基于大肠主津理论下助阳通便膏对便秘模型小鼠结肠组织中MUC2、AQP3的影响

目的通过观察助阳通便膏对便秘模型小鼠结肠黏膜蛋白2(MUC2)、水通道蛋白3(AQP3)的影响,探讨助阳通便膏改善功能性便秘的作用机制。方法将120只雄性巴比西小鼠随机分成5组,每组24只。即正常组、模型组、助阳通便汤组、助阳通便膏组、麻仁软胶囊组。除正常组外,其余各组造模便秘小鼠模型,采用复方地芬诺酯灌胃的方法造模。造模成功后各组分别给予相应的药物,连续灌胃给药14 d后取材,应用免疫组化、Wester Blot的方法观察各组小鼠结肠黏膜蛋白2(MUC2)和水通道蛋白3(AQP3)的含量。结果通过免疫组化的方法发现,与模型组比较,各组MUC2、AQP3平均光密度值均有不同程度增高,且助阳通便膏组与汤剂组比较MUC2平均光密度值差异有统计学意义(P<0.05)。通过Wester Blot的方法发现,与模型组比较,各组MUC2、AQP3蛋白相对表达水平灰度值均有不同程度增高。且AQP3助阳通便膏剂组与汤剂组比较(P<0.05)。结论助阳通便膏可提高MUC2、AQP3含量,改善便秘。助阳通便膏剂增加便秘小鼠结肠AQP3蛋白表达水平的作用及增加便秘小鼠结肠MUC2阳性细胞数量的作用明显优于助阳通便汤。

基于大肠主津理论助阳通便膏对便秘模型小鼠结肠组织VIP-CAMP-PKA-AQP3通路的影响

目的观察助阳通便膏对便秘模型小鼠结肠组织VIP-CAMP-PKA-AQP3信号通路的影响。方法将作为实验对象的96只雄性BALB/C小鼠随机分成4组,即正常对照组、模型对照组、助阳通便膏组以及麻仁软胶囊组,24只/组。造模予以复方地芬诺酯片混悬液灌胃的方法进行。在模型建立后,每组小鼠对应给予蒸馏水、助阳通便膏及麻仁软胶囊连续行2周灌胃,结束后取材,应用不同方法——RT-PCR法、Wester Blot法及免疫荧光双标法,观测各组小鼠的结肠组织中血管活性肠肽(VIP)、环磷酸腺苷(CAMP)、蛋白激酶(PKA)和水通道蛋白3(AQP3)的表达。结果通过RT-PCR的方法发现,助阳通便膏组VIP、AQP3mRNA表达水平显著高于模型对照组(P<0.05)。通过Wester Blot的方法发现,助阳通便膏组VIP、CAMP、PKA、AQP3蛋白相对表达水平灰度值均显著高于模型对照组(P<0.05),且助阳通便膏组AQP3、CAMP蛋白相对表达水平灰度值较麻仁软胶囊组显著增高(P<0.05),与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。通过免疫荧光双标的方法发现,助阳通便膏组VIP-AQP3、CAMP-PKA免疫荧光双标表达双阳性细胞数均显著高于模型对照组(P<0.05)。且助阳通便膏组VIP-AQP3双阳性细胞数与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论助阳通便膏治疗慢传输型便秘的作用机制可能是通过提高结肠组织中VIP-CAMP-PKA-AQP3通路表达水平来实现的。