液质联用技术鉴定至宝三鞭丸化学成分

目的建立HPLC-LTQ-Orbitrap MS和HPLC-QQQ MS/MS法分析至宝三鞭丸化学成分。方法采用分段供试品制备的前处理方式、高分辨质谱数据依赖的采集模式、HPLC-MS/MS靶向成分采集等综合研究策略鉴定成分。分析采用Waters BEH HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm);流动相0.1%甲酸水-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温30℃;电喷雾离子源(ESI);正负离子扫描。结果共鉴定出82个化合物,包括有机酸类18个、黄酮类17个、萜类及皂苷类11个、色原酮类8个、苯乙醇苷类4个、生物碱类3个、香豆素类3个、木脂素类2个、蒽醌类2个,其中30个通过与对照品保留时间及碎片离子信息比对而确认。结论本研究初步鉴定了至宝三鞭丸化学成分,为该制剂质量控制、作用机制研究提供了有力的支撑。

灵芝康爱芝宝增强环磷酰胺抑制小鼠乳腺癌肺转移的增效减毒作用

目的探讨灵芝康爱芝宝(GanoExtra)与环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)联用对抑制小鼠乳腺癌肺转移的增效减毒作用以及对免疫功能的影响。方法通过CCK-8实验验证GanoExtra对肿瘤细胞MCF-7和4T1的毒性;尾静脉注射4T1细胞建立小鼠乳腺癌肺转移模型,设立4T1模型组、CTX组、GanoExtra组和GanoExtra+CTX组,另设对照组。21 d后麻醉处死小鼠,记录小鼠体重、肺转移灶数;肺和脾脏系数;测定小鼠脾脏细胞的活性和NK细胞的活性;测定小鼠血样中各细胞数量;流式细胞术测定血样中CD4^(+)和CD8^(+)T细胞的含量;ELISA法检测血清中TNF-α和IL-6含量;HE染色法观察肿瘤及各组织病理形态学变化;CFSE染色测定GanoExtra对CD8^(+)T细胞的增殖作用。结果在体外,GanoExtra可明显抑制MCF-7和4T1肿瘤细胞活性;在乳腺癌肺转移模型中,与模型组相比,GanoExtra组小鼠脾脏系数和血液WBCs含量明显降低,RBCs、NK细胞、脾细胞活性、CD3^(+)和CD8^(+)细胞比例明显升高;治疗结束后,与CTX组相比较,GanoExtra+CTX组肺转移灶数和肺脏系数明显降低,小鼠血液HGB、CD8^(+)细胞、IL-6和TNF-α明显升高。在体外10 mg·L^(-1)的GanoExtra可明显促进CD8^(+)T细胞增殖。结论GanoExtra可以提高CTX对肿瘤转移的抑制作用,减少由于CTX导致的不良反应,具有促进CD8^(+)T细胞增殖以增强机体免疫疗效的保健功能。

牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠肺损伤转化生长因子-β_1及其受体表达的影响

目的观察牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠肺损伤转化生长因子 β1及其受体表达的影响。方法静脉注射脂多糖内毒素 (1 5mg/kg)、腹腔注射D 氨基半乳糖 (10 0mg/kg)造成内毒素休克模型 ,用牛珀至宝微丸干预处理 ,并用免疫组化方法检测转化生长因子 β1及其受体在肺组织内的表达。结果牛珀至宝微丸可以使内毒素休克大鼠肺转化生长因子 β1及其受体表达增强 ,肺损伤减轻。结论牛珀至宝微丸减轻内毒素休克肺损伤的机理可能与其增强肺组织转化生长因子

牛珀至宝微丸对内毒素休克鼠肺组织中一氧化氮合酶活性的影响

【目的】观察牛珀至宝微丸(由水牛角、麝香、地黄、朱砂、牛黄、郁金等组成)对内毒素休克时肺损伤的保护作用和肺一氧化氮合酶(NOS)表达的影响。【方法】静脉注射脂多糖(LPS)1.5mg/kg、腹腔注射D-氨基半乳糖(D-Gal)100mg/kg造成内毒素休克模型,用牛珀至宝微丸和氨基胍(AG)作对照干预处理,用硝酸还原酶法检测血浆一氧化氮(NO)浓度,同位素标记法测肺组织匀浆NOS活性,免疫组化方法检测诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在肺组织内的表达。【结果】牛珀至宝微丸可以降低内毒素休克时血浆NO浓度,降低肺组织iNOS活性,使肺内iNOS表达减弱、eNOS表达增强,肺损伤减轻。【结论】牛珀至宝微丸可以减轻内毒素休克造成的肺损伤,这种保护作用可能是通过调节肺组织NOS表达而产生的。

牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠脑神经型一氧化氮合酶表达的影响

目的:探讨牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠脑神经型一氧化氮合酶(neuronalnitricoxide synthase,nNOS)表达的影响。方法:将SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、牛珀至宝微丸组。模型组静 脉注射内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)1.5mg/kg、腹腔注射D 氨基半乳糖(D galactosamine, D GalN)100mg/kg造成内毒素休克模型,牛珀至宝微丸组用药7d后再作以上处理。用免疫组织化学方法 检测各组nNOS在不同脑区的表达。结果:nNOS阳性细胞广泛分布于大脑皮质Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ层,海马分子层, 齿状回多形层,脑干网状结构,小脑分子层、颗粒层和普尔基涅细胞层。在大脑皮质、海马、脑干及小脑各部 位,牛珀至宝微丸组的nNOS阳性细胞数略高于正常对照组,但明显低于模型组(P<0.05)。结论:牛珀至 宝微丸有部分下调内毒素休克所致广泛脑区nNOS过度表达的作用。

抗感至宝口服液防治小儿反复呼吸道感染的临床研究

本研究系统介绍了抗感至宝口服液与左旋咪唑对比治疗反复呼吸道感染患儿的临床观察。结果表明，抗感至宝口服液组总有效率为９３．２％，明显高于左旋咪唑对照组（Ｐ＜０．０５）。在改善患儿症状、体征方面，前者亦明显优于后者（Ｐ＜０．０５）。两药均有提高和调节机体Ｔ淋巴细胞免疫功能，并可显著增强红细胞－Ｃ３ｂ受体的花环率，使之与健康儿比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５），提示该药的疗效可能与此有关。

脑力智宝及其含药血清对硝普钠诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的探讨中药脑力智宝对PC12细胞凋亡的抑制作用及机制。方法以硝普钠(sodium nitro- prusside,SNP)诱导的PC12细胞凋亡为模型,采用血清药理学方法,用荧光显微镜观察细胞形态学的改变,流式细胞仪检测DNA含量及凋亡细胞百分率,免疫组织化学检测Bcl-2蛋白的表达,以DPH为荧光探针检测细胞膜的流动性。结果脑力智宝提取物及含药血清能减轻SNP引起的细胞核形态学的改变,减少凋亡细胞数,使SNP诱导的PC12细胞凋亡百分率明显下降,凋亡峰显著降低,并能提高Bcl-2蛋白的表达,增加细胞存活率,增加膜流动性。结论脑力智宝对SNP诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用。并可能是通过促进Bcl-2蛋白表达,增加细胞膜流动性等途径而抑制细胞凋亡的。

牛珀至宝丹及参麦液对内毒素休克大鼠肺损伤的保护作用

本实验用粗制大肠杆菌内毒素（ET）休克大鼠模型，依据中医开闭固脱治则，用牛珀至宝丹及参麦注射液治疗，观察其对ET休克大鼠肺脏损伤的保护作拥。结果表明牛珀至宝丹及参麦注射液可明显减轻ET休克大鼠肺组织损伤，表现为平均动脉压（MAP）下降程度减轻，肺泡腔内白细胞渗出及乳酸脱氢酶（LDH）释放减少，脂质过氧化损伤及肺组织学改变明显减轻。

回春至宝口服液的研制

介绍回春至宝口服液的处方组成、制备工艺研究、质量标准、以及药理和急性毒性试验研究。ＨＰＩＣ法对主药之一淫羊藿的有效成分淫羊藿甙成功地进行含量测定，方法重现性好，平均回收率达９８．９７％，ＲＳＤ＝１．５３％。

牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1表达的影响

目的:观察牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box-1 protein,HMGB1)表达的影响。方法:30只SPF级Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组、内毒素组和牛珀至宝微丸组。牛珀至宝微丸组大鼠每天以含生药量3mg的牛珀至宝微丸生理盐水悬液3mL灌胃,连续7d,正常组予生理盐水。模型组和牛珀至宝微丸组大鼠用静脉注射内毒素(1.5mg/kg)联合腹腔注射D-氨基半乳糖(100mg/kg)方法建立内毒素休克模型。采用二氨基联苯胺(diaminobenzidine,DAB)显色和异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)荧光标记的免疫组织化学染色以及蛋白印迹等方法检测大鼠肺组织内HMGB1的表达。结果:正常组HMGB1表达较弱,仅有少量细胞呈阳性,阳性部位多在细胞核;内毒素组HMGB1表达增加,阳性部位主要在细胞质;牛珀至宝微丸组HMGB1表达更高,阳性部位主要在细胞核。结论:牛珀至宝微丸能使HMGB1定位于细胞核内,从而可能避免被分泌出胞,产生毒性,这可能是其治疗感染性休克的作用机制之一。

脑力智宝对老年性痴呆大鼠神经细胞凋亡的影响

目的 :研究老年性痴呆大鼠海马和额叶皮质细胞凋亡相关基因bcl 2表达及脑力智宝对其的影响。方法 :复制老年性痴呆大鼠模型 ,治疗组在复制模型后每天灌服脑力智宝至实验结束。应用流式细胞仪测定细胞群中细胞凋亡的比例和Bcl 2蛋白的含量 ,并观察其组织学改变。结果 :组织学可见凋亡早期的形态学改变。模型组大鼠海马、额叶神经细胞凋亡及Bcl 2蛋白含量较正常组为高 ;脑力智宝治疗后凋亡细胞减少 ,但海马区仍高于正常组 ,Bcl 2蛋白水平有所下调 ,接近正常组。结论 :老年性痴呆与细胞凋亡有关 ,脑力智宝对其有一定的治疗作用。

牛珀至宝微丸对内毒素致急性肺损伤纤维化大鼠辅助性T细胞的影响

目的：观察牛珀至宝微丸对内毒素致急性肺损伤纤维化（RPF）大鼠辅助性T细胞（Th细胞）的影响。方法将224只健康Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、地塞米松组（地米组）和牛珀至宝微丸组（牛丸组），每组56只。采用内毒素“三次打击”造成RPF模型。于制模前3 d和制模后7 d牛丸组给予牛珀至宝微丸500 mg/kg灌胃，每日2次，共用10 d；地米组腹腔注射地塞米松3.0 mg/kg，每日1次，连用7 d；对照组给予等体积蒸馏水灌胃。于给药后1、3、7、9、14、21、28 d 7个时间点取血和支气管肺泡灌洗液（BALF），用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清及BALF中γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）含量；然后取肺组织用苏木素-伊红（HE）染色及Van Gieson法染色，光镜下观察肺组织形态学变化。结果 HE染色显示，模型组肺间质增厚，肺泡腔内大量炎性渗出，腔内微血栓形成；地米组肺间质增厚，炎性渗出减少明显；牛丸组渗出较地米组稍增多，肺间质基本正常。Van Gieson法染色显示：模型组胶原纤维表达明显；地米组胶原纤维表达减少不明显；牛丸组胶原纤维表达显著减少。ELISA试验显示：模型组BALF和血清中IFN-γ显著升高，地米组7 d时最低，14 d上升至治疗前水平，21 d逐渐下降；牛丸组IFN-γ持续处于高水平后缓慢回落，给药后7 d起各时间点BALF和血清中IFN-γ水平即明显高于模型组和地米组〔BALF（ng/L）：140.47±4.22比149.23±8.35、90.67±6.65；血清（ng/L）：140.47±4.15比100.43±11.05、99.35±7.85，P＜0.05或P＜0.01〕。各组BALF和血清中IL-4显著升高，7 d时最高，以后逐渐降低，给药后28 d牛丸组显著低于模型组和地米组〔BALF（ng/L）：6.60±1.05比7.20±1.25、8.55±1.05，血清（ng/L）：6.75±1.05比7.21±1.25、8.25±1.15，P＜0.05或P＜0.01〕。结论牛珀至宝微丸通过促进IFN-γ分泌、抑制IL-4分泌，调整Th细胞失衡，以达到抗炎、减轻肺损伤、抑制肺纤维化的作用。

