资癸益冲方对卵巢储备功能下降大鼠卵巢组织铁代谢及凋亡的影响

目的 探讨资癸益冲方对卵巢储备功能下降大鼠卵巢组织铁代谢调节蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法 将动情周期正常的大鼠随机分为正常组、模型组、资癸益冲方组和辅酶Q10组,每组10只,采用腹腔注射环磷酰胺(CTX)法建立卵巢储备功能下降大鼠模型,各组灌胃给予相应药物。ELISA法检测血清性激素水平,HE染色观察卵巢组织各级卵泡数量,普鲁士蓝染色观察卵巢组织铁沉积,TUNEL法检测卵巢组织细胞凋亡,Western blot法检测卵巢组织铁代谢调节蛋白转铁蛋白受体1(TFR1)、二价金属离子转运蛋白1(DMT1)及膜铁转运蛋白1(FPN1)的表达。结果 资癸益冲方可改善卵巢储备功能下降大鼠血清性激素水平,促进卵巢组织各级卵泡生长,减少卵泡闭锁,减轻卵巢组织铁沉积及细胞凋亡程度,降低卵巢组织铁代谢调节蛋白TFR1、DMT1蛋白表达,增强FPN1蛋白表达(P<0.05)。结论 资癸益冲方可通过影响卵巢储备功能下降大鼠卵巢组织铁代谢调节蛋白的表达,减轻铁沉积和细胞凋亡,进而改善卵巢储备功能。

基于线粒体能量代谢途径探讨资癸益冲方改善早发性卵巢功能不全小鼠卵巢功能的作用机制

目的:探讨资癸益冲方通过线粒体能量代谢途径改善早发性卵巢功能不全(POI)模型小鼠卵巢功能的作用与机制。方法:80只SPF级雌性C57BL/6N小鼠随机分为正常组、模型组、西药(辅酶Q10)组和中药(资癸益冲方)组,每组20只。除正常组外,腹腔注射环磷酰胺(CTX)建立POI模型小鼠,造模成功后,各组灌胃给予相应药物。HE染色观察卵巢组织形态学,放射免疫法检测血清雌二醇(E_2)、卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)水平,透射电镜观察卵巢颗粒细胞线粒体结构,比色法测定颗粒细胞三磷酸腺苷(ATP)含量,免疫组化法和Western Blot法检测与线粒体能量相关的过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF1)和线粒体转录因子A(TFAM)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠卵巢各级卵泡颗粒细胞层数减少,闭锁卵泡增多,E_2水平下降(P<0.05),FSH、LH水平升高(P<0.01),颗粒细胞线粒体数量减少,出现嵴断裂及空泡化改变,外膜不完整,ATP含量下降(P<0.05),PGC-1α、NRF1、TFAM蛋白表达下降(P<0.01);与模型组比较,中药组小鼠卵巢各级卵泡颗粒细胞层数增多,闭锁卵泡减少,E_2水平升高(P<0.01),FSH、LH水平下降(P<0.01),颗粒细胞线粒体结构改善,ATP含量升高(P<0.05),PGC-1α、NRF1、TFAM蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论:资癸益冲方可以改善线粒体能量代谢减少卵巢颗粒细胞的凋亡保护POI模型小鼠卵巢功能,其机制可能与激活PGC-1α/NRF1/TFAM信号通路有关。

资癸益冲方对卵巢储备功能下降模型大鼠卵巢氧化损伤的影响及其作用机制

目的探讨资癸益冲方对卵巢储备功能下降(DOR)模型大鼠卵巢氧化损伤的影响及其作用机制。方法采用环磷酰胺腹腔注射诱导DOR大鼠模型,将诱导造模成功的大鼠随机分为模型组、资癸益冲方高剂量组(28 g/kg)、资癸益冲方低剂量组(7 g/kg),另选10只动情周期规律的大鼠作为正常组。各组分别给予相应处理因素28 d后,选动情前期处死大鼠,检测血清雌二醇(E2)、抗苗勒管激素(AMH)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平;HE染色观察卵巢组织病理形态学改变;检测卵巢组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)含量;免疫组化和Western Blot法检测肿瘤抑制因子p53、周期蛋白依赖激酶抑制因子p21和核因子相关因子-2(Nrf2)的蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血清E2、AMH水平降低,FSH、LH水平升高(均P<0.05);卵巢组织中各级卵泡数减少,闭锁卵泡增多,颗粒细胞层数减少;卵巢组织SOD、GSH-Px、CAT活力降低,MDA含量升高(均P<0.05);p53、p21、Nrf2蛋白表达增强(均P<0.05)。与模型组比较,资癸益冲方高、低剂量组大鼠血清E2、AMH水平升高,FSH、LH水平降低(均P<0.05);卵巢组织中闭锁卵泡减少,颗粒细胞层数增多;卵巢组织SOD、GSH-Px、CAT活力升高,MDA含量降低(均P<0.05);p53、p21和Nrf2蛋白表达下降(均P<0.05)。结论资癸益冲方能改善DOR大鼠的卵巢储备功能,减轻卵巢氧化损伤,降低卵巢组织中p53、p21和Nrf2的蛋白表达。