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Fluorescence polarization immunoassay for salinomycin based on monoclonal antibodies 被引量:4
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作者 Wang, Zhan Hui Cheng, Lin Li +2 位作者 Shi, Wei Min Zhang, Su Xia Shen, Jian Zhong 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 2010年第3期552-554,共3页
A fluorescence polarization immunoassay(FPIA) for the determination of salinomycin(SAL) was developed by using anti-SAL monoclonal antibodies(mAb).Fluorescein labeled SAL(tracer) was synthesized by the N-hydroxysuccin... A fluorescence polarization immunoassay(FPIA) for the determination of salinomycin(SAL) was developed by using anti-SAL monoclonal antibodies(mAb).Fluorescein labeled SAL(tracer) was synthesized by the N-hydroxysuccinimide active ester method and purified using thin layer chromatography(TLC).The developed FPIA for SAL had a dynamic range from 0.60 to 2193 ng/mL with an IC50 value of 33.2 ng/mL and a detection limit(LOD) of 0.08 ng/mL.No significant cross-reactivities were observed with other drugs but 67.6% with narasin. 展开更多
关键词 SALINOMYCIN TRACER fluorescence polarization immunoassay monoclonal ANTIBODY
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人C-反应蛋白磁微粒化学发光酶免疫测定法的建立
2
作者 罗梦洁 肖铎 +5 位作者 曾璇 谭楚帆 徐叶 钟志宏 刘如石 郑姣 《生命科学研究》 CAS 2024年第2期135-142,151,共9页
人C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是炎症以及各种相关疾病如病毒感染、心血管疾病等诊断、治疗和预后的临床检测指标。为了建立一种快速、准确的CRP定量免疫测定方法,将表达纯化的重组CRP作为抗原免疫小鼠,获得了5株稳定分泌抗体... 人C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是炎症以及各种相关疾病如病毒感染、心血管疾病等诊断、治疗和预后的临床检测指标。为了建立一种快速、准确的CRP定量免疫测定方法,将表达纯化的重组CRP作为抗原免疫小鼠,获得了5株稳定分泌抗体的单克隆抗体细胞株,采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)初步鉴定筛选的抗人CRP单克隆抗体,并分别选择mAb 9D6和mAb 9G4作为捕获抗体与检测抗体,建立用于人CRP检测的化学发光酶免疫测定法(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA),最后通过测定分析临床血清CRP样本,评价CLEIA的性能。结果显示,基于9D6/9G4-AP单克隆抗体对的CLEIA测定范围为0.1767~500μg/L(可扩展至100 mg/L);所建立的CLEIA与医院采用的免疫散射比浊法(R^(2):0.9496,P<0.0001)表现出良好的相关性,且Bland-Altman分析中96.36%(106/110)的点在95%一致性界限范围内显示两种检测方法具有较好的一致性。结果初步表明,建立的分析方法在临床诊断中具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 C-反应蛋白(CRP) 单克隆抗体(mAb) 双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(DAS-ELISA) 化学发光酶免疫测定法(CLEIA)
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基于定向固定化抗体的侧向流免疫检测试纸建立食用油中玉米赤霉烯酮的检测方法
3
作者 王庆信 毛心怡 时国庆 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第10期56-63,共8页
目的基于定向固定化抗体的侧向流免疫检测试纸建立食用油中玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)的检测方法,并考察市售食用油中ZEN污染状况。方法通过链球菌蛋白G将ZEN抗体定向固定化在铕荧光微球上制备了免疫探针,构建侧向流免疫检测(latera... 目的基于定向固定化抗体的侧向流免疫检测试纸建立食用油中玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)的检测方法,并考察市售食用油中ZEN污染状况。方法通过链球菌蛋白G将ZEN抗体定向固定化在铕荧光微球上制备了免疫探针,构建侧向流免疫检测(lateral flow immunoassay,LFIA)试纸,并建立了食用油中ZEN含量的快速检测方法,并对65个市售食用油样品中的ZEN含量进行了检测。结果采用抗体定向固定化方式制备免疫探针可以使检测曲线线性范围收窄,提高试纸的检测精密度。建立的食用油中ZEN快速检测方法前处理步骤只需1步,检测用时仅15 min。方法的检出限为3.93μg/kg,线性范围为22.40~800.00μg/kg。市售食用油样品中ZEN的检出率为58.5%,其中,玉米油中的ZEN检出率为100%,且ZEN含量最高。结论本研究成功制备了可以快速、准确检测食用油中ZEN含量的侧向流免疫层析试纸,并且所探究的抗体定向固定化技术对于提高其他小分子污染物免疫检测技术的分析性能具有参考价值。 展开更多
