壮通饮通过Nrf2-SCL7A11/xCT-Gpx4通路调控铁死亡改善脑缺血再灌注损伤

【目的】探究壮通饮通过Nrf2-SCL7A11/xCT-Gpx4通路调控铁死亡对大脑中动脉栓塞模型小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。【方法】将C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO)、低剂量壮通饮组(ZTY-L+MCAO),高剂量壮通饮组(ZTY-H+MCAO),每组5只。其中MCAO组采用硅胶线栓法进行造模,小鼠大脑中动脉栓塞1h,拔出线栓再灌注72h后进行心脏灌注取脑,Sham组除了不插入线栓其余操作同MCAO组。采用Zea-Longa法对小鼠神经功能进行评分;采用TTC染色评估小鼠脑梗死体积;采用HE染色、尼氏染色评估脑损伤程度;采用普鲁士蓝染色评价三价铁离子蓄积水平;qPCR检测铁离子转运相关载体受体TfR1和DMT1、脂质过氧化相关基因ACSL4以及铁死亡标志物PTGS2 mRNA表达;ELISA试剂盒检测4-HNE的含量评估小鼠大脑脂质过氧化水平;Western-blot、免疫荧光检测小鼠脑组织中Nrf2、SCL7A11/xCT、Gpx4蛋白水平。【结果】①壮通饮改善了MCAO/R后小鼠神经功能(P<0.05)和大脑梗死体积(P<0.05)及缓解MCAO/R后大脑皮层细胞病理损伤。②壮通饮减弱了MCAO/R后小鼠大脑组织的三价铁离子蓄积状态;减少MCAO/R后小鼠大脑中与铁离子转运入细胞内相关载体TfR1和DMT1 mRNA的表达(P<0.001);下调MCAO/R后小鼠大脑脂质过氧化物4-HNE含量和组织脂质过氧化物酶ACSL4 mRNA表达(P<0.001);降低MCAO/R后小鼠大脑铁死亡标志物PTGS2 mRNA表达(P<0.001)。③壮通饮增加MCAO/R后Nrf2入核表达(P<0.001),以及增加xCT和Gpx4在神经元中的表达(P<0.001)。【结论】壮通饮能够改善MCAO/R小鼠神经功能和脑梗死体积,缓解大脑皮层细胞病理损伤,影响Nrf2-SCL7A11/xCT-Gpx4通路关键信号分子表达,所以壮通饮改善小鼠MCAO/R损伤的作用机制可能是通过Nrf2-SCL7A11/xCT-Gpx4通路调节铁死亡水平达到的。

壮通饮对大鼠心肌缺血血瘀证内皮素1表达的影响

目的观察壮通饮对心肌缺血血瘀证大鼠血清及心肌组织内皮素1(endothelin-1,ET-1)表达的影响,探讨壮通饮对冠心病心肌缺血的保护作用机制。方法采用左冠状动脉结扎法制作大鼠心肌缺血血瘀证模型,并随机分为空白、假手术组、模型组、壮通饮低(6.8g/kg)、中(13.6g/kg)、高(27.2g/kg)剂量组、阳性对照组7个组,灌胃给药治疗4周后,分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和WB(Western blotting)法检测大鼠血清及心肌组织ET-1的表达。结果血清ELISA结果显示,与空白组、假手术组相比,模型组ET-1的表达明显升高(P<0.05),药物干预后,各组均可使ET-1降低,但中剂量组降低ET-1效果最明显(P<0.05)。WB检测结果显示,模型组ET-1的平均灰度值明显高于空白组、假手术组,药物干预后,各组均可使ET-1平均灰度值降低,但中剂量组降低效果最明显。结论壮通饮能减少心肌缺血血瘀证大鼠ET-1的表达,缓解血管收缩,对大鼠心肌缺血有一定的保护作用。

