泽泻汤通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡途径减缓大鼠非酒精性脂肪肝的机制研究

目的 探究泽泻汤减缓大鼠非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)的机制,揭示(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)/半胱天冬酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)/消皮素-D(gasdermin-D,GSDMD)焦亡途径在其过程中的调控作用。方法 采用高脂饲料喂养复制NAFLD大鼠模型,将SD大鼠随机分为对照组、模型组、泽泻汤正常剂量组、泽泻汤高剂量组,造模成功后,分别给予对应剂量泽泻汤及等体积生理盐水灌胃给药30 d,全自动生物化学分析仪检测各组大鼠血清甘油三酯(triglyceride, TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase, ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase, AST),HE和油红O染色观察大鼠肝脏形态学变化,RT-qPCR和Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测大鼠肝脏NLRP3、GSDMD、Caspase-1、白介素-1 β(interleukin-1β,IL-1 β)基因mRNA及蛋白表达。结果 与对照组相比,模型组大鼠血清TG、TC、LDL、ALT、AST表达水平显著升高(P<0.01),HDL-C表达水平显著降低(P<0.01),肝脏结构显著异常,大鼠肝脏NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-1β基因mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01),给予不同剂量的泽泻汤干预后,NAFLD大鼠血脂水平明显改善,ALT、AST表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01),肝脏结构异常得以改善,其中泽泻汤高剂量为实验最佳治疗剂量,泽泻汤高剂量治疗后,NAFLD大鼠肝脏GSDMD、IL-1β基因mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01),NLRP3、Caspase-1基因mRNA表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论 泽泻汤可能通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡途径减缓大鼠非酒精性脂肪肝进程。

半夏白术天麻汤合泽泻汤加味对痰湿壅盛型高血压病体重指数、降压效果的影响

目的观察半夏白术天麻汤合泽泻汤加味对痰湿壅盛型高血压病体重指数、降压效果的影响。方法将120例超重或肥胖(BMI≥24)、辨证为痰湿壅盛型的高血压病患者随机分为治疗组(予中药加氯沙坦)与对照组各60例(予氯沙坦),治疗12周;比较两组治疗前后体重指数、降压效果。结果治疗组患者体重指数降低,收缩压、舒张压明显下降,与对照组比较有显著差异。结论半夏白术天麻汤合泽泻汤加味合以西药可降低超重或肥胖痰湿壅盛型高血压病患者的体重指数及收缩压、舒张压。

结合汉江流域气候特点运用麻杏石甘汤合泽泻汤加减治疗重症COVID-19

新型冠状病毒肺炎(COVID-19),简称"新冠肺炎"。以发热、干咳、乏力为主要表现。重症患者多在发病一周后出现呼吸困难和/或低氧血症,严重者可快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍及多器官功能衰竭等。该隔离病区经中西医结合治疗1例危重患者,3例病重患者均痊愈出院;其中麻杏石甘汤合泽泻汤加减治疗重症COVID-19疗效显著,特总结经验与同道共享。