关键词 定向固定化抗体 侧向流免疫层析 玉米赤霉烯酮 食用油 快速检测
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Production and Characterization of Anti-estrone Monoclonal Antibody 被引量:6
4
作者 WangYC GuoZQ 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2002年第2期103-112,共10页
Objective Determination of estrone (E1) levels has a significant meaning in evaluating physiological effect and diagnosing some diseases. In order to detect free E1 in biological fluids, a monoclonal antibody specifi... Objective Determination of estrone (E1) levels has a significant meaning in evaluating physiological effect and diagnosing some diseases. In order to detect free E1 in biological fluids, a monoclonal antibody specific for E1 was prepared after the complete antigen of E1 was synthesized. The purified monoclonal antibody was fully characterized for later immunoassay. Methods 3-O-carboxymethyl ether derivative of E1 was synthesized and in turn coupled to bovine serum albumin (BSA) to form complete antigen E1-BSA. A monoclonal antibody (McAb) specific for E1 was produced both in vitro and in vivo by a hybridoma anti-E1. Anti-E1 was prepared by fusion of SP2/0 murine myeloma cells with spleen cells isolated from immunized BALB/c mouse. The McAb was characterized by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), SDS-PAGE and Western-blotting. The specificity of the immunoassay was investigated by determining the cross-reactions of E1 analogs when free E1 was detected by competitive indirect enzyme-linked immunosorbent assay (CI-ELISA). Results Analysis revealed that anti-E1 McAb (E1-McAb) was of the IgG1 type, the molecular weight of E1-McAb was 164 000 daltons. The affinity constant of E1-McAb with coated complete antigen was 8.2108L/mol. The linear range for free E1 determined by CI-ELISA was 10pg/mL^10ng/mL. The detection limit was 21.4 pg/mL (defined as twice the standard deviation of the blank). Conclusion The CI-ELISA developed with E1-McAb was both sensitive and specific. The prepared E1-McAb can be used in some immunoassays. 展开更多
关键词 ESTRONE monoclonal antibody immunoassay
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展青霉素免疫学检测方法研究进展 被引量:3
5
作者 袁敏煊 吴泓靓 +4 位作者 游丹阳 郑俊豪 梁效贵 彭文文 傅小香 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第3期207-214,共8页
