液质联用技术鉴定至宝三鞭丸化学成分

目的建立HPLC-LTQ-Orbitrap MS和HPLC-QQQ MS/MS法分析至宝三鞭丸化学成分。方法采用分段供试品制备的前处理方式、高分辨质谱数据依赖的采集模式、HPLC-MS/MS靶向成分采集等综合研究策略鉴定成分。分析采用Waters BEH HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm);流动相0.1%甲酸水-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温30℃;电喷雾离子源(ESI);正负离子扫描。结果共鉴定出82个化合物,包括有机酸类18个、黄酮类17个、萜类及皂苷类11个、色原酮类8个、苯乙醇苷类4个、生物碱类3个、香豆素类3个、木脂素类2个、蒽醌类2个,其中30个通过与对照品保留时间及碎片离子信息比对而确认。结论本研究初步鉴定了至宝三鞭丸化学成分,为该制剂质量控制、作用机制研究提供了有力的支撑。

至宝三鞭丸基于Nrf2/HO-1通路的抗疲劳作用机制研究

目的通过观察至宝三鞭丸(Zhibao Sanbian Pills)对Nrf2/HO-1信号通路的影响,研究其对小鼠的抗疲劳作用及机制。方法将ICR小鼠随机分为正常对照组、至宝三鞭丸低剂量(0.958 g·kg^(-1))组、至宝三鞭丸中剂量(4.79 g·kg^(-1))组、至宝三鞭丸高剂量(9.58 g·kg^(-1))组,每组25只,连续给药35 d,记录体质量。采用负重游泳实验评价至宝三鞭丸的抗疲劳作用;比色法检测各组小鼠血清中的尿素氮(Urea nitrogen,UN)和乳酸(Lactic acid)水平;比色法检测各组小鼠肝组织中的糖原(Liver glycogen)含量;Western Blot检测各组小鼠肝组织中核因子红细胞2相关因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、核孔糖蛋白62(Sequestosome 1,P62/SQSTM1)、血红素加氧酶1(Heme oxygenase-1,HO-1)和醌氧化还原酶1(Quinone oxidoreductase 1,NQO1)的蛋白表达水平。结果与正常对照组比,至宝三鞭丸各剂量组可不同程度延长小鼠负重游泳时间,提高肝脏组织中糖原含量,下调血清中尿素氮水平,其中至宝三鞭丸高剂量(9.58 g·kg^(-1))组的差异具有统计学意义(均P<0.05);至宝三鞭丸虽具有降低乳酸堆积的作用趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);此外,至宝三鞭丸各剂量组均可提高肝组织中Nrf2、P62、HO-1和NQO1的蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论至宝三鞭丸具有明显的抗疲劳作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路,从而提高机体的抗氧化能力有关。

基于高效液相色谱指纹图谱和化学模式识别的至宝三鞭丸质量一致性评价

目的 建立至宝三鞭丸的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并结合化学模式识别技术对不同批次制剂进行质量一致性评价。方法 采用HPLC法建立指纹图谱,以0.1%甲酸水和甲醇为流动相进行梯度洗脱,色谱柱为BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm),流速为0.2 mL·min^(-1);检测波长为203 nm;使用相似度评价、聚类分析和主成分分析等化学模式识别技术评价15批次至宝三鞭丸制剂的质量一致性。结果 在指纹图谱中,共标定了32个共有峰,其中5个色谱峰被指认为芍药苷、远志[口山]酮Ⅲ、丹皮酚、淫羊藿苷和蛇床子素。15批次至宝三鞭丸制剂相似度为0.841~0.979,15批次至宝三鞭丸制剂基本聚为一类,表明至宝三鞭丸的质量一致性尚可。结论 本研究建立的HPLC指纹图谱分析方法操作简单、准确、重复性好,结合化学模式识别分析可用于至宝三鞭丸整体质量的一致性评价。

至宝三鞭丸对腺嘌呤诱导的肾阳虚证大鼠模型的改善作用研究

目的:以腺嘌呤诱导大鼠肾阳虚证模型为研究对象,观察至宝三鞭丸对肾阳虚证大鼠的改善作用。方法:选取SD大鼠,在末次给药2 h后,测定各组大鼠体质量,检测大鼠睾丸系数、附睾系数、精囊腺系数等;显微观察大鼠精子数目,形态和活力;酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定血清中雌二醇(E2)、睾酮(T)、促卵泡素(FSH)、黄体生成素(LH)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)水平;苏木精-伊红(HE)染色法观察肾脏、睾丸和附睾组织病理形态变化;Masson染色法观察肾脏组织的纤维化水平。结果:与正常组比较,至宝三鞭组大鼠肾阳虚症状改善,大鼠体质量、睾丸系数、附睾系数,精囊腺系数增加;大鼠精子数目增多;精子畸形率降低,精子活力增强;肾脏、睾丸、附睾等生殖器官的病理改变减少;肾脏的纤维化水平降低;并且至宝三鞭丸能够使E2、FSH、LH、DA、NE和5-HT等含量降低;同时还能够使T含量升高。结论:至宝三鞭丸可基于对下丘脑-垂体-性腺轴的调控改善腺嘌呤致肾阳虚证模型大鼠的肾阳虚症状,呈现出良好的补肾助阳功效。

基于行为学实验和网络药理学的至宝三鞭丸改善小鼠学习记忆能力作用研究

目的研究至宝三鞭丸对学习记忆障碍模型小鼠学习记忆能力的改善作用,探讨其作用机制。方法采用东莨菪碱诱导小鼠学习记忆障碍模型,采用Morris水迷宫实验、跳台实验和避暗实验评价小鼠学习记忆能力。采用TCMSP、TCMID数据库及文献检索至宝三鞭丸组方药物的化学成分,通过ADMETlab 2.0筛选潜在活性成分,利用Swiss Target Prediction数据库进行靶点预测,通过Metascape数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析,并构建PPI网络,进行MCODE模块分析。结果与模型组比较,至宝三鞭丸高剂量组小鼠水迷宫实验逃避潜伏期缩短(P<0.05),第四象限停留时间和穿越平台次数增多(P<0.05)。获得至宝三鞭丸组方药物863个活性成分,401个潜在靶点,至宝三鞭丸改善认知障碍的作用通路涉及神经活性配体-受体通路、钙离子信号通路、Ras相关蛋白-A(Rap1)信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号传导通路、5-羟色胺受体通路等。结论高剂量的至宝三鞭丸可改善学习记忆障碍模型小鼠学习记忆能力,其作用机制可能与调节MAPK信号通路等多条神经功能相关的信号通路有关。