助阳通便膏影响功能性便秘小鼠AQP3表达的实验研究

目的 检测功能性便秘小鼠使用助阳通便膏治疗前后,结肠组织中水通道蛋白3(aquaporin 3,AQP3)表达的变化,探究助阳通便膏缓解功能性便秘与结肠组织中AQP3的关系。设计梯度浓度的助阳通便膏,为临床治疗浓度提供依据。方法 100只昆明小鼠,随机选取16只设为空白组,余下小鼠制备便秘模型(盐酸洛哌丁胺制备)。便秘小鼠随机分为模型组,助阳通便膏高、中、低浓度组,麻仁软胶囊对照组。各组应用相应药物连续灌胃14 d后观察疗效,应用免疫组化法观察各组小鼠结肠组织AQP3表达。结果 通过免疫组化染色法,与模型组相比,各组AQP3均有减少,差异具有统计学意义(P<0.05),其中助阳通便膏中浓度组小鼠粪便重量、粪便含水比、首次排黑便时间以及结肠组织中AQP3表达与空白组之间差异均无统计学意义(P>0.05),且与麻仁软胶囊对照组之间差异均不具有统计学意义(P>0.05)。结论 助阳通便膏可能是通过减少功能性便秘小鼠结肠组织中AQP3的异常表达,改善便秘。在设计的不同浓度组别中,助阳通便膏中浓度组效果最优。

基于大肠主津理论助阳通便膏对便秘模型小鼠结肠组织VIP-CAMP-PKA-AQP3通路的影响

目的观察助阳通便膏对便秘模型小鼠结肠组织VIP-CAMP-PKA-AQP3信号通路的影响。方法将作为实验对象的96只雄性BALB/C小鼠随机分成4组,即正常对照组、模型对照组、助阳通便膏组以及麻仁软胶囊组,24只/组。造模予以复方地芬诺酯片混悬液灌胃的方法进行。在模型建立后,每组小鼠对应给予蒸馏水、助阳通便膏及麻仁软胶囊连续行2周灌胃,结束后取材,应用不同方法——RT-PCR法、Wester Blot法及免疫荧光双标法,观测各组小鼠的结肠组织中血管活性肠肽(VIP)、环磷酸腺苷(CAMP)、蛋白激酶(PKA)和水通道蛋白3(AQP3)的表达。结果通过RT-PCR的方法发现,助阳通便膏组VIP、AQP3mRNA表达水平显著高于模型对照组(P<0.05)。通过Wester Blot的方法发现,助阳通便膏组VIP、CAMP、PKA、AQP3蛋白相对表达水平灰度值均显著高于模型对照组(P<0.05),且助阳通便膏组AQP3、CAMP蛋白相对表达水平灰度值较麻仁软胶囊组显著增高(P<0.05),与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。通过免疫荧光双标的方法发现,助阳通便膏组VIP-AQP3、CAMP-PKA免疫荧光双标表达双阳性细胞数均显著高于模型对照组(P<0.05)。且助阳通便膏组VIP-AQP3双阳性细胞数与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论助阳通便膏治疗慢传输型便秘的作用机制可能是通过提高结肠组织中VIP-CAMP-PKA-AQP3通路表达水平来实现的。

基于功能性便秘小鼠结肠AQP3表达探讨助阳通便膏治疗机制

目的 通过予以慢性便秘模型小鼠助阳通便膏治疗,研究助阳通便膏对功能性便秘模型小鼠结肠水通道蛋白3(AQP3)的影响。同时探讨助阳通便膏对功能性便秘的作用机制。方法 将60只小鼠随机分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组及高剂量组,每组12只。除正常组小鼠外,其余小鼠均予以盐酸洛哌丁胺灌胃建立模型,并分应用相应药物干预,观察治疗作用。所有小鼠均采用免疫组化和RT-PCR的方法检测小鼠结肠AQP3的分布和表达情况。结果 与模型组比较,低、中、高剂量组首次排黑便时间明显缩短,24 h排便重量、粪便含水量均明显增加(P<0.05),AQP3含量及表达均减少(P<0.05);高剂量组较中剂量组AQP3含量及表达略降低,但无明显差异(P>0.05)。结论 助阳通便膏能有效改善便秘症状。助阳通便膏可以降低AQP3表达从而减少肠道水分吸收,可能是其治疗功能性便秘的作用机制之一,但高剂量应用效果未明显增加。