展青霉素(patulin,PAT)作为一种对人类和动物有致畸、致癌等多种危害的真菌毒素,极易污染水果、蔬菜和谷物及其制品等。鉴于PAT污染范围广、超标检出多等问题,针对该毒素的即时检测对保障食品安全至关重要。免疫分析是快速检测真菌毒素... 展青霉素(patulin,PAT)作为一种对人类和动物有致畸、致癌等多种危害的真菌毒素,极易污染水果、蔬菜和谷物及其制品等。鉴于PAT污染范围广、超标检出多等问题,针对该毒素的即时检测对保障食品安全至关重要。免疫分析是快速检测真菌毒素污染的有效手段之一。但是,尚未有灵敏性好、实用价值高的PAT单克隆抗体和基因工程抗体报道。本文综述了PAT免疫学检测方法研究现状,并通过梳理其免疫学检测发展历程,提出高效特异性PAT单克隆抗体制备的阻碍主要包括PAT存在较大的极性、非免疫原性、在动物体内易被降解的特性及抗体制备选用的类似物结构偏差过大等。因此,本文认为筛选或制备结构稳定且更接近PAT的类似化合物可能是特异性PAT抗体制备的关键。另一方面,随着新型材料和技术(如电化学传感器)的发展,应用性能优良的抗体替代物建立新型免疫学或非免疫学检测方法的前景非常广阔,本文为PAT快速免疫检测方法的建立和应用提供理论依据和参考。 展开更多
关键词 展青霉素 污染 免疫学检测 单克隆抗体 特异性
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玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇双特异性抗体的制备及检测方法构建 被引量:1
6
作者 王云云 石广革 +3 位作者 孙嘉笛 陆欣 纪剑 孙秀兰 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1-10,共10页
玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)是粮食中常见的真菌毒素,长期的饮食暴露会对生物体造成严重危害。目前针对ZEN和DON同步免疫检测分别依赖各自对应的单克隆抗体,而传统单克隆抗体制备周期长、... 玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)是粮食中常见的真菌毒素,长期的饮食暴露会对生物体造成严重危害。目前针对ZEN和DON同步免疫检测分别依赖各自对应的单克隆抗体,而传统单克隆抗体制备周期长、成本高。作者利用重组抗体表达技术在短时间内获得了可同时识别ZEN和DON的双特异性抗体(Bis-scFv),并构建了基于Bis-scFv的间接竞争酶联免疫检测方法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,IC-ELISA),获得ZEN和DON标准曲线的半数抑制质量浓度(IC50)分别为20.64 ng/mL和132.29 ng/mL;Bis-scFv具有良好的特异性,与其他真菌毒素均无显著的交叉反应。同时,将IC-ELISA方法对玉米中的ZEN和DON进行加标回收实验,其回收率为86.02%~108.14%。本研究证明了Bis-scFv可用于粮食样本中ZEN与DON的同步快速检测。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 双特异性抗体 免疫检测
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水果及环境水样中苯醚甲环唑的高灵敏免疫分析方法研究
7
作者 陈梓豪 张咏仪 +6 位作者 杨金易 曾道平 贺颖 徐振林 王弘 孙远明 沈玉栋 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期768-774,共7页
采用辣根过氧化物酶(HRP)催化氧化四甲基联苯胺(TMB)显色为信号输出系统,结合间接竞争反应模式建立了水果及环境水样中苯醚甲环唑的间接竞争酶联免疫分析方法(ic ELISA)。基于高特异性单克隆抗体,通过逐步优化策略,确定最佳免疫分析条件... 采用辣根过氧化物酶(HRP)催化氧化四甲基联苯胺(TMB)显色为信号输出系统,结合间接竞争反应模式建立了水果及环境水样中苯醚甲环唑的间接竞争酶联免疫分析方法(ic ELISA)。基于高特异性单克隆抗体,通过逐步优化策略,确定最佳免疫分析条件为:包被原与抗体质量浓度组合为62.5 ng/mL和0.318μg/mL,一抗竞争反应缓冲溶液为含0.05%Tween-20的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBST,pH 7.4),一抗竞争反应时间为20 min,酶标二抗稀释液为0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4),酶标二抗反应时间为30 min。在该条件下,苯醚甲环唑的线性检测范围(IC_(20)~IC_(80))为0.49~3.90 ng/mL,半数抑制浓度(IC_(50))为1.38 ng/mL,检出限(LOD)为0.33 ng/mL。在柑橘、葡萄、香蕉、草莓田水、湖水和河水样品中的平均加标回收率为72.3%~132%,相对标准偏差(RSD)不大于13%,对10种结构和功能类似物的交叉反应率(CR)均小于0.2%。该方法准确可靠,可用于水果及环境水样中苯醚甲环唑的快速筛查和残留检测。 展开更多
关键词 苯醚甲环唑 单克隆抗体 酶联免疫分析 水果 水样
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雌二醇单克隆抗体制备及胶体金侧流层析免疫分析方法的建立
8
作者 王金魁 丁明月 +3 位作者 毛烨炫 宋莲军 黄现青 张西亚 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第18期201-210,共10页
