1,增殖系数可达到4.0;最适生根培养基为:1/3MS+IBA0.3mg.L-1+NAA 0.05 mg.L-1,生根率达78%.

单面针茎中生物碱类成分研究

目的：对单面针茎中的生物碱成分进行研究。方法：将0.5%盐酸渗滤得到酸水用氨水调pH值至11,以此提取单面针茎中总生物碱,采用氧化铝、硅胶柱层析法进行分离,并根据理化性质及光谱数据对单体化合物进行结构鉴定。结果：分离得到4个化合物,经鉴定分别为：两面针碱（Ⅰ）、血根碱（Ⅱ）、花椒棚碱（Ⅲ）、白鲜碱（Ⅳ）。结论：其中,化合物Ⅰ~Ⅲ为首次从单面针茎中分离得到。

天然蚬壳花椒种群遗传多样性的ISSR标记分析

目的：对采自中国西南4省共12个天然蚬壳花椒种群进行遗传多样性分析。方法：采用ISSR分子标记技术,从100条引物中筛选出8条条带扩增稳定、清晰可见和多态性条带明显的引物用于后续实验。结果：8条引物共扩增出150个条带,147个多态性条带,多态性条带百分率（PPB）为98.0%,各种群的PPB值为26.0%~62.0%。种内Shannon指数（Hsp）为0.4175,种群内Shannon指数（Hpop）为0.1328~0.3267。分子方差分析（AMOVA）显示,种群间与种群内的变异数分别是总遗传变异数的47.98%和52.02%。结论：天然蚬壳花椒在物种和种群水平上均具有较高的遗传多样性,天然蚬壳花椒种群间（内）存在着高度的遗传分化。本研究为蚬壳花椒的遗传多样性分析奠定了理论基础。

药用植物蚬壳花椒种子休眠及萌发特性

为研究木本药用植物蚬壳花椒生殖环节中的致危因素,采用多种方法处理其种子,研究其休眠和萌发特性.结果表明,当年成熟的种子去除种皮后可以萌发,证明种子的胚发育成熟,种皮的透水性也较好,与休眠关系不大;休眠的主要原因可能是种皮内含有抑制萌发物质,及种皮坚硬的机械阻碍作用.采用不同的处理,获得种子萌芽率较高的方法为:浓硫酸处理6min,去除种皮,然后用50mg·L-1的GA3浸泡5min,清洗后置于25℃恒温培养箱内培养,萌芽率可达60%.

单面针茎不同极性部位抗菌及对MCF-7细胞抑制活性的研究

研究单面针茎不同极性部位的抗菌及抗肿瘤活性。本实验通过微孔比浊法比较了单面针茎各极性部位对3种革兰氏阴性菌:大肠杆菌、铜绿假单胞菌、幽门螺杆菌,4种革兰氏阳性菌:表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌共7种细菌进行抗菌能力评价;以MTT法测定了各极性部位对乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制活性。实验结果表明,单面针茎各极性部位对本实验所有菌株,尤其是革兰氏阳性菌均有较强的抑制作用,其中以氯仿部分的抗菌效果最佳;本实验所有样品对MCF-7细胞均有较好的抑制作用,同样氯仿浸膏的抑制活性最强,对实验细胞株的半数抑制浓度IC50为2.35±0.97×10-1mg/m L,正丁醇浸膏部分的IC50值分别为3.19±0.54×10-1mg/m L,然而乙酸乙酯浸膏部分则相对最弱,其IC50值为6.47±0.94×10-1mg/m L。本实验结果揭示有望从氯仿、正丁醇浸膏中分离得到抗菌、抗乳腺癌活性较强的单体化合物,为单面针的后续开发提供了科学的依据。

HPLC-Q-TOF/MS法鉴定两面针和单面针中的生物碱

目的通过HPLC-Q-TOF/MS法鉴定两面针Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.和单面针Zanthoxylum dissitum Hemsl.中的生物碱。方法植物甲醇提取液的分析采用XAqua C8色谱柱(2.1 mm×150 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.3 m L/min,再根据对照品裂解规律和参考文献推测生物碱结构。结果从中鉴定出32种生物碱,其中14种为首次在2种植物中报道。结论该方法快速准确,可为两面针和单面针成分研究及单面针开发利用提供依据。