壮通饮对大鼠心肌缺血血瘀证血清炎症因子表达的影响

目的通过建立心肌缺血血瘀证大鼠模型,观察壮通饮对大鼠心肌缺血血瘀证血清炎症因子TNF-α、IL-6、IL-10表达的影响,探讨壮通饮对冠心病心肌缺血的保护机制。方法 SD雄性大鼠70只,随机分为空白组、假手术组、模型组、壮通饮(低、中、高剂量)组、复方丹参滴丸对照组(阳性药物组),每组10只。假手术组只开胸不结扎;造模组通过开胸结扎左冠状动脉前降支制作大鼠心肌缺血血瘀证模型。按照壮通饮低剂量组(6.8g·kg^(-1))、壮通饮中剂量组(13.6g·kg^(-1))、壮通饮高剂量组(27.2g·kg^(-1))、复方丹参滴丸对照组(80mg·kg^(-1))的用药量配成不同浓度等体积药液灌胃,余组给予等体积蒸馏水灌胃,每天1次,连续4周后,大鼠腹主动脉取血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清TNF-α、IL-6、IL-10表达水平,心肌HE染色。结果 ELISA结果显示,与空白组、假手术组相比,模型组TNF-α、IL-6、IL-10的表达明显升高(P<0.01),与模型组相比,壮通饮组、阳性药物组TNF-α、IL-6的表达明显降低(P<0.01),IL-10的表达明显升高(P<0.01),且中剂量组总体效果较好。HE染色结果显示,模型组心肌细胞溶解坏死,淡染明显,纤维组织增生,大量炎症细胞浸润;药物干预组心肌细胞损伤明显好转、炎症细胞浸润较少。结论壮通饮能减少冠心病缺血心肌炎症细胞浸润,降低血清致炎因子、升高抗炎因子的表达,对大鼠心肌缺血有一定的保护作用。

壮通饮对糖尿病肾病大鼠肾皮质CTGF、TGF-β_1、PAI-1、FN细胞因子mRNA表达的影响

目的实验性研究壮通饮对糖尿病肾病(DN)大鼠肾皮质结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子(TGF-β1)、血浆纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)、纤维连接蛋白(FN)细胞因子mRNA表达的影响,并探讨壮通饮对DN大鼠肾脏的保护作用机制。方法采用单肾切除术合并腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导制备DN大鼠模型,并随机分为空白对照组、假手术组、模型组、卡托普利西药组(1g/kg)和壮通饮低(6.8g/kg)、中(13.6g/kg)、高(27.2g/kg)剂量7个组。于实验给药治疗6周后,用荧光实时定量RT-PCR法检测大鼠肾皮质CTGF、TGF-β1、PAI-1、FN细胞因子mRNA的表达。结果壮通饮可以降低DN大鼠肾皮质CTGF、TGF-β1、PAI-1、FN细胞因子mRNA的表达。结论壮通饮能改善肾皮质CTGF、TGF-β1、PAI-1、FN细胞因子mRNA的表达,以减轻肾脏病理改变,对DN大鼠的肾脏具有一定的保护作用。

壮通饮对心血管作用的研究进展

总结近几年壮通饮验方及其各单味药对心血管作用的相关文献,从壮通饮的主要化学成分、对心肌的保护作用和抗心肌缺血作用、抗心律失常作用、降低血黏度和防止血栓形成4个方面总结其现代药理学研究的最新进展,为壮通饮验方治疗心血管疾病的研究提供了文献参考依据。

壮通饮对缺氧/复氧诱导的HUVEC/U251细胞屏障损伤的影响

目的:观察壮通饮(ZTY)对缺氧/复氧诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)和人星形细胞瘤U251细胞损伤模型的作用,探讨壮药保护血脑屏障的相关机制。方法:将8只SD大鼠随机分为4组:空白组(蒸馏水)及低、中、高剂量(3.74、7.48和14.96 g/kg)ZTY含药血清组,每天1次,连续7 d灌胃饲养,获取含药血清。将HUVEC和U251细胞共培养,构建缺氧/复氧诱导的体外细胞屏障损伤模型。将细胞分为5组:空白组、模型组及低、中、高剂量ZTY含药血清组。RT-qPCR定量检测各组HUVEC中基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP3、MMP9和内皮素1(ET-1)的mRNA表达水平;Western blot检测各组HUVEC中紧密连接蛋白(TJPs)和ET-1蛋白的表达水平。结果:与模型组比较,给药组的跨内皮细胞电阻显著增大(P<0.05),MMP2、MMP3、MMP9和ET-1的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),TJPs的表达水平显著升高(P<0.05),ET-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:ZTY通过上调TJPs、下调MMPs和ET-1表达而减轻缺氧/复氧对HUVEC/U251细胞屏障的损伤。

