在烟草叶片中瞬时表达具有生物活性的重组人纤溶酶原激活剂

目的探索在植物中瞬时高效表达重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)的可行性,探寻低成本rhPA表达新途径。方法构建表达rhPA的烟草花叶病毒(TMV)表达载体pTMV rhPA-NSK和Zera融合标签植物表达载体pJ Zera-rhPA;农杆菌渗滤接种受体植物Nicotiana benthamiana和N. excelsiana叶片;观察叶片接种部位表型变化;Western blot和ELISA测定和分析rhPA在受体烟草中的表达情况及表达产物特点;纤维蛋白琼脂糖平板法评价rhPA的体外生物活性。结果病毒载体实验结果显示,pTMV rhPA-NSK病毒载体在N. benthamiana和N. excelsiana叶片接种部位产生不同程度的坏死症状;在坏死组织中依然存在完整的rhPA蛋白;N. benthamiana中rhPA的表达量略高于N. excelsiana(P<0.05),约占接种叶片可溶性总蛋白的0.6%;表达的rhPA具有体外溶栓活性。Zera融合标签实验结果显示,pJ Zera-rhPA表达载体在烟草叶片接种部位未造成坏死;Zera标签与其融合蛋白rhPA之间可能存在着易断裂位点;Zera标签蛋白微粒的形成是一种逐步积累聚集的过程;在微粒形成过程中,部分可溶性多肽可能被包裹进了微粒。结论在烟草中可以快速地表达具有生物学活性的rhPA,植物病毒表达系统为低成本rhPA的生产提供一种富有潜力的新平台。