目的探讨雌二醇(17β-estradiol,E2)的3号位和17号位引入活性基团制备的半抗原对抗体灵敏度的影响,选用灵敏度较高的抗体建立一种牛奶中E2胶体金侧流层析免疫分析方法(colloidalgold-basedlateral flow immunoassay,CG-LFA)。方法从E2的... 目的探讨雌二醇(17β-estradiol,E2)的3号位和17号位引入活性基团制备的半抗原对抗体灵敏度的影响,选用灵敏度较高的抗体建立一种牛奶中E2胶体金侧流层析免疫分析方法(colloidalgold-basedlateral flow immunoassay,CG-LFA)。方法从E2的3号位羟基和17号位羟基引入活性基团分别制备半抗原H1a和H2,偶联载体蛋白制备完全抗原,经过动物免疫和细胞融合筛选,制备单克隆抗体(monoclonal antibodies,mAbs),采用间接竞争酶联免疫吸附实验(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)对mAbs性能进行评估,筛选出灵敏度最高的mAb,最后采用静电吸附法将胶体金标记抗体为探针,构建牛奶中E2的CG-LFA。结果制备了H1a-7B7、H1a-7B12、H1a-9C7、H1a-10E7、H2-2E2、H2-3C10、H2-4A10和H2-6D28种mAbs,经过icELISA评估,其半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为0.116、0.207、0.072、0.370、0.442、6.170、0.415和4.411 ng/mL,最终选取H1a-9C7,构建牛奶中E2的LFA,消线(cut-off)值为6.00ng/mL,与苯甲酸雌二醇和雌三醇的交叉反应率分别为101.31%和2.43%,在真实样本加标回收实验中,检测结果与液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)结果一致。结论E2的3号位引入活性基团设计合成的半抗原所制备的E2抗体灵敏度,比17号位引入活性基团制备的抗体灵敏度高,并且建立的LFA准确度良好,为牛奶中E2快速检测提供了一定的技术手段。 展开更多
关键词 雌二醇 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫吸附实验 胶体金侧流层析免疫分析
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Quantitative assessment of the breast cancer marker HER2 using a gold nanoparticle-based lateral flow immunoassay 被引量:1
9
作者 Liya Ye Xinxin Xu +3 位作者 Aihua Qu Liqiang Liu Chuanlai Xu Hua Kuang 《Nano Research》 SCIE EI CSCD 2024年第6期5452-5460,共9页
Human epidermal growth factor receptor 2(HER2)is an important biomarker for detection and treatment of breast cancer.In this study,we developed monoclonal antibodies against the extracellular domain(ECD)of HER2 and es... Human epidermal growth factor receptor 2(HER2)is an important biomarker for detection and treatment of breast cancer.In this study,we developed monoclonal antibodies against the extracellular domain(ECD)of HER2 and established a rapid and accurate lateral flow immunoassay(LFIA)for use in community medical institutions.The gene sequence of human HER2-ECD was obtained from the National Center for Biotechnology Information(NCBI)to construct the expression plasmid.HER2-ECD protein expressed in HEK293F cells was used to immunize BALB/c mice.The monoclonal antibodies were produced in mouse ascites and isolated by hybridoma cell screening.Antibodies were analyzed for purity by SDS-PAGE(sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel-electrophoresis)and affinity was assessed by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)while subtypes were detected using the commercial kits.The HER2-ECD test strip was prepared based on the sandwich method and evaluated using a portable detection instrument.The affinity of the paired antibodies,4D8 and 8D9,both reached 1×108 L/mol.Both antibodies specifically recognized the HER2-ECD protein in serum.The limit of detection(LOD)of the gold nanoparticle(AuNP)-based LFIA was 1.7 ng/mL with a detection range of 1.7-400 ng/mL,and the performance of the HER2-ECD strip correlated well with that of a Siemens chemiluminescent immunoassay(CLIA)kit.In conclusion,the paired antibodies were successfully prepared with high affinity and specificity.The AuNP-based LFIA of HER2-ECD provides a fast and accurate method to detect the concentration of HER2-ECD in serum samples for clinical use in community medical institutions,and could contribute to determining the progress of the disease or the effectiveness of treatment. 展开更多