壮通饮对冠心病模型大鼠心功能及血管舒缩功能的影响

目的:观察壮通饮水提物对冠心病(CHD)模型大鼠心功能及血管舒缩功能的影响及其可能机制。方法:将SD大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、阳性组(复方丹参滴丸,0.08 g/kg)以及壮通饮水提物低、中、高剂量组(6.8、13.6、27.2 g/kg,以水提物浸膏质量计),每组10只。除对照组(不手术)和假手术组(只开胸不结扎)外,其余各组大鼠均通过结扎左心室回旋支末梢建立CHD模型。造模1周后,对照组、假手术组和模型组大鼠均灌胃等体积水,各给药组大鼠均灌胃相应药物;每日1次,连续4周。末次给药2 h后,检测各组大鼠心功能指标[左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)、每搏量(SV)、左室射血分数(LVEF)],采用酶联免疫吸附测定法检测其心肌组织炎症因子[C反应蛋白(CRP)、白细胞介素1β(IL-1β)、干扰素γ(IFN-γ)]和内皮素1(ET-1)水平,采用苏木精-伊红染色法观察其心肌组织形态学特征。结果:对照组和假手术组大鼠心肌纤维结构清晰、排列整齐,两组大鼠各项指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,模型组大鼠心肌纤维排列紊乱,可见断裂、溶解、坏死等现象,并伴有炎症细胞浸润,其LVEDV、LVESV以及CRP、IL-1β、ET-1、IFN-γ水平均显著升高,SV、LVEF均显著下降(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠上述症状均有不同程度的改善,其中阳性组大鼠LVEDV、LVESV和CRP、IL-1β、ET-1、IFN-γ水平,壮通饮水提物中、高剂量组大鼠LVEDV以及壮通饮水提物各剂量组大鼠LVESV和CRP、IL-1β、ET-1、IFN-γ水平均显著降低,阳性组大鼠SV、LVEF,壮通饮水提物各剂量组大鼠SV以及壮通饮水提物中、高剂量组大鼠LVEF均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:壮通饮水提物可通过作用于炎症环节而降低ET-1水平,从而改善CHD模型大鼠的血管舒缩功能,恢复其心肌组织血液供应,改善其心功能。

壮通饮对心肌缺血再灌注后心律失常影响的实验研究

目的:观察壮通饮水提物对心肌缺血再灌注模型大鼠血液流变学和血脂水平的影响,初步探讨该方减少缺血再灌注后心律失常发生的分子生物学基础。方法:取SD大鼠75只,随机分为对照组、模型组和壮通饮水提物低、中、高剂量组(6.8、13.6、27.2 g/kg),每组15只。通过结扎左心室回旋支末梢致缺血30 min和再灌注60 min,建立大鼠心肌缺血再灌注模型。术后第1天起,对照组、模型组大鼠均灌胃等体积水,壮通饮水提物各剂量组大鼠灌胃相应药液,每日1次,连续28 d。分别在术后第7、14、21、28天检测大鼠心律失常发生情况并计算发生率。给药结束后,检测大鼠血液流变学指标和血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量;采用苏木精-伊红染色法观察大鼠心肌组织形态学;采用Western blotting法检测大鼠心肌组织中凋亡相关因子FAS和FAS配体(FAS-L)的蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠心律失常发生率显著升高,全血比黏度、血细胞比容(HCT)、体外形成血栓长度和质量、血小板凝聚率、红细胞滤过指数(IF)以及血清TC、TG、LDL-C含量均显著增加或升高,体内血栓的形成时间显著缩短,血清HDL-C含量显著降低,心肌组织中FAS和FAS-L蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01);大鼠心肌组织形态学呈明显病理改变。与模型组比较,壮通饮水提物各剂量组大鼠心律失常发生率呈明显下降趋势;除壮通饮水提物低剂量组大鼠的HCT降低不具有统计学意义(P>0.05)外,其余给药组大鼠的全血比黏度、HCT、体外形成血栓的长度和质量、血小板凝聚率、IF值以及血清TC、TG、LDL-C含量均显著减少或降低,体内血栓的形成时间均显著延长,血清HDL-C含量均显著升高,心肌细胞中FAS和FAS-L蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01);大鼠心肌组织病理变化明显改善。结论:壮通饮可通过其活血化瘀作用改善心肌缺血再灌注模型大鼠的血液流变学指标,降低血清中TC、TG、LDL-C含量,提高HDL-C含量,并下调FAS和FAS-L蛋白表达,从而发挥抑制心肌细胞凋亡的作用,减少心律失常的发生。

