壮方壮肝逐瘀煎联合骨髓间充质干细胞移植对CCl4大鼠肝纤维化的影响

目的 探讨壮肝逐瘀煎联合骨髓间充质干细胞(bone marrow mensenchymal stem cell,BMMSC)移植对CCl4诱导的肝纤维化大鼠的影响。方法 取20只大鼠为正常对照组(A组),另取80只造模成功后的大鼠,随机分为模型组(B组)、单纯壮肝逐瘀煎组(C组)、单纯BMMSC组(D组)、壮肝逐瘀煎联合BMMSC组(E组),每组20只。A组、B组、D组灌服生理盐水(0.1 m L/kg,1次/d),C组、E组灌服壮肝逐瘀煎(0.1 mL/kg,1次/d),各组均连续干预12周。其中,第4周末,B组、C组尾静脉注射生理盐水,D组、E组尾静脉注射BMMSC。干预后,采用HE染色观察各组大鼠肝脏病理变化;采用全自动生化仪检测肝功能指标[谷草转氨酶(aspartate aminotransaminase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、白蛋白(albumin,ALB)]变化;采用RT-PCR检测肝组织甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、ALB、细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)mRNA;采用Western blot检测表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的表达;冷冻切片技术检测携带绿色荧光蛋白的BMMSC向肝脏归巢的情况。结果 B组肝小叶结构被广泛增生的纤维化组织分割并包绕成大小不等的圆形或类圆形的肝细胞团(即假小叶),肝细胞排列絮乱、坏死、变性及再生。C组、D组、E组肝小叶结构得到不同程度的恢复,肝细胞变性、水肿得到不同程度的改善。与A组比较,B组AST、ALT、TBIL明显升高(P<0.05),ALB和AFP、ALB、CK18 m RNA及HGF、EGF蛋白表达明显降低(P<0.05)。与B组比较,C组、D组、E组AST、ALT、TBIL明显降低(P<0.05),ALB和AFP、ALB、CK18 mRNA及HGF、EGF蛋白表达明显升高(P<0.05)。与E组比较,C组、D组AST、ALT、TBIL明显升高(P<0.05),ALB和AFP、ALB、CK18 mRNA及HGF、EGF蛋白表达明显降低(P<0.05)。免疫荧光结果显示,E组肝脏内携带绿色荧光蛋白数量明显高于A组、D组。结论 壮肝逐瘀煎联合BMMSC治疗可抗肝纤维化,可有效促进BMMSC向肝脏归巢,修复受损的肝组织。

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TβRⅠ/Ⅱ、Smad3、Smad4和Smad7表达的影响

目的:研究壮肝逐瘀煎对肝纤维化(HF)大鼠TβRⅠ/Ⅱ、Smad3、Smad4和Smad7表达的影响.方法:Wistar大鼠44只,随机取8只作为正常对照(A)组;余大鼠用CCl4复合因素法进行HF造模,wk4随机处死4只证实HF形成后随机分为病理模型(B)组、壮肝逐瘀煎治疗(C)组、秋水仙碱对照(D)组、大黄蟅虫丸对照(E)组.B组予生理盐水ig,C、D、E组予相应药液ig.6wk后获取肝组织,HE染色观察HF程度;用免疫组化、图像分析方法对TβRⅠ/Ⅱ、Smad3、Smad4、Smad7的组织分布进行半定量分析.结果:与B组比较,C、D、E组肝小叶结构趋于正常,肝组织TβRⅠ/Ⅱ、Smad3、Smad4表达显著减少(TβRⅠ:2.75±0.10,3.14±0.07,3.44±0.06vs5.47±0.13,P<0.01;TβRⅡ:1.86±0.12,2.09±0.10,2.53±0.12vs3.52±0.15,P<0.01;Smad3:2.28±0.59,3.84±1.11,3.97±0.90vs5.65±1.28,P<0.01;Smad4:1.57±0.53,3.15±0.79,3.37±0.78vs5.25±1.60,P<0.01),Smad7表达显著增加(3.45±0.58,2.09±0.38,1.75±0.29vs0.73±0.34,P<0.01),C组强于D、E组(P<0.01).结论:壮肝逐瘀煎能显著改善HF组织病理变化,其作用机制可能与壮肝逐瘀煎调控TβRⅠ/Ⅱ、Smad3、Smad4、Smad7的表达有关.

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠血清Fas/FasL表达的影响

目的观察壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠血清Fas/Fas L表达的影响,探讨该组方抗肝纤维化的作用机制。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组和治疗组,除空白组外其余大鼠均采用CCl4复合因素法制作肝纤维化大鼠模型,模型制作成功后,治疗组给予壮肝逐瘀煎灌胃,空白组及模型组仅予等容量生理盐水灌胃。10周末所有大鼠经股静脉采血后处死并获取肝组织,HE染色光镜观察肝组织结构变化,ELISA法测定血清Fas、Fas L水平。结果光镜观察空白组肝小叶完整、结构正常,造模组肝纤维化程度明显,治疗组肝纤维化程度较轻;ELISA测定显示治疗组大鼠血清Fas和Fas L水平显著低于模型组(P均<0.05)。结论壮肝逐瘀煎可有效治疗大鼠肝纤维化,其作用可能是通过下调Fas、Fas L的表达,抑制肝星状细胞凋亡而实现的。

壮肝逐瘀煎对模型大鼠肝Smads表达的影响

目的:研究壮肝逐瘀煎对肝纤维化(HF)大鼠Smad3、Smad4、Smad7表达的影响,探讨其抗HF的作用机制。方法:Wistar大鼠采用CCl4复合因素法进行肝纤维化造模。对HF大鼠予壮肝逐瘀煎灌胃治疗,并以秋水仙碱及大黄?虫丸为对照。6周后获取肝组织,苏木精-伊红染色观察HF的程度;免疫组织化学染色、图像分析方法对Smad3、Smad4、Smad7的组织分布进行半定量分析。结果:与病理模型组大鼠比较,壮肝逐瘀煎治疗组肝小叶结构趋于正常,纤维间隔明显变薄,肝组织Smad3、Smad4表达显著减少(P<0.01),Smad7表达显著增加(P<0.01)。结论:壮肝逐瘀煎能够显著改善HF大鼠肝组织的病理变化,具有明显的抗HF作用,其作用机制可能与壮肝逐瘀煎调控Smad3、Smad4、Smad7的表达有关。