关键词 human epidermal growth factor receptor 2 breast cancer monoclonal antibody QUANTITATIVE lateral flow immunoassay
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新型冠状病毒结构蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 王玉玲 金伯泉 +5 位作者 李娜 田莹 董芸 李琦 马樱 庄然 《空军军医大学学报》 CAS 2023年第7期595-601,共7页
目的 制备针对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)刺突蛋白(S蛋白)S1亚基、核衣壳蛋白(N蛋白)的小鼠源性单克隆抗体(mAbs),进行功能和应用的初步鉴定。制备具备中和活性的高亲和力人鼠嵌合抗体。方法 用重组表达的SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基和N蛋白... 目的 制备针对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)刺突蛋白(S蛋白)S1亚基、核衣壳蛋白(N蛋白)的小鼠源性单克隆抗体(mAbs),进行功能和应用的初步鉴定。制备具备中和活性的高亲和力人鼠嵌合抗体。方法 用重组表达的SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基和N蛋白分别免疫BALB/c小鼠,利用常规B细胞杂交瘤技术制备抗S蛋白S1亚基mAbs和抗N蛋白mAbs,并鉴定其在Western blotting、免疫组织化学染色中的应用价值;建立检测可溶性S蛋白和N蛋白的夹心ELISA方法;基于假病毒-荧光素酶检测系统,检测特异性抗体的中和活性。将分泌具备中和活性抗S蛋白S1亚基mAbs的杂交瘤细胞株测序,制备人鼠嵌合抗体。结果 获得53株分泌小鼠抗SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基mAbs的杂交瘤细胞株,克隆号分别命名XA326.1~XA326.53;获得42株分泌小鼠抗SARS-CoV-2 N蛋白mAbs的杂交瘤细胞株,克隆号分别命名XA327.1~XA327.42。初步鉴定出9株可用于Western blotting检测可溶性SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基的mAbs、8株可用于Western blotting检测可溶性SARS-CoV-2 N蛋白的mAbs;9株可用于免疫组织化学染色的抗SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基mAbs、4株可用于免疫组织化学染色的抗SARS-CoV-2 N蛋白mAbs。构建以mAb XA326.7为包被抗体、生物素标记的mAb XA326.19为检测抗体的检测可溶性SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基的夹心ELISA试剂盒;采用mAb XA327.37作为包被抗体、生物素标记的mAb XA327.25为检测抗体,可以建立检测可溶性SARS-CoV-2 N蛋白的夹心ELISA试剂盒。XA326.4、XA326.7、XA326.8、XA326.49 mAbs具有中和活性,可以在假病毒感染实验中阻断病毒对人ACE2阳性细胞的感染。结论 成功制备出一套小鼠抗SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基、N蛋白的mAbs,可用于多种免疫学检测技术,XA326.4、XA326.7、XA326.8、XA326.49中和活性抗体具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 刺突蛋白 核衣壳蛋白 单克隆抗体 中和抗体 免疫学检测方法
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Preparation of a highly specific and sensitive monoclonal antibody against tilmicosin and its application in lateral flow immunoassay
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作者 Youyi Wang Qingyue Li +7 位作者 Guanghua Liang Huayun Li Zizhe Li Tian Gao Lianjun Song Xianqing Huang Dapeng Peng Xiya Zhang 《One Health Advances》 2023年第1期1-9,共9页
