小鼠ZBTB9基因的克隆、亚细胞定位及原核表达

应用RT-PCR扩增技术从小鼠肺组织中成功克隆锌指蛋白ZBTB9基因;该基因含有1 380bp的开放阅读框(ORF),编码459个氨基酸。为研究其生物学功能,构建pEGFP-C1/ZBTB9融合载体转染细胞,亚细胞定位显示ZBTB9定位于细胞核且呈斑点状分布。构建原核表达载体pGEX-4T-1/ZBTB9,转入大肠杆菌BL21(DE3Lysis)中,IPTG诱导融合蛋白表达。重组蛋白经SDS-PAGE鉴定后进行纯化。结果表明:成功地纯化了ZBTB9的融合蛋白。ZBTB9基因的成功克隆及表达,为进一步深入研究ZBTB9的生物学功能奠定基础。

小鼠胚胎干细胞核心转录因子nanog靶基因Zbtb9的生物信息学分析

通过特异性引物用RT-PCR方法扩增Zbtb9基因。利用生物信息学对小鼠的Zbtb9基因启动子进行生物信息学分析,预测Zbtb9基因启动子位置和启动子区内含有的转录因子结合位点,以及nanog在Zbtb9基因转录调控中的作用及Zbtb9蛋白的基本性质。Zbtb9基因启动子区可能定位于转录起始点上游790 bp至1024 bp之间。启动子区内含有15个转录调控因子结合位点,nanog的作用靶序列位于Zbtb9基因启动子区与转录起始位点之间,提示nanog在Zbtb9基因转录调控中起作用,小鼠Zbtb9蛋白二级结构可能以螺旋为主,富含疏水性氨基酸;对Zbtb9基因疏水区的氨基酸进行跨膜区分析,提示可能是跨膜蛋白。经SMART分析,Zbtb9蛋白含有BTB/POZ结构域。