蚬壳花椒营养器官解剖结构及其生物碱分布

采用石蜡切片和组织化学定位法对蚬壳花椒营养器官的解剖结构及生物碱的分布进行研究.结果表明,蚬壳花椒根的初生木质部有三原型和四原型;幼茎表面有表皮毛和腺体,茎内含少量分泌囊和结晶;叶上、下表皮细胞结构差异显著,上表皮细胞较大,有一分泌囊紧接下表皮.生物碱组织化学定位显示,茎中生物碱主要存在于周皮、次生木质部的射线细胞及髓部细胞内;根中生物碱大量存在于周皮、次生韧皮部及次生木质部的射线细胞中;叶片中不含生物碱.采用HPLC法测定根、茎、叶及生药中的主要有效生物碱的含量,根中主要有效生物碱含量比茎中含量高.

高效液相色谱法测定单面针中木兰花碱的含量

【目的】建立单面针药材中木兰花碱的含量测定方法,为该药材质量评价方法的建立提供基础。【方法】采用高效液相色谱法,色谱柱为Kromasil C18（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相为乙腈-0.1 mol/L磷酸二氢钠（体积比为11∶89）;检测波长268 nm;柱温25℃。【结果】木兰花碱在20～300μg/mL范围内线性关系良好,r为0.999 9;理论塔板数不低于25 000;样品中木兰花碱检测无干扰,与邻峰分离度大于1.5,样品含量在0.74～6.61 mg/g之间,平均含量为2.99 mg/g,加样回收率为97%以上,sR为0.81%。【结论】所建方法简单可行,重复性好,可用于单面针药材的质量控制。

药用植物单面针离体胚培养的研究

为了满足市场对单面针Zanthoxylum dissitum Hemsl资源的需求,解决单面针自然繁殖率低的问题,采用L9(34)正交设计,以单面针种子胚为外植体进行胚培养.结果表明:6-BA、NAA、消毒时间3因素的最佳水平组合为MS+6-BA 1 mg/L+NAA 0.4mg/L+消毒时间8 min,发芽率可达86.7%.

蚬壳花椒果皮多糖抗肿瘤活性研究

目的:研究蚬壳花椒果皮多糖的体内外抗肿瘤活性。方法:采用水提醇沉法制备蚬壳花椒果皮多糖,以MTT法和移植性H22实体荷瘤小鼠为模型,检测不同剂量蚬壳花椒果皮多糖的体内外抗肿瘤作用。结果:当质量浓度为62.5～1 000μg/mL时,其对体外培养的2株人肿瘤细胞Hela和SMMC-7721的增殖表现出显著的抑制作用,IC50依次为460.9μg/mL、425.6μg/mL。体内实验表明,蚬壳花椒果皮多糖高(1.5g/kg)、中(0.75g/kg)、低(0.375g/kg)剂量组均能抑制荷瘤小鼠瘤块的生长,抑瘤率依次为41.55%、34.96%、33.71%;通过肿瘤组织病理学切片观察,同样显示蚬壳花椒果皮多糖具有较好的抗肿瘤作用。比较给药后荷瘤小鼠的肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数后发现,蚬壳花椒果皮多糖毒副作用小,增强免疫功能。结论:蚬壳花椒果皮多糖在体内外均有明显的抗肿瘤活性。

药用植物蚬壳花椒的生境及生物学特性调查

于2005年5月和12月首次在湖南省张家界设置标准样地及随机取样,对芸香科药用植物蚬壳花椒的生境及生物学特性进行调查得出:蚬壳花椒主要分布在海拔500～1000 m的高度,零星生长于常绿阔叶林中;喜阳,但忌强光直射;喜湿,常生长在沟溪边;木质藤本,茎有褐色皮刺,奇数羽状复叶互生,叶片背面中肋上生小而下曲的锐刺;聚伞状圆锥花序腋生,花单性,淡紫色,萼片4片,花瓣4片,4心皮,分离,蓇葖果稍扁球形,内含1粒种子;花于12月至次年2月开放,果实于次年12月成熟,在同一植株上可出现花果同枝的现象,结实有明显大小年现象;检测出蚬壳花椒原始生境土壤pH值的平均值为6．78,有机质含量平均值为9．02％,冬季平均绝对含水量为26．89％。