泽泻汤对高热量饮食诱导认知功能损害模型小鼠的认知功能及脑组织神经炎症的影响

目的探究泽泻汤对高热量饮食介导的认知功能损害的影响及可能机制。方法将27只C57BL/J小鼠随机分成对照组、模型组和泽泻汤组,每组9只。模型组和泽泻汤组小鼠均采用高脂饲料喂养建立高热量饮食诱导认知功能损害小鼠模型,泽泻汤组在高脂饲料喂养的同时给予0.36 g/(kg·d)泽泻汤灌胃,对照组和模型组小鼠给予等体积生理盐水灌胃,持续8周。每周同一时间记录小鼠体质量;干预结束后,各组小鼠进行口服葡萄糖耐量测试、胰岛素耐量测试;利用莫利斯水迷宫实验、旷场实验、新物体识别实验、Y迷宫测试对小鼠进行认知行为学检测;核磁共振波谱检测小鼠左侧海马、下丘脑、皮层神经代谢物质N-乙酰天门冬氨酸(NAA)、胆碱(CHO)、乳酸(Lac)、肌酸(Cr)、脂质(Lip)、肌醇(mI)的表达;蛋白质免疫印迹法检测小鼠脑组织突触素(SYN)、突触体相关蛋白25(SNAP-25)、突触后致密蛋白95(PSD-95)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核转录因子κB p65(NF-κB p65)及磷酸化核转录因子κB p65(p-NF-κB p65)的表达;尼氏染色检测海马神经元的形态变化。结果与对照组比较,模型组小鼠体质量、口服葡萄糖耐量测试血糖和胰岛素耐量测试血糖水平均升高;模型组小鼠在莫利斯水迷宫实验中第3天、第4天的移动总路程和逃避潜伏期增加、在平台区域停留时间和穿越平台次数减少,在旷场实验中模型组小鼠进入中心区域的次数、中心区域停留时间与总时间的比值、中心区域活动路程与总路程的比值显著减少,在新物体识别实验中模型组小鼠新物体识别频次和识别指数显著降低,Y迷宫测试中模型组小鼠自发交替率明显降低(P<0.05或P<0.01);模型组小鼠左侧海马、下丘脑和皮层的CHO/Cr、NAA/Cr明显降低,mI/Cr、Lac/Cr和Lip/Cr明显升高;脑组织中SYN/β-actin、SNAP-25/β-actin、PSD-95/β-actin值显著降低,p-NF-κB p65/NF-κB p65、TNF-α/β-actin值显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,泽泻汤组小鼠上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01)。尼氏染色结果显示,与对照组比较,模型组小鼠海马齿状回神经元排列散乱稀疏,密度明显降低,细胞核有固缩,尼氏小体数量减少,染色变浅;与模型组比较,泽泻汤组海马齿状回区域神经元密度增加,细胞核皱缩改善,细胞间隙缩小,排列稍紧密。结论泽泻汤对高热量饮食诱导的认知功能损害小鼠的认知功能有改善效果,可能与重构糖代谢平衡,抑制神经炎症,减少神经元损伤,增强突触可塑性有关。

基于GRP78/PERK/ATF4的泽泻汤改善脂质诱导肝细胞内质网应激作用机制研究

目的:基于GRP78/PERK/ATF4通路探讨泽泻汤改善肝细胞内质网应激的潜在机制。方法:采用油酸(OA)及高脂饮食诱导高脂细胞及动物内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)模型。ER与Ca^(2+)荧光共定位观察泽泻汤对ER-Ca^(2+)稳态的调节情况;流式细胞术及Tunel法检测泽泻汤对凋亡的影响;Q-PCR检测ER核心信号1(Ern1)、转录激活因子6(Atf6)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein,Chop)、Grp78、Perk、X-盒结合蛋白1(Xbp1)、热休克蛋白90β1(Hsp90β1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员10B(Tnfrsf10b)的mRNA表达;Western bolt法检测葡萄糖调节蛋白78/B细胞免疫球蛋白结合蛋白(GRP78/BIP)GRP78、类PKR的内质网激酶(PERK)、p-PERK和转录激活因子4(ATF4)的蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组ER-Ca^(2+)明显失衡(P<0.05),肝细胞凋亡增加(P<0.01),Perk、Xbp1等ERS相关mRNA的表达上调(P<0.05),ERS伴侣标志蛋白GRP78、ATF4蛋白表达明显上调(P<0.05);与模型对照组相比,泽泻汤逆转了OA诱导的ER-Ca^(2+)失衡(P<0.01);显著改善OA及高脂饮食诱导的肝细胞凋亡(P<0.01);体内外下调ERS相关基因Ern1、Atf6、Chop、Grp78、Perk、Xbp1、Hsp90b1、Tnfrsf10b的表达(P<0.05);体内外逆转OA及高脂饮食诱导的ERS伴侣标志蛋白GRP78表达的显著上调(P<0.01),同时下调p-PERK及ATF4蛋白表达(P<0.05)。结论:泽泻汤抑制脂质诱导的ERS,其机制可能与调控GRP78/PERK/ATF4通路有关。