壮通饮抑制NADPH氧化酶2对糖氧剥夺诱导星形胶质细胞损伤的保护作用

目的:探讨壮通饮对星形胶质细胞糖氧剥夺(OGD)损伤的保护作用,并从NADPH氧化酶2(NOX2)抑制途径探讨其保护作用发挥的机制。方法:原代培养星形胶质细胞,制成糖氧剥夺损伤模型,分为对照组、糖氧剥夺组、糖氧剥夺+壮通饮组(浓度20mg·L-1,40mg·L-1,80mg·L-1),糖氧剥夺+夹竹桃麻素组(浓度0.05mg·L-1、0.25mg·L-1、0.5mg·mL-1)。免疫荧光观察细胞纯度,CCK-8试剂盒测定细胞活力,Western Blot检测NOX2蛋白表达。结果:糖氧剥夺诱导星形胶质细胞损伤后复氧8h和24h,壮通饮(40mg·L-1、80mg·L-1和80mg·L-1)分别能提高星形胶质细胞活力。Western Blot显示壮通饮(20mg·L-1、40mg·L-1、80mg·L-1)和夹竹桃麻素(0.25mg·L-1、0.5mg·mL-1)均能抑制糖氧剥夺/再灌注后NOX2活性。结论:壮通饮可以抑制NOX2的活性,保护糖氧剥夺诱导的星形胶质细胞损伤。

壮通饮预处理对冠心病血瘀证大鼠AngⅡ,AT-1R,Cx43及其对再灌注损伤的影响

目的：观察壮通饮（Zhuangtongyin,ZTY）对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞的血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）,血管紧张素Ⅱ1型受体（AT-1R）,缝隙连接蛋白43（Cx43）mRNA表达水平和蛋白水平的影响,并探讨ZTY预处理在大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中对大鼠心肌细胞的保护机制。方法：采用随机分组的方法将SPF级SD大鼠分为空白组,假手术组（只穿线,不结扎）,模型组,壮通饮低、中、高剂量组（6.8,13.6,27.2 g·kg^-1）和复方丹参组（0.08 g·kg^-1）。连续灌药4周后,通过结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注60 min,建立冠心病血瘀证再灌注损伤模型,术中监测大鼠心电指标,记录心律失常发生情况,再灌注结束后,取下心脏组织,用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测大鼠心肌组织中AngⅡ,AT-1R,Cx43 mRNA的表达水平,用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠心肌组织中AT-1R,Cx43的蛋白表达水平。结果：壮通饮各剂量组和模型组比较均可以减少心肌缺血再灌注损伤模型大鼠心律失常的发生（P〈0.05）。与空白组、假手术组比较,模型组、壮通饮各剂量组、复方丹参组的AngⅡ,AT-1R mRNA表达均上调,Cx43 mRNA表达均下降（P〈0.05）。与模型组比较,壮通饮各剂量组、复方丹参组的AngⅡ,AT-1R mRNA表达均下降,Cx43 mRNA表达均上升,各剂量组之间,中剂量组AngⅡ,AT-1R mRNA下降,Cx43 mRNA表达上升最明显（P〈0.05）。壮通饮各剂量组与复方丹参组比较无统计学意义。空白组与假手术组比较,无显著性差异。与空白组、假手术比较,模型组、壮通饮各剂量组、复方丹参组的AT-1R蛋白表达均上调,Cx43蛋白表达均下降（P〈0.05）。与模型组比较,壮通饮各剂量组、复方丹参组的AT-1R蛋白表达均下降,Cx43蛋白表达均上升,各剂量组之间,中剂量组AT-1R蛋白下降,Cx43蛋白表达上升最明显（P〈0.05）。壮通饮各剂量组与复方丹参组对比无统计学意义。结论：ZTY对心肌缺血再灌注损伤有保护作用,降低再灌注心律失常的发生,其作用机制可能与壮通饮能调控AngⅡ-（AT-1R）-Cx43通路,导致Cx43表达上调有关。