蚬壳花椒资源繁育与有效成分研究进展

总结了蚬壳花椒的一般特性及生长发育特征、地理分布差异、组织培养、扦插嫁接、有性繁育、遗传多样性分析、药用成分的种类、有效成分的分离纯化方法、有效成分的鉴定方法等方面的研究,提出了蚬壳花椒渐危的主要原因及其具体解决措施。认为蚬壳花椒种子资源库的建立,有性人工繁育,GAP规范化栽培研究,主要药用成分的药理、药剂、药代动力学考察,新的药用成分的分离、纯化、鉴定,药用成分的合成途径及其基因组学研究等将成为未来研究的方向与重点。

蚬壳花椒受威胁程度评价及其可持续利用对策

为了可持续开发和利用野生药用植物资源,依据量化评价标准,从药用价值、分类意义、分布与生境要求、野生资源量、野生资源减少速率、栽培状况、保护现状和综合利用现状等8个方面对芸香科花椒属药用植物蚬壳花椒的受威胁程度进行了综合评价,评价结果为:蚬壳花椒受威胁程度的总评分达9分,属于渐危种类。并就如何保护和可持续利用蚬壳花椒野生资源问题提出了三个方面的保护对策。

蚬壳花椒种子萌发特性研究

目的:建立解除蚬壳花椒种子休眠和萌发的有效方法,提高蚬壳花椒种子萌发率。方法:以恒温4℃、恒温25℃、变温(先4℃层积35 d,后25℃层积35 d)湿沙层积70 d处理蚬壳花椒种子,每隔7 d进行1次取样,测定种子内营养物质含量和酶活性,分析各处理解休眠效果,探索最佳层积温度。以层积处理后的种子用不同发芽基质(湿沙、草炭、珍珠岩、土壤)进行拌种处理,探索最适宜发芽基质。结果:变温层积可以有效解除蚬壳花椒种子休眠;草炭拌种可以大幅提高种子萌发率到68%。结论:变温层积可以加速蚬壳花椒种子内营养物质的水解,提高种子内酶活性,促进种子内生理代谢反应。

蚬壳花椒中生物碱成分的研究

目的研究蚬壳花椒Zanthoxylum dissitum Hemsl.中的生物碱类成分。方法蚬壳花椒的甲醇提取物的石油醚及乙酸乙酯萃取部位采用硅胶柱层析等方法进行分离纯化,利用核磁共振、质谱等方法对分离得到的单体成分进行结构鉴定。结果分离并鉴定了6个生物碱,分别为大叶桉亭(1)、白藓碱(2)、γ-花椒碱(3)、茵芋碱(4)、橙黄胡椒酰胺(5)、(△7,8-E)N-p-香豆酰酪胺(6)。结论化合物(1)为首次从该植物中分离得到,化合物(6)首次从该属植物中得到。

单面针根和叶的代谢组比较研究

中药材单面针其根、茎、叶均可入药,但其根茎部与叶片之间存在较大的成分差异。为研究单面针根、茎、叶不同成分相关的代谢物的合成路径,本文采用用气相色谱-质谱法研究根与叶的代谢组差异。根与叶的代谢组数据分析表明叶中的谷胱甘肽合成代谢以及三羧酸循环代谢的活跃度高于根;根与叶中生物碱类和类黄酮物质的合成各有偏重,但从已鉴定的代谢物的种类及其功能看,具有抗菌、消炎的成分多存在于根中;相对于根而言,叶中富含儿茶素、柚皮素等有清除自由基、抗氧化功能的活性成分。从而得出根茎部有效成分含量高于叶,但可以从清除自由基、抗氧化功能角度开发叶的利用价值。

液质联用鉴定单面针中的化学成分

目的:利用LC-MS分析技术快速鉴定单面针中的生物碱结构。方法:采用XAqua C_8色谱柱(150 mm×2.1 mm,5μm);以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱;体积流量:0.3 mL·min^(-1);ESI源正离子模式检测;根据对照品的裂解规律和参考文献推测生物碱的结构。结果:从单面针的甲醇提取物中鉴定了20个化合物结构。结论:LC-MS方法能快速、准确地鉴定单面针中的化学成分,为单面针活性成分的开发利用提供科学依据。