To reduce the false positive results caused by cross reactivity of the antibodies with other structural analogues,it is crucial to prepare a high specificity and sensitivity antibody against target for developing an a... To reduce the false positive results caused by cross reactivity of the antibodies with other structural analogues,it is crucial to prepare a high specificity and sensitivity antibody against target for developing an accurate immunoassay.In this study,tilmicosin(TM)was selected as a model molecule.Firstly,two-dimensional similarity,electrostatic potential energy,mulliken atomic charges and overlapping of different haptens with TM were calculated using Gaussian 09W and Discovery studio,and the newly designed TM-HS was selected as the optimal hapten.Furthermore,a monoclonal antibody(mAb 12C8)was produced with the half maximal inhibitory concentration(IC50)of 0.36 ng/mL,and negligible cross-reactivity(CR)with other antibiotics.Finally,a lateral flow immunoassay(LFA)for the detection of TM based on amorphous carbon nanoparticles(ACNPs)labeled mAb 12C8 was developed by the reflectance value under natural light.The recoveries of TM ranged from 83.18%to 103.25%with a coefficient of variation(CV)<12.47%.The results showed that the cut-off value of TM in milk samples was 1 ng/mL,and the limits of detection(LODs)for chicken muscle,bovine muscle,porcine muscle and porcine liver samples were 5.23,5.98,6.85 and 7.31μg/kg,respectively.In addition,40 real samples were tested by the LFA,and the detection results were consisted with that of high-performance liquid chromatography-UV detector(HPLC-UV).Those results indicated that the developed LFA is an accurate and useful tool for on-site screening of TM in milk and animal tissues. 展开更多
关键词 Hapten design monoclonal antibody High sensitivity TILMICOSIN Lateral flow immunoassay
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重金属离子的免疫检测研究进展 被引量:36
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作者 刘功良 王菊芳 +1 位作者 李志勇 梁世中 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期877-881,共5页
农畜产品中残留的重金属离子已对人类安全构成严重威胁,急需快速、高效的重金属残留检测方法。重金属离子免疫检测是一种新型的检测方法,与传统检测方法相比,具有省时、省力、费用低廉、便于携带、易于操作等优点。除了化学螯合剂之外,... 农畜产品中残留的重金属离子已对人类安全构成严重威胁,急需快速、高效的重金属残留检测方法。重金属离子免疫检测是一种新型的检测方法,与传统检测方法相比,具有省时、省力、费用低廉、便于携带、易于操作等优点。除了化学螯合剂之外,植物螯合肽和金属硫蛋白也可用来制备重金属免疫原。重金属离子的免疫检测可分为多克隆抗体免疫检测和单克隆抗体免疫检测,前者包括荧光偏振免疫检测,后者包括间接竞争性ELISA、一步法竞争性免疫检测和KinExA免疫检测。作为一种辅助方法,胶体金快速免疫层析法可初步检测样品中的重金属离子浓度。 展开更多
关键词 重金属离子 多克隆抗体 单克隆抗体 免疫检测
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盐酸克伦特罗单抗快速检测试剂盒的研制 被引量:23
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作者 王选年 杨艳艳 +7 位作者 邢广旭 李青梅 杨继飞 柴书军 赵东 康晓笛 潘耀谦 张改平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期75-78,共4页
以竞争性酶免疫分析原理为基础 ,应用特异性克伦特罗 (Clenbuterol,CL )单克隆抗体研制成功了β-肾上腺素受体激动剂克伦特罗的快速检测 EL ISA试剂盒 (CL- Kit)。 CL- Kit线性检测范围为 0 .5~ 12 8μg/ L,各标准品的吸光值变异系数为... 以竞争性酶免疫分析原理为基础 ,应用特异性克伦特罗 (Clenbuterol,CL )单克隆抗体研制成功了β-肾上腺素受体激动剂克伦特罗的快速检测 EL ISA试剂盒 (CL- Kit)。 CL- Kit线性检测范围为 0 .5~ 12 8μg/ L,各标准品的吸光值变异系数为 2 .3%~ 3.6 %。标准曲线呈典型的 S型 ,相关系数 R2 =0 .996 ,符合 4参数 L ogit曲线拟合。检测结果表明 :CL 单抗对 CL 的半数抑制量 IC50 为 7.94 μg/ L,对沙丁胺醇 (Sb)的 IC50 为 10 0 0 μg/ L,肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素和来克多巴胺的 IC50 均≥ 6 4 0 0 μg/ L;CL- Kit与 Sb的交叉反应性为 0 .79% ,与异丙肾上腺素的交叉反应性为 0 .12 % ,与肾上腺素、去甲肾上腺素、来克多巴胺、各类抗生素及多种维生素均无交叉反应性。试剂盒测定回收率在 91%~ 10 5 % ,批内变异系数小于 2 0 % ,批间变异系数小于 10 %。 展开更多
