Effect on serum metabolomics of rats with premature ovarian insufficiency by Zhibian(BL54) through Shuidao(ST28) acupuncture

OBJECTIVE:To analyze the serum metabolic targets of the"Zhibian(BL54)through Shuidao(ST28)"acupuncture technique in cyclophosphamide(CTX)-induced premature ovarian insufficiency(POI)model rats and to elucidate the potential molecular mechanism of acupuncture in improving POI.METHODS:We used an intraperitoneal injection of CTX to establish the POI rat model(POI group)and compared serum hormone levels and ovarian histopathological changes to evaluate the effect of the Zhibian(BL54)through Shuidao(ST28)technique(ZS+POI group)on ovarian function.Then,nontargeted metabolomics was performed using rat serum by ultra-performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry(UPLC-Q-TOF/MS).RESULTS:After acupuncture intervention,the serum hormone levels and ovarian pathological morphology of POI rats were effectively improved.Moreover,UPLC-Q-TOF/MS results showed that the ZS+POI group showed a significant reversal of the levels of 6 differential metabolites.Among them,the levels of four serum metabolic markers,divanillyltetrahydrofuran ferulate,trans-ferulic acid,tryptamine,and neuraminic acid,increased significantly.Further analysis of biological effects showed that all metabolites were involved in the regulation of reproductive hormone levels and antioxidant and antiapoptotic effects.CONCLUSIONS:The"Zhibian(BL54)through Shuidao(ST28)"acupuncture method may improve the ovarian function of POI rats by regulating serum metabolite markers to exert antioxidant and antiapoptotic effects,which provides a theoretical basis for the clinical application of acupuncture in the treatment of POI.

“秩边透水道”针刺对弱精子症小鼠睾丸内外凋亡途径关键因子的影响

目的 观察“秩边透水道”针刺对弱精子症模型小鼠生殖功能的影响,并探讨可能作用机制。方法将42只C57BL/6雄性小鼠随机分成空白组、模型组和针刺组各14只。模型组和针刺组小鼠给予环磷酰胺30 mg/(kg·d)腹腔注射7天建立弱精子症小鼠模型,空白组腹腔注射7天0.9%氯化钠溶液10 ml/(kg·d)。造模成功后,针刺组小鼠给予“秩边透水道”针刺,每日1次,每次20 min,每周6次,共3周;其余两组只进行固定而不针刺。日常观察各组小鼠的一般情况,并记录干预前后体质量变化。干预结束次日每组随机取6只雄鼠检测精子质量以及睾丸、附睾质量并计算相应指数;ELISA法检测血清中睾酮(T)、促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成激素(LH)含量;HE染色和TUNEL染色观察睾丸和附睾病理组织形态和细胞凋亡情况;荧光定量PCR法和Western blot法分别检测睾丸组织死亡相关因子(Fas)、Fas相关死亡域蛋白(FADD)、B淋巴细胞瘤2 (Bcl-2)、B淋巴细胞瘤2关联X的蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶3 (Caspase-3)mRNA和蛋白表达变化。将每组剩余的8只雄鼠与处于动情周期的同品系雌鼠进行1∶1合笼,检测合笼后每组小鼠的妊娠率和每胎胚胎数量。结果 与空白组比较,模型组小鼠体重减轻,睾丸质量、睾丸指数、附睾质量和附睾指数下降,精子总数、精子活力和精子活率下降,血清T、FSH和LH含量下降,细胞凋亡率升高,Fas、FADD、Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平提高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01),睾丸组织和附睾组织病理形态异常,生精小管排列紊乱,管腔内生精细胞数量减少;合笼后雌鼠的妊娠率和每胎胚胎数量降低(P<0.01)。与模型组比较,针刺组小鼠睾丸质量、睾丸指数、附睾质量、附睾指数、精子总数、精子活力和精子活率均提高,血清T、FSH和LH含量提高,细胞凋亡量降低,Fas、FADD、Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平降低,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平提高(P<0.05或P<0.01),睾丸组织和附睾组织形态改善,生精小管排列紧密,管腔内生精细胞数量增加;合笼后雌鼠的妊娠率和每胎胚胎数量提高(P<0.01)。结论 “秩边透水道”针刺可以改善弱精子症模型小鼠睾丸组织细胞凋亡,提高生殖功能,其机制可能与调节睾丸组织外在膜受体途径(Fas介导的途径)和内在线粒体途径(Bcl-2/Bax调控的途径)的关键因子有关。