牛珀至宝丹合鸡卵黄免疫球蛋白抗内毒素休克的实验研究

为研究牛珀至宝丹 (主药 :水牛角、羚羊角、郁金、琥珀等 )合鸡卵黄免疫球蛋白抗内毒素休克的作用与机理 ,6 0只SD大鼠均分为 6组 :空白对照组 (A)、模型组 (B)、普通鸡卵黄对照组 (C)、鸡卵黄免疫球蛋白组 (D)、牛珀至宝丹组 (E)、牛珀至宝丹合鸡卵黄免疫球蛋白 (F)。除A组外 ,其余 5组大鼠均以粗制大肠杆菌内毒素制成内毒素休克 ,并应用相应药物 (B组以生理盐水代替 )。观察各组大鼠的血压与淋巴细胞亚群的变化。结果 :除A组外 ,其余 5组大鼠的血压均明显下降 ,但三个用药组下降的程度低于其他组。T细胞亚群中 ,CD3 各组间无明显差异 ;B、C组的CD4、CD8低于A组 ,而三个用药组均高于B组 ,并与A组接近 ;E、F组的CD4/CD8比值高于B组 ,并与A组接近。提示 ,调整淋巴细胞亚群含量和比值 ,可能是牛珀至宝丹、鸡卵黄免疫球蛋白抗内毒素休克的作用机理之一 。

脑力智宝对老年性痴呆的影响

目的 探讨脑力智宝对老年性痴呆(AD)的影响。方法 将91例AD患者随机分为脑力智宝治疗组(46 例)和石杉碱甲对照组(45例)。观察两组治疗前后临床疗效,检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化 氮(NO)等的变化情况。结果 治疗组总疗效与对照组比较无显著差异,在远近记忆力、语言理解、时空定向及命 令服从方面,治疗组计分治疗后显著提高,对照组仅远近记忆力有改善。治疗组在治疗后SOD上升、MDA和NO下 降,均具显著性意义,而对照组仅MDA变化有统计学意义,差值比较,治疗组SOD、MDA的改变较对照组明显。结论 脑 力智宝可促进AD患者智能的康复,提高生活质量,其近期疗效可能优于对照组。

至宝咳喘胶囊的质量标准研究

目的:建立至宝咳喘胶囊的质量控制标准。方法:采用薄层色谱法(TLC)鉴别至宝咳喘胶囊中的栀子、黄芩、陈皮;采用高效液相色谱法(HPLC)测定栀子苷的含量。结果:薄层鉴别斑点清晰;栀子苷平均加样回收率为99.5%,RSD=1.03%。结论:所建立的方法操作简便、重复性好,可作为至宝咳喘胶囊的质量控制标准。

小儿至宝丸中朱砂和雄黄的含量测定

目的:建立小儿至宝丸中朱砂和雄黄的含量测定方法。方法:分别采用原子吸收分光光度法(AAS)和电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)测定小儿至宝丸朱砂中的汞和雄黄中的砷含量。结果:AAS法测定的汞的线性范围为5~100Rg·ml^(-1)(r=0.999 9),砷的线性范围为2~50μg·ml^(-1)(r=0.9992),汞的平均回收率为99.3%,RSD为3.0%(n=6),砷的平均回收率为104.5%,RSD为2.1%(n=6);ICP-AES法测定的汞的线性范围为0.1~20.0μg·ml^(-1)(r=0.99997),砷的线性范围为0.1-20.0μg·ml^(-1)(r=0.99999),汞的平均回收率为96.6%,RSD为1.4%(n=6),砷的平均回收率为104.1%,RSD为1.1%(n=6)。结论:本文建立的方法准确、专属性强,可用于控制小儿至宝丸中毒性成分的含量。

