周络通对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经功能影响

目的 :研究周络通 (黄芪 ,桂枝 ,当归 ,生地 ,细辛等 )对链脲佐菌素 (STZ)糖尿病大鼠坐骨神经功能和多元醇代谢通路的影响。方法 :动物ig给药 ,连续 8周 ,观察药物对链脲佐菌素糖尿病大鼠坐骨神经形态学改变、神经传导速度、坐骨神经Na+,K+ ATP酶和醛糖还原酶活性及山梨醇、肌醇、果糖、葡萄糖、甘露糖等多元醇含量的影响。结果 :周络通对链脲佐菌素糖尿病大鼠坐骨神经形态学改变有明显保护作用 ,坐骨神经传导速度明显性提高 ,Na+,N+ ATP酶活性增强、醛糖还原酶活性降低 ,山梨醇、葡萄糖含量降低。结论 :周络通可改善糖尿病大鼠周围神经组织的代谢 ,改善神经组织功能 ,对STZ糖尿病大鼠周围神经病变具有防治作用。

周络通对糖尿病大鼠周围神经形态学改变及神经生长因子含量的影响

目的观察周络通对糖尿病大鼠周围神经形态学改变及神经生长因子(NGF)含量的影响。方法采用链脲佐菌素糖尿病大鼠(STZ-D)模型,灌胃给药8周,锇酸染色观察坐骨神经形态变化,用ELISA法测定糖尿病大鼠血清中的NGF含量,用免疫组化法测定神经组织中NGF含量。结果周络通对糖尿病大鼠坐骨神经形态学改变有明显保护作用;对血清NGF含量减少有明显提高作用;对坐骨神经组织中NGF的含量虽无明显影响,但对坐骨神经轴突内NGF的减少有明显的提高作用。结论周络通对糖尿病大鼠周围神经病变具有保护作用,对血清和坐骨神经轴突内NGF的减少具有明显的提高作用。

糖尿病周围神经病变小鼠神经生长因子及其受体的变化及周络通胶囊的干预作用

目的观察糖尿病周围神经病变(DPN)小鼠神经生长因子(NGF)及其受体的变化及周络通胶囊的干预作用。方法 40只KK/Upj-Ay小鼠随机分为模型组、周络通胶囊高、中、低剂量组(6.85,3.43,1.71 g生药.kg-1),另设10只C57BL/6小鼠对照组。灌胃给药12周,测定运动神经传导速度(MNCV);荧光定量PCR和Western blot法测定坐骨神经NGF、高亲和力受体Trk A、低亲和力受体p75NTR表达。结果模型组与对照组比较,MNCV明显下降(P<0.01),NGF、Trk A、p75NTR表达明显下降(P<0.01);与模型组比较,周络通组能提高MNCV(P<0.05,P<0.01);升高NGF、Trk A、p75NTR表达(P<0.05,P<0.01)。结论周络通胶囊对DPN小鼠有保护作用,与升高NGF及其受体TrkA、p75NTR表达有关。

周络通胶囊对糖尿病周围神经病变小鼠坐骨神经TGF-β1/Smad3信号通路的影响

目的观察周络通胶囊(黄芪、桂枝、当归、生地、细辛等)对糖尿病周围神经病变小鼠坐骨神经TGF-β1/Smad3信号通路的影响。方法 40只KK/Upj-Ay小鼠随机分为模型组、周络通胶囊高、中、低剂量组(6.85、3.43、1.71 g生药/kg),另设10只C57BL/6小鼠对照组。灌胃给药12周,测定运动神经传导速度;荧光定量PCR和West-ern blot法测定坐骨神经转化生长因子-β1(TGF-β1)、受体I(TGF-βRI)、受体II(TGF-βRII)及Smad3表达。结果模型组与对照组比较,运动神经传导速度明显下降(P<0.01),TGF-β1、TGF-βRI、TGF-βRII及Smad3表达明显上升(P<0.01);与模型组比较,周络通组能提高运动神经传导速度(P<0.05,P<0.01),降低TGF-β1、TGF-βRI、TGF-βRII及Smad3表达(P<0.05,P<0.01)。结论周络通胶囊能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,改善糖尿病周围神经病变小鼠功能。

周络通胶囊激活转录因子Nrf2抑制糖尿病周围神经病变小鼠氧化应激

目的观察周络通胶囊激活转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)对糖尿病周围神经病变小鼠氧化应激的影响。方法 KK/Upj-Ay小鼠随机分为模型组、周络通胶囊高、中、低剂量组,另设C57BL/6小鼠对照组。灌胃给药12周,测定坐骨神经传导速度(MNCV)、空腹血糖(FBG)及糖化血红蛋白(HbA1c);比色法测定血液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)含量;荧光定量PCR测定坐骨神经Nrf2、血红素氧合酶-1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)mRNA的表达;Western blot测定坐骨神经总Nrf2、核内Nrf、HO-1、γ-GCS蛋白的表达。结果周络通能明显提高MNCV、SOD、GSH-Px、CAT,降低FBG、HbA1c、MDA;周络通组核内Nrf2蛋白表达明显上升;Nrf2 mRNA和总Nrf2蛋白表达在各组无差异;能升高HO-1、γ-GCS mRNA和蛋白表达。结论周络通胶囊通过促进Nrf2核转位发挥其抗DPN小鼠氧化应激损伤的作用。