“秩边透水道”针刺对卵巢低反应小鼠PI3K/AKT/FOXO3a通路的影响

目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/叉头蛋白O3a(FOXO3a)通路观察“秩边透水道”针刺对卵巢低反应(POR)小鼠卵巢功能的保护作用,探析针刺抑制POR卵巢颗粒细胞凋亡的可能机制。方法:将动情周期规律的45只小鼠随机分成空白组、模型组和针刺组,每组15只。模型组和针刺组小鼠予雷公藤多苷混悬液(50 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃2周制备POR模型。造模成功后针刺组小鼠予“秩边透水道”针刺干预连续2周,每日1次,每次20 min。干预结束次日开始促排卵,各组促排卵后完成取材。采用阴道脱落细胞涂片观察小鼠动情周期变化,记录小鼠取卵数、卵巢湿重、末次体质量与卵巢指数;ELISA法检测小鼠血清抗缪勒管激素(AMH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)含量;HE染色法观察小鼠卵巢组织形态;TUNEL染色法观察小鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR法检测小鼠卵巢组织PI3K、AKT、FOXO3a mRNA表达;Western blot法检测卵巢组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)关联X的蛋白(BAX),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠动情周期紊乱率升高(P<0.01);与模型组比较,针刺组小鼠动情周期紊乱率降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠取卵数、卵巢湿重、卵巢指数和末次体质量降低(P<0.01);与模型组比较,针刺组小鼠取卵数、卵巢指数和卵巢湿重升高(P<0.01,P<0.05),末次体质量比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组小鼠血清FSH、LH含量升高(P<0.01),血清AMH、E2含量降低(P<0.01);与模型组比较,针刺组小鼠血清FSH、LH含量降低(P<0.01,P<0.05),血清AMH、E2含量升高(P<0.01,P<0.05)。与空白组比较,模型组小鼠卵巢组织各级正常发育卵泡数量减少且形态较差,各级闭锁卵泡增多;与模型组比较,针刺组小鼠卵泡数量、形态和颗粒细胞结构有不同程度改善,各级闭锁卵泡减少。与空白组比较,模型组小鼠卵巢颗粒细胞凋亡率升高(P<0.01);与模型组比较,针刺组小鼠卵巢颗粒细胞凋亡率降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠卵巢组织FOXO3a mRNA及Caspase-3、BAX蛋白表达升高(P<0.01),卵巢组织PI3K、AKT mRNA及p-PI3K、p-AKT和p-FOXO3a蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较,针刺组小鼠卵巢组织FOXO3am RNA及Caspase-3、BAX蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),卵巢组织PI3K、AKT mRNA及p-PI3K、p-AKT、p-FOXO3a蛋白表达升高(P<0.01,P<0.05)。结论:“秩边透水道”针刺可以抑制POR小鼠卵巢颗粒细胞凋亡,改善卵巢功能,其机制可能与调节PI3K/AKT/FOXO3a通路中的关键因子有关。

“秩边透水道”针法源流探析及优势病谱

从芒针的历史沿革、秩边穴的争议和定位、操作方法的形成及要领3个方面对“秩边透水道”针法的源流进行梳理,对该针法现有的优势病谱归类,并从得气和起效的神经机制入手推测该针法潜在的优势病谱,阐述“秩边透水道”针法研究的不足,以期为该针法的全方位认识及进一步研究提供参考。