关键词 克伦特罗 单克隆抗体 免疫分析 竞争性ELISA 肾上腺素受体激动剂
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玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析法的建立 被引量:15
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作者 骆敏儿 唐勇 +3 位作者 向军俭 张晓丽 付强强 王宏 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期729-733,共5页
目的制备并鉴定玉米赤霉烯酮(ZEN)单克隆抗体(mAb),并初步建立ZEN的胶体金免疫层析检测方法。方法采用活泼酯法制备人工抗原ZEN-OVA和ZEN-BSA,以ZEN-OVA作为免疫原制备ZEN mAb。ELISA法鉴定抗体效价、亚类、特异性等。ZEN mAb-胶体金复... 目的制备并鉴定玉米赤霉烯酮(ZEN)单克隆抗体(mAb),并初步建立ZEN的胶体金免疫层析检测方法。方法采用活泼酯法制备人工抗原ZEN-OVA和ZEN-BSA,以ZEN-OVA作为免疫原制备ZEN mAb。ELISA法鉴定抗体效价、亚类、特异性等。ZEN mAb-胶体金复合物包被于胶体金结合垫上,检测原ZEN-BSA和山羊抗小鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上作为检测线(T线)和质控线(C线),建立ZEN的胶体金免疫层析检测法。结果经紫外分光光度法和SDS-PAGE鉴定,ZEN人工抗原合成成功。经3次克隆化后,筛选出1株能稳定分泌ZEN mAb的杂交瘤细胞株1G4,腹水效价为1∶1.6×105;抗体亚类为IgG2b;对ZEN的IC50为10.2 ng/mL,检测限为0.58 ng/mL。mAb对ZEN具有高度的特异性,除与β-玉米赤霉烯醇的交叉反应率为12.8%外,与其他ZEN代谢物α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、玉米赤霉酮及其他相似毒素呕吐毒素、伏马毒素、赭曲霉素A等几乎无交叉反应。制备的胶体金免疫层析试纸条在5 min内即可肉眼观察到结果,对ZEN的最低检测限为100 ng/mL。结论成功制备出1株ZEN mAb,并初步建立了其胶体金免疫层析检测方法,最低检测限为100 ng/mL。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 单克隆抗体 胶体金免疫层析法
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时间分辨荧光免疫分析法直接测定雌二醇 被引量:10
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作者 唐棣 王永成 +2 位作者 常文保 慈云祥 郭振泉 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1999年第8期899-903,共5页
合成了雌二醇抗原,并获得了雌二醇单克隆抗体,通过酶联免疫吸附法测得效价为1.O×10~7.使用洗脱增强-时间分辨荧光免疫分析法测定了血清中的雌二醇,浓度范围为1.0×10^(-2)~1.0×10~3μg/L,最低检出限为5.6ng/L,批内RSD%小... 合成了雌二醇抗原,并获得了雌二醇单克隆抗体,通过酶联免疫吸附法测得效价为1.O×10~7.使用洗脱增强-时间分辨荧光免疫分析法测定了血清中的雌二醇,浓度范围为1.0×10^(-2)~1.0×10~3μg/L,最低检出限为5.6ng/L,批内RSD%小于3.7%,批间RSD%小于7.5%.将测定结果与放射免疫分析法作了比较. 展开更多
关键词 雌二醇 测定 时间分辨 荧光免疫分析
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噬菌体展示肽库筛选赭曲霉毒素A模拟表位的研究 被引量:13
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作者 刘仁荣 余宙 +2 位作者 何庆华 王希 许杨 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期448-450,共3页
目的从噬菌体随机肽库中筛选模拟赭曲霉毒素A表位的噬菌体粒子,并以其替代毒素建立免疫学检测方法。方法以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定... 目的从噬菌体随机肽库中筛选模拟赭曲霉毒素A表位的噬菌体粒子,并以其替代毒素建立免疫学检测方法。方法以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,同时进行DNA测序确定插入七肽的氨基酸序列。结果经过4轮淘选,共筛选到11株能与该抗体特异性结合的阳性克隆,且该结合能被赭曲霉毒素A阻断,模拟表位的共有序列为IRPMVXX,X为任意氨基酸。以其中的P2号克隆建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200~8000pgml,检测下限为150pgml。结论噬菌体展示技术可成功筛选到赭曲霉毒素A模拟表位,筛选到的噬菌体粒子可作为毒素的替代品建立免疫学分析方法。 展开更多
关键词 噬菌体展示肽库 赭曲霉毒素A 模拟表位 单克隆抗体 免疫分析
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伏马菌素B_1免疫检测方法的研究 被引量:34
