朱砂及其复方对小鼠肝脏细胞色素P450酶基因表达的影响

目的研究朱砂及其复方朱砂安神丸对小鼠肝脏的急性毒性,并在此基础上探讨其对肝脏细胞色素P450酶基因表达的影响。方法小鼠随机分为空白对照组,朱砂安神丸高剂量组(20 g·kg-1ig)、朱砂安神丸低剂量组(10 g·kg-1ig)和朱砂组(0.3 g·kg-1ig),各组小鼠均早晨给药1次,8 h后断头处死小鼠,分别检测肝中汞蓄积量,肝功能,肝指数,并应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)的方法检测其对细胞色素P450酶基因表达的影响。结果与空白对照组相比,朱砂和朱砂安神丸组小鼠肝脏ALT和AST均有所增高,但差异无统计学意义;给药三组小鼠肝脏中汞蓄积量均有所增高,并呈现一定的剂量相关性,但无统计学意义;在对基因表达的影响方面,单次给药后,与空白对照组相比,朱砂组Cyp2 a4、Cyp2b9、Cyp 2 f2、Cyp8b的基因表达下降,Cyp3 a11和Cyp3 a44的基因表达增高:朱砂安神丸低剂量组Cyp2b9和Cyp2 f2的基因表达下降;各组对其他基因的表达情况无统计学意义。结论单次给药后,汞在小鼠肝脏中蓄积很少,对肝脏未造成明显损伤,但朱砂和朱砂安神丸对细胞色素P450酶的基因表达具有一定的诱导和抑制作用。

朱砂和朱砂安神丸对小鼠肝组织金属硫蛋白表达的影响

目的探讨朱砂及朱砂安神丸中汞对肝组织金属硫蛋白(MT)表达的影响。方法健康小鼠分别ig给予生理盐水、Hg S 0.2 g·kg-1、朱砂0.2和2 g·kg-1、朱砂安神丸1.8 g·kg-1、氯化汞(Hg Cl2)0.032 g·kg-1、甲基汞0.026 g·kg-1,每天1次,连续30 d,取肝组织。用原子荧光光谱法检测肝汞蓄积量,HE染色法观察肝组织病理变化,实时荧光定量PCR法检测肝组织Mt-1基因的表达,免疫组织化学和Western蛋白印迹法检测肝组织MT蛋白的表达,并分析肝汞蓄积量与肝组织Mt-1基因和MT蛋白表达的相关性。结果与正常对照组比较,Hg S、朱砂0.2 g·kg-1和朱砂安神丸组小鼠肝组织汞蓄积量未见明显增高,肝组织Mt-1基因和MT蛋白表达无明显变化,且未见明显病理改变。朱砂2 g·kg-1,Hg Cl2和甲基汞组小鼠肝汞蓄积量明显增高(P<0.05,P<0.01),分别为正常对照组的6.9,82.2和173.1倍;肝组织Mt-1mRNA表达明显增加(P<0.01),分别为正常对照组的3,11和45倍,同时MT蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01);肝组织可见肝细胞水肿,淋巴细胞浸润。肝汞蓄积量与Mt-1基因和MT蛋白表达水平具有正相关性。结论对比不同形式的汞,ig给予小鼠Hg S、朱砂和朱砂安神丸后肝组织汞蓄积量远低于氯化汞和甲基汞;朱砂0.2 g·kg-1和朱砂安神丸未导致肝组织Mt-1基因和MT蛋白表达水平的变化,肝组织亦未出现病理变化。