周络通提取物Z-6对高糖所致Schwann细胞损伤和PI3K/Akt/nNOS通路的影响

目的:探讨磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/神经元型一氧化氮合酶(PI3K/Akt/nNOS)信号通路在周络通提取物抗糖尿病周围神经病变中的作用。方法:将体外培养的雪旺(Schwann)细胞分为正常组(D-葡萄糖25 mmol/L)、高糖模型组(D-葡萄糖100 mmol/L)、周络通提取物活性部位5(Z-5)+高糖组、周络通提取物活性部位6(Z-6)+高糖组、周络通+高糖组和甲钴胺+高糖组。采用CCK-8试剂盒检测各组细胞的生存活性,相关试剂盒分析培养上清中NO含量和细胞内Ca2+-ATPase活性的变化,流式细胞仪分析细胞的凋亡情况,Western blotting方法检测Bcl-2、Bcl-xL、Bax、Bak和caspase-3蛋白表达及nNOS和Akt的磷酸化情况。利用PI3K和Akt的显性负性突变体瞬时转染Schwann细胞,探讨PI3K/Akt信号通路在周络通提取物抗糖尿病周围神经病变中的作用。结果:与模型组比较,周络通提取物Z-6能显著提高高糖损伤后Schwann细胞的存活率,提高NO分泌量并明显上调Bcl-2、Bcl-xL蛋白的表达及Akt、nNOS的磷酸化水平,同时显著降低细胞凋亡率及Bax、Bak、caspase-3蛋白的水平,利用PI3K的显性负性突变体(δp85)阻断nNOS的上游信号通路PI3K/Akt后,NO分泌量减少,但未对Z-6上调nNOS和Akt磷酸化的作用产生明显影响。结论:在高糖损伤条件下,周络通提取物Z-6上调nNOS蛋白磷酸化水平,促进抗凋亡因子的表达,抑制促凋亡因子及caspase-3关键蛋白酶的表达,降低Schwann细胞凋亡率,从而提高高糖损伤细胞的存活率,这些作用与PI3K/Akt/nNOS通路的关系有待进一步研究。

周络通胶囊对糖尿病周围神经病变小鼠坐骨神经糖基化终末产物及受体的影响

目的:观察周络通胶囊对糖尿病周围神经病变(DPN)小鼠的作用及对晚期糖基化终末产物(AGEs)及其受体的影响。方法:40只KK/Upj-Ay小鼠随机分为模型组、周络通胶囊高、中、低剂量组(6.85,3.43,1.71 g生药.kg-1),另设10只C57BL/6小鼠对照组。灌胃给药12周,观察一般情况,测定空腹血糖(FBG)及糖化血红蛋白(HbA1c);测定运动神经传导速度(MNCV);光镜及电镜观察坐骨神经形态学变化;荧光分光光度法测定坐骨神经中AGEs含量;荧光定量PCR和Western blot法测定坐骨神经AGEs受体(RAGE)表达。结果:周络通胶囊能不同程度改善模型小鼠症状,高剂量组能降低FBG和HbA1c(P<0.05,P<0.01);3组均能提高MNCV(P<0.05,P<0.01);减轻坐骨神经病理损伤;降低AGEs含量及RAGE mRNA和蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:周络通胶囊对DPN有明显的改善作用,其机制可能与降低周围神经AGEs形成、抑制RAGE表达有关。

周络通胶囊对糖尿病周围神经病变模型小鼠坐骨神经细胞凋亡的保护作用研究

目的:研究周络通胶囊对糖尿病周围神经病变模型小鼠坐骨神经细胞凋亡的保护作用。方法:40只KK/Upj-Ay小鼠随机分为模型(等容蒸馏水)组与周络通高、中、低剂量(6.85、3.43、1.71 g/kg)组,另取10只C57BL/6小鼠作正常对照(等容蒸馏水)组。灌胃给药,每天1次,连续3个月。检测小鼠坐骨神经传导速度(MNCV);测定小鼠空腹血糖(FBG)值、血液中糖化血红蛋白(HbA1c)含量;取小鼠坐骨神经,用流式细胞术测定细胞凋亡率;RT-PCR和Western blot法测定坐骨神经B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、凋亡相关因子(Fas)、Fas受体(FasL)mRNA和蛋白的表达。结果:与模型组比较,周络通高剂量组小鼠FBG、血液中HbA1c含量显著减少(P<0.01或P<0.05);周络通高、中、低剂量组小鼠坐骨神经MNCV显著增加,细胞凋亡率显著降低,坐骨神经Bax、Caspase-3、Fas mRNA表达与Bax蛋白表达显著减弱(P<0.01或P<0.05);周络通高、中剂量组小鼠坐骨神经FasL mRNA表达水平增强(P<0.01),Caspase-3、Fas、FasL蛋白表达显著减弱,Bcl-2蛋白表达显著增强((P<0.01或P<0.05));周络通高剂量组小鼠Bcl-2 mRNA表达显著增强(P<0.01)。结论:周络通胶囊对糖尿病周围神经有一定的保护作用,其机制与上调Bcl-2、Fas和FasL表达,下调Bax、Caspase-3表达,抑制细胞凋亡率有关。

HPLC-ELSD法测定周络通胶囊中知母皂苷BⅡ

目的建立HPLC-ELSD法测定周络通胶囊中知母皂苷BⅡ的方法。方法采用ESAquaSepC18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(24:76)为流动相,体积流量1.0mL/min;柱温30℃;ELSD检测器,漂移管温度为75℃,加热级别为66%,载气压力为172.4kPa。结果知母皂苷BII在0.62～7.79μg呈良好的线性关系,平均回收率为98.75%,RSD1.77%。结论该方法简便快捷、准确可靠,为周络通胶囊的质量控制提供了依据。