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作者 郭云昌 刘秀梅 刘江 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期238-240,共3页
本研究建立了用于检测粮食、饲料中伏马菌素B1(FB1)的快速、灵敏、简便的免疫检测方法—建立在单克隆抗体基础上的直接竞争性酶联免疫吸附测定方法(DC—ELISA法);其最低检出浓度为10ng/ml,线性范围在10ng... 本研究建立了用于检测粮食、饲料中伏马菌素B1(FB1)的快速、灵敏、简便的免疫检测方法—建立在单克隆抗体基础上的直接竞争性酶联免疫吸附测定方法(DC—ELISA法);其最低检出浓度为10ng/ml,线性范围在10ng~5μg/ml。对新疆、安徽、黑龙江、哈尔滨四省市玉米样品中的FB1含量进行了测定,结果表明156份样品中有34份检出FB1,阳性率为21.79%,含量在0.18~31.32μg/g范围内,平均含量为12.04μg/g。 展开更多
关键词 伏马菌素B1 单克隆抗体 免疫检测
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甲基对硫磷ELISA分析方法的建立及初步应用 被引量:15
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作者 王刚垛 何凤生 +3 位作者 鱼涛 马兆扬 王伯勋 王玉萍 《中国工业医学杂志》 CAS 北大核心 2001年第6期327-330,共4页
目的 探讨甲基对硫磷 (M16 0 5 )简便、敏感、特异的免疫分析方法。方法 矩阵法选择好包被抗原和单克隆抗体最佳条件 ,建立M16 0 5间接竞争抑制ELISA检测法 ,并分别检测M16 0 5染毒小鼠和接触工人血清中M16 0 5含量。结果 该方法线... 目的 探讨甲基对硫磷 (M16 0 5 )简便、敏感、特异的免疫分析方法。方法 矩阵法选择好包被抗原和单克隆抗体最佳条件 ,建立M16 0 5间接竞争抑制ELISA检测法 ,并分别检测M16 0 5染毒小鼠和接触工人血清中M16 0 5含量。结果 该方法线性范围为 5~ 5 0 0ng/ml ,最低检出浓度为 5ng/ml ,组内和组间变异系数不大于 11 5 %和 14 6 % ,回收率平均为 96 2 %。M16 0 5染毒小鼠和作业工人血清中M16 0 5检出量及检出率与染毒剂量、检测时间及作业工种有关。结论 初步认为此法可用于M16 0 5接触生物标志物的检测。 展开更多
关键词 甲基对硫磷 单克隆抗体 免疫分析 ELISA
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高亲和力抗有机磷杀虫剂单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:11
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作者 薛小平 张美顺 +2 位作者 李荣源 朴元哲 郑泰晚 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第6期68-71,75,共5页
制备抗有机磷杀虫剂单克隆抗体。采用人工合成带有特殊功能基团的半抗原 ,将其与载体蛋白偶联 ,以半抗原偶联物为免疫原 ,免疫BALB c小鼠 ,取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 ,HAT选择、有限稀释法克隆化 ,建立分泌抗机磷杀虫剂... 制备抗有机磷杀虫剂单克隆抗体。采用人工合成带有特殊功能基团的半抗原 ,将其与载体蛋白偶联 ,以半抗原偶联物为免疫原 ,免疫BALB c小鼠 ,取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 ,HAT选择、有限稀释法克隆化 ,建立分泌抗机磷杀虫剂单克隆抗体的杂交瘤细胞系。ELISA间接法和ELISA竞争抑制法检测抗体滴度 ,非竞争抑制法检测抗体亲和常数。结果获得 9株分泌抗机磷杀虫剂单克隆抗体的杂交瘤细胞系 ,其中 7株为型特异性 ,2株为组特异性 ;Ig亚型均为IgG1 ;亲和常数为 4 0 7× 1 0 8± 0 43M和 1 2 7× 1 0 9± 0 2 4M。结论为人工人工合成的、含特殊功能基团的半抗原 ,与载体蛋白偶联后 ,做免疫原 ,可用于制备高滴度的抗有机磷杀虫剂单克隆抗体 。 展开更多
关键词 亲和力 有机磷杀虫剂 单克隆抗体 制备 鉴定 免疫测定
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双酚A单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立 被引量:8
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作者 许龙 章英 +5 位作者 朱立鑫 范艳 赖肖 孟玮 胡娜 刘仁荣 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第20期202-206,共5页
采用活泼酯法将双酚A的结构类似物双酚酸与载体蛋白偶联制备人工抗原,用制备的人工抗原免疫BALB/c小鼠,采用聚乙二醇法进行细胞融合制备双酚A单克隆抗体,成功获得一株分泌抗双酚A单克隆抗体的细胞株3H1,经鉴定抗体属于Ig G1亚型,轻链为... 采用活泼酯法将双酚A的结构类似物双酚酸与载体蛋白偶联制备人工抗原,用制备的人工抗原免疫BALB/c小鼠,采用聚乙二醇法进行细胞融合制备双酚A单克隆抗体,成功获得一株分泌抗双酚A单克隆抗体的细胞株3H1,经鉴定抗体属于Ig G1亚型,轻链为κ,并建立了间接竞争酶联免疫分析法。线性范围为1~50 ng/m L,最低检测限为0.43 ng/m L,半数抑制浓度为6.56 ng/m L。回收率为82.83%~101.94%,变异系数为2.94%~12.95%。该方法具有较高的灵敏度和特异性,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 双酚A 单克隆抗体 酶联免疫分析法
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