朱砂安神丸水煎剂对失眠大鼠睡眠时相的影响

目的探讨朱砂安神丸水煎剂对失眠大鼠睡眠时相的影响。方法在恒温、恒湿、自动光控及电磁屏蔽条件下,采用电刺激所致大鼠失眠模型和慢性电极埋植技术,描记其自由活动情况下皮层脑电图。给予实验动物不同剂量的朱砂安神丸水煎剂,分析给药前后失眠大鼠脑电图的变化,探讨朱砂安神丸水煎剂对失眠大鼠睡眠时相的影响。结果中、高剂量的朱砂安神丸水煎剂可明显减少失眠大鼠的觉醒耐间,延长失眠大鼠总睡眠时间。并且中剂量对失眠大鼠睡眠周期中的慢波睡眠1期(SWS_1期),高剂量对慢波睡眠2期(SWS_2期)有明显的延长作用。低剂量虽不能减少失眠大鼠的觉醒时间,但对SWS_2期有延长作用。结论朱砂安神丸水煎剂对失眠大鼠的睡眠有明显改善作用。

色谱系统显著变动对定量指纹图谱评价中成药质量的影响

目的考察在色谱系统显著变动条件下用系统指纹定量法（SQFM）对中成药进行评价产生的误差,并进行t检验。方法在理论上阐述SQFM 3个指标Sm、Pm和α间的关联性,在洗脱程序EP1条件下用HPLC测定12批朱砂安神丸（ZSASPs）在228、286和326 nm指纹图谱,分别以均值法整合三波长下定量指纹图谱的鉴定结果;11个月后在显著变动的洗脱程序EP2条件下同法试验和评价指纹图谱。对2次获得指纹图谱群的评价结果进行误差对比和t检验,并讨论质量鉴定等级和宏定量相似度变化。结果以小檗碱为参照物峰,EP1确定53（228 nm）、50（286 nm）和52（326 nm）个共有指纹峰,EP2确定50（228 nm）、40（286 nm）和35（326 nm）个共有指纹峰。经SQFM评价后的三波长指纹图谱结果按照均值法整合后对S4、S6~S8、S10~S12等7批样品鉴定结果一致,对余下5批样品鉴定结果波动仅1级,排除S7和S8,EP2下各样品的定性相似度平均降低0.03,定量相似度误差基本在±5%之内,对2次获得鉴定结果进行T检验证明无显著性差异。对EP1和EP2三波长HPLC-FPs鉴定数据取平均,最终鉴定S1~S4和S9质量极好（1级）,S5、S6、S10和S12质量很好（2级）,S11质量好（3级）,S7和S8质量劣（8级）。结论在有效期内SQFM对同一总体样品以定量指纹图谱进行评价时,色谱条件的显著变化不影响鉴定结果,SQFM对中成药进行质量评判时具有包容性和耐用性。

朱砂安神丸定量指纹图谱可靠度研究

目的建立中药指纹谱不确定度和可靠度评价方法并应用于朱砂安神丸(朱砂、黄连、地黄、当归和甘草)HPLC指纹谱评价。方法采用RP-HPLC法,建立了指纹图谱并用系统指纹定量法综合评价12批样品的不确定度和可靠度。结果确定55个共有峰,朱砂安神丸的宏定性宏定量可靠度均大于0.97,其余10批样品的宏定性宏定量可靠度均大于0.96。结论所建立不确定度和可靠度评价方法能准确反映朱砂安神丸指纹谱变动性以及定性和定量信息的可靠程度。

基于柱效指数监测的双波长定量比率指纹图谱评价朱砂安神丸

目的建立色谱指纹图谱柱效指数模型,用以检测定量指纹图谱的变化。方法用高效液相色谱二极管阵列检测器同时测定12批朱砂安神丸(ZSASP)在203 nm和286 nm指纹谱(NFP)和比率指纹图谱(ROFP),分别以均值法整合同波长下指纹图谱,最后进行双波长指纹图谱的二次均值整合,计算双波长指纹图谱柱效指数并进行比较。结果以小檗碱(BBR)为参照物峰,确定57(203 nm)和50(286 nm)个共有指纹峰,建立了双波长ZSASP-HPLC指纹图谱和比率指纹图谱。首先将同波长下的NFP和ROFP进行均值整合,之后进行双波长二次均值整合鉴定出S1、S4、S5、S6、S9和S10质量极好(1级),S2、S3、S11和S12质量很好(2级),S7和S8质量次(7级)。在203 nm,S4、S5、S6、S9柱效指数较高,而在286 nm下四者柱效指数较低造成两者差值很大,S8呈现上述反变化过程造成较大差异值。结论色谱指纹图谱柱效指数能监测中药定量指纹图谱的柱效关联分离度后的变化情况,因此柱效指数标志着信号均化性和分离度均化性以及峰宽变动情况。