基于氧化应激探讨"秩边透水道"针法对早发性卵巢功能不全大鼠凋亡相关因子表达的影响

目的:从氧化应激角度探讨"秩边透水道"针法改善早发性卵巢功能不全(POI)的可能机制.方法:将60只SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、假针刺组、药物组、秩边透水道组,每组12只.除空白组外,其余大鼠采用腹腔注射环磷酰胺的方式制备POI大鼠模型.造模成功后,秩边透水道组针刺大鼠双侧"秩边",并刺向同侧"水道"方向,深约12 mm,留针30 min,每日1次,共4周;假针刺组用钝针头在"秩边"穴皮肤表面进行点按,不刺入皮下,每日1次,共4周;药物组给予戊酸雌二醇灌胃,共4周.干预结束后,采用荧光探针检测大鼠卵巢组织中活性氧自由基(ROS)水平;实时荧光定量PCR法和Western blot法检测大鼠卵巢组织中c-Jun氨基末端激酶(JNK)、叉头状转录因子1(FoxO1)、肿瘤抑制基因p53(p53)和p53上调凋亡调控因子(Puma)mRNA及蛋白表达情况.结果:与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织ROS水平,JNK mRNA、p-JNK蛋白和FoxO1、p53、Puma mRNA及蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,假针刺组大鼠卵巢组织ROS水平,p-JNK蛋白和JNK、FoxO1、p53、Puma mRNA及蛋白表达略低,但差异无统计学意义(P>0.05),秩边透水道组、药物组大鼠卵巢组织ROS水平,JNK mRNA、p-JNK蛋白和FoxO1、p53、Puma mRNA及蛋白表达降低(P<0.01).结论:"秩边透水道"针法可以改善POI模型大鼠体内氧化应激水平,下调氧化应激引发的促凋亡相关因子JNK、FoxO1、p53、Puma表达,抑制卵巢颗粒细胞凋亡引发卵巢储备功能过早衰竭.

“秩边”透“水道”针刺对早发性卵巢功能不全大鼠死亡受体通路Fas/FADD/Caspase-8表达的影响

目的:基于死亡受体通路Fas/Fas相关死亡域蛋白(FADD)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(Caspase-8探讨“秩边”透“水道”针刺对早发性卵巢功能不全(POI)大鼠卵巢功能的影响及可能机制。方法:将48只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、药物组和针刺组,每组12只。除空白组外,其余各组大鼠均采用腹腔注射环磷酰胺制备POI模型。针刺组大鼠于造模后采用“秩边”透“水道”针刺干预4周,每日1次,每次30 min;药物组予戊酸雌二醇片(0.09 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃4周。比较各组大鼠一般情况和动情周期;采用ELISA法检测大鼠血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌二醇(E2)水平,HE染色法观察大鼠卵巢组织形态,免疫组化法和Western blot法检测大鼠卵巢组织Fas、FADD、Caspase-8蛋白表达。结果:造模后,除空白组外,其他各组大鼠毛发干焦、脱毛,精神萎靡,进食减少,小便增多,大便稀软不成形;干预后,针刺组、药物组大鼠大便逐渐成形。干预后,与空白组比较,模型组大鼠动情周期紊乱率升高(P<0.01);与模型组比较,针刺组、药物组大鼠动情周期紊乱率降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠体质量和血清E2水平降低(P<0.01),血清FSH、LH水平和卵巢组织Fas、FADD、Caspase-8蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,针刺组、药物组大鼠体质量和血清E2水平升高(P<0.01),血清FSH、LH水平和卵巢组织Fas、FADD、Caspase-8蛋白表达降低(P<0.01)。结论:“秩边”透“水道”针刺可有效改善POI大鼠卵巢功能,其机制可能为调节POI大鼠血清性激素水平,降低卵巢组织Fas、FADD、Caspase-8表达水平,减缓卵巢细胞凋亡。