脑力智宝对学习记忆障碍模型小鼠的保护作用

【目的】观察脑力智宝对学习记忆障碍模型小鼠的保护作用。【方法】(1)选用NIH小鼠32只随机分成假手术组,模型组,脑力智宝低、高剂量组(剂量分别为4、8.gkg-1·d-1);除假手术组外,其他各组小鼠均进行脑缺血再灌注损伤造模,中药组小鼠连续灌胃给药10 d后,采用跳台法观察小鼠的学习记忆能力,检测脑组织中丙二醛(MDA)与一氧化氮(NO)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力,高效液相色谱法检测大脑皮质中游离氨基酸的含量。(2)9月龄NIH小鼠40只随机分成正常对照组,拟衰老模型组,脑力智宝低、高剂量组(剂量分别为4、8.gkg-1.d-1);除正常对照组外,其他组均腹腔注射50 g/L D半-乳糖0.5 mL连续6周,复制拟衰老模型,同时灌胃给药连续6周后,采用跳台法测试小鼠的学习记忆功能,检测大脑皮质单胺类神经递质去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)及5-羟色胺(5-HT)的合成前体物质色氨酸(TP)的含量。【结果】(1)脑力智宝能显著提高脑缺血再灌注损伤小鼠的记忆能力(P<0.01),降低小鼠脑组织中MDA、NO、谷氨酸(G lu)的含量(P<0.05),提高SOD及GSH-Px的活力(P<0.05或P<0.01)。(2)脑力智宝能显著改善拟衰老模型小鼠的学习记忆能力(P<0.05或P<0.01),提高大脑皮质NE、E及TP的含量(P<0.05或P<0.01)。【结论】脑力智宝可以通过提高机体抗氧化酶活性,清除自由基,抑制兴奋性氨基酸与NO的神经毒性作用,调节大脑皮质单胺类神经递质含量等多种途径改善学习记忆功能。

牛珀至宝微丸对局灶性脑缺血后大鼠脑组织一氧化氮合酶的影响

目的 :探讨牛珀至宝微丸对大鼠局灶性脑缺血后脑组织一氧化氮合酶 (NOS)的作用。方法 :采用大脑中动脉线栓法造成局灶性脑缺血模型 ,应用免疫组织化学技术检测脑组织NOS 3种亚型 (eNOS、nNOS、iNOS)的表达 ,观察牛珀至宝微丸对脑缺血后NOS 3种亚型表达的影响 ,并进行神经病学评分。结果 :牛珀至宝微丸组的缺血侧大脑皮层nNOS、iNOS表达显著低于缺血对照组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,eNOS表达高于缺血对照组 (P <0 0 5 ) ,并可减轻神经损伤症状 (P <0 0 5 )。结论 :牛珀至宝微丸能下调脑缺血所致nNOS、iNOS的异常表达 ,上调eNOS表达 ,这可能是其治疗缺血性脑血管病的机理之一。

新旧配方张裕至宝三鞭酒对维甲酸致小鼠骨质疏松的防治作用

目的:观察新、旧配方张裕至宝三鞭酒对维甲酸所致小鼠骨质疏松动物模型的影响。方法:将50只小鼠随机分成正常组、模型组、旧方组、新方小剂量组、新方大剂量组5组,每组10只。造模后各给药组给予相应药物14 d,正常组和模型组灌胃相同体积蒸馏水,每周称体重1次。第15天检测各组小鼠血清钙、磷和碱性磷酸酶含量;取肝、脾、胸腺称重,计算脏器指数;取右侧股骨,测长度、横径后烘干称重,计算股骨重量指数。结果:至宝三鞭酒新、旧配方均能减轻小鼠的肝脏、胸腺萎缩程度及脾脏肥大程度,升高血钙水平,降低血清碱性磷酸酶水平,显著增加股骨长度及横径数值。结论:张裕至宝三鞭酒新、旧配方均能对抗维甲酸造成的小鼠骨质疏松,其中以新方大剂量作用最为显著。

牛珀至宝微丸对脓毒血症大鼠自由基和肝组织形态学的影响

为探讨牛珀至宝微丸 (主药 :水牛角、羚羊角、琥珀等 )对脓毒血症的防治作用。采用盲肠结扎术造成SD大鼠重度脓毒血症模型 ,在造模前连续 5d予牛珀至宝微丸治疗 ,并与鸡卵黄免疫球蛋白 (IgY)治疗组比较。检测血清SOD、MDA ;电镜下观察肝脏组织形态学变化。结果 :牛珀至宝微丸、IgY均能提高SOD活性、降低MDA含量 ;并能保护肝细胞线粒体及内织网。提示 ,牛珀至宝微丸和IgY对实验性动物脓毒血症有一定的防治作用 ,其机理可能与其有较强的清除超氧阴离子 ,抑制脂质过氧化有关。