朱砂安神丸治疗血液透析睡眠障碍患者临床观察

目的:观察朱砂安神丸治疗维持性血液透析(MHD)患者睡眠障碍临床疗效。方法:将纳入病例的40例MHD睡眠障碍患者按自评睡眠障碍量表分级分为轻度失眠组和中重度失眠组,均予以朱砂安神丸治疗,疗程均为15 d。对两组治疗前后临床症状评分进行比较。结果:轻度失眠组治疗后临床症状评分方面明显优于中重度失眠组(P<0.01)。结论:朱砂安神丸能明显改善轻度失眠MHD患者的临床症状,对中重度失眠MHD患者效果欠佳。

朱砂安神丸拮抗大鼠条件性恐惧及其睡眠障碍的作用

目的探究朱砂安神丸拮抗大鼠条件性恐惧及其睡眠障碍的作用。方法通过条件性恐惧实验监测系统观察各组实验动物的僵直反应时间,考察朱砂安神丸对条件性恐惧记忆习得、条件性恐惧记忆消退,以及在此过程中觉醒-睡眠时间及睡眠时相变化的影响。结果条件性恐惧记忆习得测试结果显示,在第1~5个周期,模型组僵直反应时间比空白组明显增加(P<0.01),给药组僵直反应时间较模型组无明显差异;脑电描记结果显示,在第1~2个周期,与模型组相比,给药组Wake时间缩短,百分比降低(P<0.05);第1~3个周期睡眠总时间延长,百分比增加(P<0.05);REMS时间延长(P<0.05);NREM时间差异无统计学意义;REMS与NREM的睡眠时间百分比无明显变化。条件性恐惧记忆消退测试结果显示,与模型组相比,给药组在第4、5天僵直反应时间减少(P<0.05);脑电描记结果显示,与模型组相比,给药组在第4、5天Wake时间缩短,百分比降低(P<0.05);睡眠总时间延长,百分比增加(P<0.05);NREM时间增加(P<0.05)。第4天REM时间增加(P<0.05);REMS与NREM的睡眠时间百分比无明显变化。结论朱砂安神丸能够促进条件性恐惧消退,并能拮抗由条件性恐惧引起的睡眠障碍。

朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠海马突触可塑性的影响

目的探讨朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆的影响及作用机制。方法将90只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、给药组,每组30只;给药组大鼠灌胃给予朱砂安神丸混悬液(给药体积为每100 g大鼠体质量0.9 m L),空白组、模型组大鼠给予等量的双蒸水,各组大鼠均连续干预7 d。末次给药后复制条件性恐惧模型。通过条件性恐惧实验监测系统观察各组大鼠的僵直反应时间,考察朱砂安神丸对恐惧记忆的影响;通过电生理实验和透射电镜技术,考察朱砂安神丸对海马功能结构可塑性的影响。结果与模型组比较,给药组(朱砂安神丸)能有效促进条件性恐惧大鼠恐惧记忆消退,恐惧记忆习得阶段及消退阶段僵直反应时间明显减少,运动时间、运动距离明显增加,诱发海马部位LTP其PS幅值明显减少(P<0.05,P<0.01);海马神经元突触数目较多,突触各部分结构完好、界限清晰,海马突触活性区长度及PSD厚度明显增大,突触间隙宽度明显减小(P<0.05,P<0.01);海马神经元细胞各结构完整清晰,细胞核大,细胞浆内细胞器较多、形态较好。结论朱砂安神丸具有促进恐惧记忆消退的作用,其作用机制与保护海马神经元、调节海马突触结构和功能可塑性有关。

