正心降脂片多指标成分的含量测定及聚类热图分析

目的:建立同时测定正心降脂片中葛根素、3′-甲氧基葛根素、大豆苷、芦丁、橙皮苷、丹酚酸A、槲皮素等7种成分含量的方法,并进行聚类热图分析。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Kromasil C_(18),流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(梯度洗脱),流速为0.8 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为25℃,进样量为10μL。以含量数据为对象,采用Hiplot科研绘图平台绘制聚类热图。结果:葛根素、3′-甲氧基葛根素、大豆苷、芦丁、橙皮苷、丹酚酸A、槲皮素检测质量浓度的线性范围分别为17.00~170.00(r=0.9999)、5.14~51.40(r=0.9998)、3.00~30.00(r=0.9998)、153.00~1530.00(r=0.9999)、7.88~78.75(r=0.9998)、2.85~28.50(r=0.9999)、11.34~113.40μg/mL(r=0.9998)。精密度、稳定性(24 h)、重复性试验的RSD均小于2%;平均加样回收率分别为99.58%(RSD=0.83%,n=6)、100.31%(RSD=1.17%,n=6)、100.61%(RSD=1.08%,n=6)、100.05%(RSD=0.82%,n=6)、100.31%(RSD=1.38%,n=6)、100.31%(RSD=0.85%,n=6)、99.85%(RSD=1.01%,n=6)。10批样品中上述成分的含量分别为7.2625~8.9415、2.4649~3.0689、1.4789~1.8834、58.6328~79.4083、3.5694~4.5006、1.0776~1.3415、1.1397~5.9570 mg/g。聚类热图分析结果显示,10批样品可聚为4类,其中S1~S3聚为一类、S4聚为一类、S5~S6聚为一类、S7~S10聚为一类。结论:所建含量测定方法操作简便、准确性高、专属性强,结合聚类热图分析可用于正心降脂片的质量控制;不同批次样品的质量存在一定差异。

基于一测多评法对正心降脂片中7种成分的质量控制研究

目的建立一测多评法(QAMS)同时测定正心降脂片中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、橙黄决明素、黄决明素、决明素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花苷的含量,验证此方法在制剂中应用的准确性和可行性。方法采用Shimadzu C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;柱温为25℃;流动相A:乙腈-甲醇(9∶1),流动相B:1.0 mL·L^-1甲酸溶液,梯度洗脱;流速为1.0 mL·min^-1;检测波长分别为345 (检测木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷),284(检测橙黄决明素、黄决明素和决明素)和254 nm(检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花苷)。以正心降脂片为研究对象,选定橙黄决明素为内参物,建立其与木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、黄决明素、决明素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花苷的相对校正因子,计算待测成分含量,同时将外标法实测值与一测多评法的计算值进行比对,以验证一测多评法的准确性和可靠性。结果木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、橙黄决明素、黄决明素、决明素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花苷的线性范围分别为8.57~214.25,5.91~147.75,2.73~68.25,1.18~29.50,0.79~19.75,3.07~76.75和1.89~47.25μg·mL^-1,r值均在0.999 2~0.999 7范围内;平均回收率分别为99.59%,98.95%,97.82%,98.00%,97.65%,96.99%和100.02%;RSD值分别为0.74%,1.12%,1.28%,0.99%,1.44%,1.01%和0.88%(n=9)。木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、橙黄决明素、黄决明素、决明素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花苷含量的一测多评法计算值和外标法实测值比较差异无统计学意义。结论一测多评法可同时测定正心降脂片中7种成分的含量,该方法简便、重复性好、准确度高。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术的正心降脂片化学成分研究

目的建立一种快速鉴定中药复方制剂正心降脂片的高分辨质谱分析方法,系统阐明其化学成分组成。方法采用超高效液相色谱静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)对正心降脂片成分进行分析,色谱柱为Thermo Accucore aQ RP18(2.1 mm×150 mm,2.6μm),流动相采用乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)进行梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1)。采用加热电喷雾离子源,正、负离子同时扫描模式采集数据。根据一级准分子离子精确质荷比、二级质谱碎片离子信息、文献报道和对照品比对鉴定正心降脂片的化学成分。结果共鉴定了正心降脂片中105个化学成分,包括21个有机酸、59个黄酮类化合物(黄酮氧苷类37个,黄酮碳苷类10个,多甲氧基黄酮类化合物12个)、19个醌类化合物(11个蒽醌类和8个菲醌类)、3个二苯乙烯类化合物及3个其他类型化合物。其中29个化合物采用对照品比对进行了鉴定,并对各成分的药材来源进行了归属。结论对正心降脂片的化学成分进行了系统、全面地分析,为其药效物质基础、质量控制及作用机制研究奠定了基础。

正心降脂片HPLC指纹图谱构建与共有峰高分辨质谱分析

目的:建立正心降脂片的HPLC指纹图谱,为该制剂的质量控制提供参考依据。方法:采用Kromasil C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,3.5μm)进行色谱分离,使用乙腈-0.1%甲酸流动相系统进行梯度洗脱,流速0.8 mL·min^(-1),柱温25℃,检测波长254 nm。采用国家药典委员会颁发的中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)分析评价所构建的10批正心降脂片指纹图谱相似度。采用Q-Exactive轨道阱高分辨质谱技术和对照品比对鉴定共有峰成分。结果:构建了正心降脂片的指纹图谱共有模式并确认了其中的32个共有指纹峰,去除芦丁积分前后计算得到的10批正心降脂片指纹图谱与对照指纹图谱的相似度分别大于0.99和0.95。采用高分辨质谱技术共鉴定了26个共有峰,其中13个共有峰采用对照品比对进一步确认为3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷、芦丁、木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、橙皮苷、大豆苷元、丹酚酸A、槲皮素、异鼠李素、橙黄决明素、大黄素。通过与组方中各单味药以及阴性样品的比对,对共有峰进行峰归属,32个共有峰涵盖了组方中全部8味药材。结论:本文所建立的正心降脂片HPLC指纹图谱方法简便、可靠,专属性强,结合共有峰的高分辨质谱定性分析,为正心降脂片的质量评价及药效物质基础研究奠定了基础。