锌指蛋白Zbed3的表达与分离纯化

将编码小鼠锌指蛋白Zbed3的基因克隆到大肠杆菌表达载体pET28c,构建了含组氨酸标签的表达质粒pET28c-Zbed3,并将其转入大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP;在20℃条件下,采用100μmol/L的异丙基硫代--βD半乳糖苷(IPTG)诱导、培养20 h而获得含Zbed3的菌体;菌体裂解液经超滤浓缩后采用镍(螯合)柱分离纯化得到锌指蛋白Zbed3(浓度达60 mg/L);同时,采用30%醋酸溶解包涵体,用0.5 mol/L的Tris-HCl(pH=8.8)缓冲液中和而使Zbed3在生理pH环境中复性.结果表明,Zbed3复性后在离心上清液中的回收率达到80%,其复性蛋白质与表达产物为可溶性(天然态)Zbed3的圆二色性光谱特征相一致,以此验证了复性后Zbed3空间构象的正确性.

高良姜素通过巨噬细胞极化及抑制锌指蛋白Zbed3诱导大鼠肝癌细胞凋亡的研究

目的 探讨高良姜素诱导巨噬细胞极化对肝癌大鼠瘤体体积及锌指蛋白Zbed3的影响。方法 健康6~8周龄SD雄性大鼠74只,体质量250~300 g,常规饲养,自由饮食饮水。随机分为对照组(健康大鼠常规饲养,n=14)、模型组(模型大鼠常规饲养,n=13)、高良姜素低剂量组(模型+25 mg/kg/d高良姜素,n=13)、高良姜素中剂量组(模型+50 mg/kg/d高良姜素,n=13)及高良姜素高剂量组(模型+100 mg/kg/d高良姜素,n=13)。HE染色检测肝组织病理形态,TUNEL检测肝癌细胞凋亡,游标卡尺测定肿瘤体积,免疫组化检测CD11c、CD206表达,Wbstern Blot检测Zbed3、GSK3β、Axin、β-catenin、c-myc、cyclin-D1水平。结果 对照组大鼠肝小叶结构清晰,肝细胞排列有序,形态正常;模型组大鼠瘤组织呈膨胀性生长,癌细胞大小不一,肝细胞索挤压,排列不齐,并可见纤维素样结构;高良姜素低、中、高剂量组大鼠均出现肿瘤细胞间隙增宽,肿瘤细胞出现不同程度的肿胀变性,呈现泡沫状改变,肿瘤细胞巢可见大量炎细胞浸润,各组均可见不同程度的肿瘤细胞坏死灶。与对照组相比,模型组大鼠CD11c、GSK3β、Axin降低,CD206、Zbed3、β-catenin、c-ymc、cyclin-D1升高(P<0.05)。与模型组相比,高良姜素低剂量组肝癌细胞凋亡率、CD11c、GSK3β、Axin升高,瘤体体积、CD206、Zbed3、β-catenin、c-ymc、cyclin-D1降低(P<0.05)。与高良姜素低剂量组相比,高良姜素中剂量组大鼠肝癌细胞凋亡率、CD11c、GSK3β、Axin升高,瘤体体积、CD206、Zbed3、β-catenin、c-ymc、cyclin-D1降低(P<0.05)。与高良姜素中剂量组相比,高良姜素高剂量组大鼠肝癌细胞凋亡率、CD11c、GSK3β、Axin升高,瘤体体积、CD206、Zbed3、β-catenin、c-ymc、cyclin-D1降低(P<0.05)。结论 高良姜素通过调控Wnt/β-catenin通路,促进巨噬细胞向M1型转化并抑制其向M2型转化,降低了Zbed3水平从而促进癌细胞凋亡并减小瘤体体积。

不同糖耐量人群血清BED锌指蛋白3表达水平及其与代谢相关指标的关系

目的:探讨不同糖耐量人群血清BED锌指蛋白3(ZBED3)表达水平及其与代谢相关指标的关系。方法:选取2012年1月到2014年3月在我院就医的115例2型糖尿病(T2DM)患者、97例糖耐量异常(IGT)患者及糖耐量正常(NGT的109名健康体检或志愿者,测定其血清中ZBED3的水平,并分析其与相关的代谢指标的关系。结果:女性群体血清ZBED3水平显著高于男性群体(121.3±33.5 pg/m Lvs 113.9±32.9 pg/m L,P=0.02);超重组血清ZBED3水平显著高于非超重组(132.5±31.4 pg/m L vs 111.4±30.2pg/m L,P=0.00);T2DM组血清ZBED3水平显著高于IGT组和NGT组(143.5±31.2 pg/m L vs 123.7±26.4 pg/m L,97.1±20.3pg/m L,P=0.00)。血清ZBED3水平与体重指数、腰围/臀围比值、体脂百分比、舒张压、收缩压、甘油三酯、空腹胰岛素、空腹血糖及Homa-胰岛素抵抗指数呈正相关(P<0.01),与高密度脂蛋白胆固醇成明显负相关(P<0.01);且腰围/臀围比值、体脂百分比、舒张压、甘油三酯、糖化血红蛋白及Homa-胰岛素抵抗指数是影响血清ZBED3水平的独立相关因素。结论:T2DM、IGT患者及超重群体血清ZBED3水平明显上升,且与肥胖和T2DM的发生发展密切相关。