朱砂安神丸的质量标准研究

目的:建立朱砂安神丸的质量标准。方法:采用薄层色谱法。结果:薄层色谱斑点清晰,空白无干扰。结论:方法简便、准确、重现性好,可有效控制该制剂的质量。

补益类中成药中重金属及有害元素的风险评估

目的对3种含朱砂原粉的补益类中成药(天王补心丸、朱砂安神丸、补肾益脑胶囊)中5种可溶性重金属及有害元素进行含量测定及风险评估。方法采用仿生提取-ICP-MS法测定3种补益类中成药中铅(Pb)、砷(As)、汞(Hg)、镉(Cd)和铜(Cu)的含量,并结合《中药中外源性有害残留物安全风险评估技术指导原则》,分别采用危害指数法(HI)和暴露限值法(MOE)对其进行风险评估。结果天王补心丸和补肾益脑胶囊中各重金属及有害元素的HI值均小于1,MOE值均大于1,说明两种中成药的健康风险较低,但10批朱砂安神丸中,有7批样品汞的HI值大于1,有1批样品Pb元素的MOE值小于1,提示存在健康风险。结论补益类中成药中由朱砂原粉引入的安全风险需要进行长期科学评估,对含朱砂药品的说明书须进行规范化要求。

金胺O染色物在中成药中的检测方法研究

目的：建立中成药中金胺O染色物的检测方法，对可能存在的化工染料金胺O进行筛查，并建立阳性样品中的含量测定方法。方法：采用HPLC法对中成药中的金胺O进行筛查，并采用HPLC-MS/MS二级质谱对阳性样品进行确认。质谱采用电喷雾正离子扫描（ESI＋），二级质谱全扫描模式（product ion mode），母离子m/z 268.1，子离子扫描范围m/z 20～300。在此基础上，采用高效液相色谱法对阳性样品中的金胺O进行含量测定。色谱条件：采用Phenomenex Gemini C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈-0.05 mol·L^-1醋酸铵水溶液（冰醋酸调pH 4.5）（30：70）为流动相，流速1 mL·min^-1，检测波长432 nm。结果：采用HPLC法对94批次中成药进行筛查，并采用HPLC-MS/MS对可疑样品进行确认;有4批样品可检出金胺O;金胺O进样在0.00202～2.02 μg的范围内有良好的线性关系。阳性样品元胡止痛片、朱砂安神丸中金胺O的平均回收率（n=9）分别为101.6%（低、中、高3个浓度回收率分别为101.1%、101.2%和102.6%）和98.4%（低、中、高3个浓度回收率分别为99.7%、95.6%和99.9%）。4批阳性样品（2批元胡止痛片样品和2批朱砂安神丸样品），其含量方别为2.7 μg·片^-1（糖衣片）、1.7 μg·片^-1（糖衣片）、100.8 μg·g-1（水蜜丸）和252.6 μg·丸^-1（大蜜丸）。结论：本方法准确可靠，可作为元胡止痛片、朱砂安神丸中金胺O染色物的检测方法。