秩边透水道为主针刺治疗多囊卵巢综合征疗效观察

目的：比较秩边透水道为主针刺与常规针刺治疗多囊卵巢综合征的疗效差异。方法：将101例患者按照随机数字表法随机分为观察组（49例）和对照组（52例）。观察组选取秩边透水道为主穴,并随证配穴,采用长175mm的芒针与矢状面呈20°夹角的方向刺入秩边穴,进针深度100~115mm,透达水道穴,使针感直达病所;对照组与观察组取穴相同予以常规针刺法。两组患者均不分月经前后及经期与否,连续针刺治疗,每日治疗1次,15次为一疗程,连续治疗5个疗程。观察两组患者治疗前后基础体温情况、性激素水平,并比较两组临床疗效。结果：观察组痊愈率为65.3%（32/49）,有效率为91.8%（45/49）,明显优于对照组的48.1%（25/52）、63.5%（33/52）（均P〈0.01）。观察组基础体温典型双相及不典型双相例数均多于对照组,单相例数少于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;观察组治疗后卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、LH/FSH、睾酮（T）均明显下降（P〈0.01,P〈0.05）,对照组治疗后LH、T亦明显降低（P〈0.01,P〈0.05）,观察组治疗后FSH、LH、LH/FSH、T较对照组降低明显（P〈0.05,P〈0.01）。结论：秩边透水道为主针刺能明显改善多囊卵巢综合征患者的基础体温,调节生殖内分泌激素水平,其疗效均优于常规针刺。

芒针针刺秩边、水道对脊髓损伤患者尿潴留的影响

目的:比较芒针与毫针治疗脊髓损伤后尿潴留的临床疗效。方法:将66例脊髓损伤后尿潴留患者随机分为芒针组(34例)和毫针组(32例)。两组患者均采用骨科常规治疗和膀胱功能训练,芒针组采用芒针针刺秩边、水道穴,毫针组采用毫针针刺秩边和水道穴,两组针刺均隔日1次,共治疗2个月。分别于治疗前、治疗1个月和2个月后观察两组患者的残余尿量、尿动力学指标(膀胱容量、最大尿流速、膀胱压力)和安全性指标,并比较两组临床疗效。结果:与治疗前比较,两组在治疗1个月和2个月后,膀胱残余尿量明显减少(均P<0.01),膀胱容量、最大尿流速、膀胱压力明显改善(均P<0.01);在治疗1个月和2个月时,芒针组患者的残余尿量均低于毫针组(均P<0.01),芒针组患者膀胱容量、最大尿流速、膀胱压力的改善均优于毫针组(均P<0.01)。芒针组总有效率为94.1%(32/34),高于毫针组的71.9%(23/32,P<0.01)。两组患者在治疗中均未出现肾功能损害,无晕针或断针现象出现。结论:芒针在治疗脊髓损伤后尿潴留方面疗效优于毫针针刺,且具有安全性。

“秩边透水道”针法治疗女性压力性尿失禁:随机对照研究

目的:观察“秩边透水道”针法对女性压力性尿失禁患者生活质量的影响。方法:将90例女性压力性尿失禁患者随机分为观察组和对照组,每组45例。观察组采用“秩边透水道”针法,对照组采用不透皮假针刺秩边,两组均留针30 min,每日1次,共治疗10次。于治疗前后及治疗后1个月随访时记录两组患者尿失禁生活质量问卷(I-QOL)评分,分别采用1 h尿垫试验及72 h排尿日记卡评估两组患者1 h漏尿量及24 h漏尿次数。结果:治疗后及随访时观察组患者I-QOL评分均较治疗前升高(P<0.05),且明显高于对照组(P<0.05);治疗后及随访时观察组患者1 h漏尿量及24 h漏尿次数均较治疗前减少(P<0.05),且少于对照组(P<0.05)。结论:“秩边透水道”针法能提高女性压力性尿失禁患者生活质量,改善其漏尿量及漏尿次数。