基于转录组学探讨何首乌不同炮制品的肝细胞毒性作用机制

目的探讨何首乌(Polygonum Multiflorum,PM)炮制后降低肝毒性的作用机制。方法通过使用生何首乌(raw Polygonum Multiflorum,RPM)与制何首乌(processed Polygonum Multiflorum,PPM)处理L02肝细胞,采用CCK-8与EdU试剂检测L02肝细胞的细胞活力与增殖能力;运用转录组学技术分析正常组、RPM、PPM组之间的差异基因,并对差异基因进行富集分析,在此基础上采用Western blot和免疫荧光验证相关通路上关键蛋白的表达水平。结果CCK-8和EdU实验中发现,与正常组相比,RPM组能够显著抑制肝细胞的细胞活力与增殖能力(P<0.01),与RPM组相比,PPM组的肝细胞活力与增殖能力明显升高(P<0.01)。RNA测序结果发现,与正常组相比,RPM组有3449个上调基因、3793个下调基因。与RPM组相比,PPM组有3788个基因上调、3515个基因下调。将正常组与RPM组的差异基因和RPM组与PPM组的差异基因进一步取交集,得到6854个共同差异基因;GO分析类结果显示主要参与细胞杀伤、细胞聚集、新陈代谢、生长等生物过程;KEGG富集分析结果显示,这些差异基因主要富集在内吞作用、溶酶体、自噬作用等细胞过程。Western blot与免疫荧光结果显示,与正常组相比,RPM组中自噬相关基因LC3蛋白水平显著上调(P<0.01),P62蛋白水平显著降低(P<0.01);与RPM组相比,PPM组中LC3蛋白水平显著降低(P<0.01),P62蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论何首乌炮制后能够降低肝细胞毒性,其机制可能与减少细胞自噬有关,为降低何首乌毒性提供了新的干预措施。

何首乌历代炮制方法考证

目的考证何首乌的历代炮制方法。方法通过查阅古今本草、文献及相关法典,对何首乌的历代炮制方法进行探讨。结果自《仙授理伤续断秘方》出现黑豆制何首乌,之后相继出现净制、切制、酒制,醋制,九蒸九曝,水煮,泔制,泔、麸炒,火炮,药汁制,泔、黑豆蒸,乳制等一系列不同的炮制方法和要求。其中黑豆制何首乌沿用至今并广泛使用。结论何首乌净制是否去皮,切制用具是否对何首乌有影响,传统"九蒸九晒"何首乌等炮制工艺与质量标准有待进一步规范化和标准化。

不同炮制时间制何首乌大鼠血清中大黄素含量测定

目的:研究不同炮制时间制何首乌经口服给药后大鼠血清中大黄素含量的变化。方法:将20只SD大鼠随机分成空白组、制何首乌不同炮制时间24、48、72 h组,每组5只,共4组。空白组给生理盐水。其余各组分别给予不同炮制时间的制何首乌水提液灌胃,24 h(12 g/kg)、48 h(12 g/kg)、72 h(12 g/kg),连续7 d后,腹主动脉取血,离心,采用高效液相仪分析大鼠血清中大黄素的含量。HPLC条件,色谱柱:Spursil ODS 5μm 250×4.6 mm色;流动相甲醇∶磷酸水(83∶17);紫外检测波长:254 nm。结果:制何首乌炮制24 h时大鼠血清中大黄素含量为0.01536μg/L,炮制48 h血清含量为0.01276μg/L,炮制72 h血清含量为0.0100μg/L。结论:制何首乌不同炮制时间给大鼠经口服给药后,血清中大黄素的含量会发生改变,且随炮制时间的延长,大鼠血清中的大黄素含量呈减少趋势。提示在使用何首乌时,可以通过延长其炮制时间,减少何首乌中大黄素的含量,可能会降低其对肝脏的损伤。

何首乌配方颗粒质量标准研究

目的:对何首乌配方颗粒进行质量标准研究。方法:采用薄层色谱法对何首乌配方颗粒进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对何首乌配方颗粒中的2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷含量进行测定。结果:2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的线性范围为0.4028～3.6252μg,平均回收率为101.15％,RSD=2.00％。结果:方法可行、重复性好,能有效地控制何首乌配方颗粒的质量。

对何首乌基原和品种的再认识

何首乌的安全性近期成为关注的焦点,其肝毒的诱因众说纷纭,经考证发现了品种、使用习惯方面的一些问题,也许能为剖析其诱因提供一些线索。何首乌有赤(雄)、白(雌)之分,传统应用多雌雄合用,赤何首乌即何首乌Fallopia multiflora,白何首乌即何首乌原变种F.multiflora var.multiflora。供同行参考。