朱砂安神丸、朱砂、硫化汞、氯化汞、甲基汞对小鼠肾转运体基因表达的影响

目的:探讨朱砂安神丸、朱砂、硫化汞(Hg S)、氯化汞(Hg Cl2)和甲基汞(Me Hg)对小鼠肾转运体基因表达的影响。方法:将健康雄性小鼠分别ig等量生理盐水、朱砂安神丸1.8 g·kg-1(含汞0.17 g·kg-1)、朱砂0.2 g·kg-1(含汞0.17 g·kg-1)、高剂量朱砂2 g·kg-1(含汞1.7 g·kg-1)、Hg S 0.2 g·kg-1(含汞0.17 g·kg-1)、Hg Cl20.032 g·kg-1(含汞0.024 g·kg-1)、Me Hg 0.026 g·kg-1(含汞0.024 g·kg-1),每天1次,连续30 d,记录小鼠体重变化。30 d后处死取肾脏,双道原子荧光光度法检测小鼠肾组织汞蓄积量,RT-PCR方法检测小鼠肾组织有机阴离子转运体基因(Oat1,Oat3,Oat2)、多药耐药相关蛋白基因(Mrp2,Mrp4)、尿酸转运体基因(Urat1)的表达。结果:与正常组相比,Hg Cl2组和Me Hg组小鼠肾汞蓄积量显著升高(P<0.05),其余各组肾汞蓄积量与正常组无显著差异;Hg Cl2组和Me Hg组Oat1,Oat2表达显著降低(P<0.05);Me Hg组Mrp2基因的表达显著升高(P<0.05);Hg Cl2组和Me Hg组Mrp4基因表达显著升高(P<0.05);Me Hg组Urat1基因表达显著降低(P<0.05)。结论:Hg Cl2组和Me Hg组小鼠肾汞蓄积量、肾转运体基因表达与正常组有显著差异,其余各组各项检测指标与正常组小鼠相比无显著差异。与Hg Cl2和Me Hg相比,朱砂及其复方对小鼠造成的肾毒性相对较低。

朱砂安神丸肝肾解毒物质基础与作用机制研究

目的:采用网络药理学的方法探讨朱砂安神丸肝肾解毒物质基础与作用机制。方法:通过TCMSP等数据库,结合口服生物利用度(OB)和类药性(DL)值,筛选出黄连、地黄、当归、甘草的化学成分,并使用PubChem数据库进行靶点预测,通过文献检索获取朱砂肝肾毒性的靶点;构建蛋白互作网络(PPI网络),寻找与朱砂靶点有直接相互作用的靶点;最后进行GO及KEGG通路分析和成分-靶点-通路网络分析。结果:最终得到成分122个,朱砂靶点35个,中药靶点288个,其中与朱砂有相互作用的靶点49个,通路分析结果中经文献验证具有解毒作用的通路共5条。结论:网络分析结果表明,朱砂安神丸中对肝肾毒性有解毒作用的主要为黄连和甘草,解毒成分有槲皮素、阿魏酸、甘草酸、甘草次酸、甘草苷等。

朱砂安神丸对大鼠VLPO脑区内单胺类递质的影响

目的:探讨朱砂安神丸的安神助眠作用机理,实时评价朱砂安神丸引起的单胺神经递质变化效应,及其对睡眠的影响。方法:采用微透析和高效液相色谱-电化学检测器(HPLC-ECD)联用方法测定了大鼠下丘脑腹外侧视前区(VLPO)中5-HT,DA,NE的24 h内的变化趋势。将探针插入大鼠右侧下丘脑腹外侧视前区(VLPO),大鼠在自由活动的清醒条件下,进行微透析操作,每隔2 h取样一次,24 h内连续取样。联合高效液相电化学HPLC-ECD进行样本分析,对VLPO脑区内的5-HT,DA,NE进行含量测定。结果:检测方法的线性范围为3. 125-50 pg﹒m L^(-1),日内和日间精密度均﹤3. 6,加标回收率为88. 8%-103. 8%,该方法适合于清醒动物脑内单胺类神经递质变化的测量分析。朱砂安神丸组NE,DA和5-HT在各时段均低于空白组。其中在7∶00-21∶00之间NE和5-HT含量显著低于空白组,P <0. 05有显著意义。DA在各时间段含量虽然给药组低于空白组,但变化不显著。除7∶00和17∶00两个时间段外,均无统计学意义。结论:朱砂安神丸抑制VLPO脑区5-HT和NE单胺类神经递质的含量,从而起到了安神助眠的作用。