锌指蛋白281抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转化和细胞外基质合成

目的探讨锌指蛋白281(ZNF281)在高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞(RTECs)上皮间质转化(EMT)和细胞外基质(ECM)合成中的作用及机制。方法使用HG诱导RTECs以构建糖尿病肾病模型,分为Control组、HG组和Mannitol组,使用CCK-8检测细胞增殖活力。使用小干扰RNA(siRNA)在HG诱导的RTECs中敲低ZNF281的表达水平,分为Control组、HG组、HG+ZNF281 siRNA组和HG+ZNF281 vector组。使用腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)激动剂阿卡地新(AICAR)活化AMPK,分为Control组、HG组、HG+AICAR组和HG+二甲基亚砜组。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测ZNF281、EMT和ECM合成相关指标表达水平。结果与Control组相比,HG组ZNF281、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)和Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)的蛋白和mRNA表达水平升高,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平降低;与HG组相比,HG+ZNF281 siRNA组和HG+AICAR组的EMT和ECM合成相关指标的蛋白和mRNA表达水平发生明显变化,同时HG+AICAR组ZNF281的蛋白和mRNA表达水平较HG组降低;在使用AICAR和转染ZNF281过表达质粒共处理的细胞中,AICAR+ZNF281组vimentin、α-SMA、FN、ColⅠ的表达水平较空载组升高,E-cadherin表达水平降低。结论AMPK通过负向调控ZNF281的表达水平进而抑制HG诱导的RTECs中EMT和ECM合成。

锌指蛋白281对肝癌细胞增殖的影响

目的:研究锌指蛋白281(zinc finger protein 281,ZNF281)对肝癌细胞增殖的作用。方法:用realtime PCR检测80例健康人群及206例肝癌患者外周血单个核细胞中ZNF281的mRNA表达水平,并分析肝癌患者单个核细胞中ZNF281的表达水平与多个临床病理参数的相关性。采用real-time PCR及Western blot实验分别检测ZNF281在肝癌细胞和永生化肝细胞中的mRNA及蛋白表达水平。利用小干扰RNA靶向沉默Huh-7细胞和SKHep-1细胞中ZNF281的表达,然后用MTS法检测肝癌细胞活力的变化;EdU标记实验检测肝癌细胞增殖能力的变化;平板集落形成实验检测肝癌细胞集落形成能力的变化;软琼脂集落形成实验检测肝癌细胞锚定非依赖生长能力的变化。结果:与正常健康人群相比,肝癌患者的外周血单个核细胞中ZNF281的mRNA表达水平明显增高,且其增高水平与肿瘤的大小、分期以及血管侵袭性存在正相关。肝癌细胞中ZNF281表达水平高于永生化肝细胞(P<0.05)。沉默ZNF281可以抑制肝癌细胞的活力,抑制肝癌细胞增殖,DNA合成降低,集落数量减少,锚定非依赖性生长能力减弱(P<0.05)。结论:ZNF281可促进肝癌细胞的增殖。

ZNF281对结直肠癌细胞侵袭与迁移的影响

目的研究锌指蛋白281(zinc finger protein 281,ZNF281)对结直肠癌细胞侵袭与迁移的影响。方法选取本院2014年6月至2016年6月收治的50例结直肠癌患者的癌灶标本及20例癌旁正常黏膜标本,比较不同标本中ZNF281的表达情况,利用Transwell小室观察ZNF281对结直肠癌细胞侵袭与迁移能力的影响,并分析ZNF281与临床病理指标的关系。结果 ZNF281在结直肠癌标本中的阳性表达率为84.00%,在癌旁正常黏膜中阳性表达率为20.00%,且几乎无强阳性表达,差异具有显著性(P<0.05)。Transwell小室侵袭检测结果提示,ZNF281高表达组穿膜细胞数明显高于ZNF281低表达组和ZNF281阴性表达组(P<0.05);Transwell小室迁移检测结果提示,ZNF281高表达组穿膜细胞数明显高于ZNF281低表达组和ZNF281阴性表达组(P<0.05)。ZNF281表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤部位无相关性(P>0.05),但其在结直肠癌不同分化程度、浸润深度、淋巴结转移情况及Duke's分期方面均具有显著差异(P<0.05)。结论 ZNF281在结直肠癌组织中表达水平升高,且不同病理分化程度组织中ZNF281表达有显著差异。ZNF281可能参与结直肠癌的发生,同时可影响癌细胞的迁移能力,检测ZNF281表达对结直肠癌的诊断、治疗及预后具有一定临床意义。

肝癌患者锌指蛋白281的表达水平及其对肝癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨肝癌患者锌指蛋白281(ZNF 281)的表达水平,并分析其对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法收集河南大学第一附属医院2014年1月至2017年1月经手术切除后病理切片证实的肝癌标本82例及癌旁正常组织标本50例,采用免疫组化法检测肝癌和癌旁正常肝组织标本中ZNF 281蛋白表达情况,并分析ZNF 281阳性表达与临床病理参数[性别、年龄、肿瘤直径、国际恶性肿瘤分期(TNM分期)、淋巴结转移、甲胎蛋白(AFP)]的关系;采用荧光定量PCR检测上述组织中ZNF 281 mRNA的表达情况;采用沉默RNA(siRNA)ZNF 281 转染人肝癌细胞HepG2,根据转染情况分为空白对照组(正常培养的HepG2)、阴性对照组[转染ZNF 281 基因非特异性沉默RNA(siRNA)干扰组]、siRNA ZNF 281组[转染ZNF 281基因特异性siRNA干扰组],并用荧光定量PCR检测转染后HepG2细胞中ZNF 281 mRNA的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染后细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果肝癌组织中ZNF 281 mRNA的相对表达量高于正常肝组织( P <0.05);肝癌组织ZNF 281蛋白阳性表达率为74.39%,高于癌旁正常肝组织的18.0%( P <0.05),且ZNF 281蛋白阳性表达患者肿瘤直径>5 cm,TNM 为Ⅲ~Ⅳ期,淋巴结转移比例分别为65.57%、73.77%、45.90%,高于ZNF 281蛋白表达阴性的38.10%、38.10%、14.29%( P <0.05)。siRNA ZNF 281组HepG2细胞中ZNF 281 mRAN表达量低于空白对照组和阴性对照组( P <0.05);siRNA ZNF 281组细胞生长抑制率和细胞凋亡率均高于空白对照组和阴性对照组( P <0.05);空白对照组和阴性对照组HepG2细胞中ZNF 281 mRAN表达量及细胞生长抑制率和细胞凋亡率比较,差异无统计学意义( P >0.05)。结论肝癌组织中ZNF 281 蛋白及其RNA均呈高表达;沉默ZNF 281基因可抑制人肝癌细胞HepG2增殖,诱导其凋亡。

ZNF281在食管癌组织中的表达及临床意义

目的明确锌指蛋白281(ZNF281)在食管癌组织中的表达情况并探讨食管癌患者的病理分化、分期对其表达量的影响。方法收集26例广州市番禺区中心医院及南方医科大学附属第三医院2014年4月25日至2017年5月2日26例经病理确诊的食管癌患者的癌组织及癌旁正常组织,采用realtime-PCR方法检测组织中ZNF281基因的表达量,并对不同病理分化程度(高、中、低分化)及不同分期(按2017 NCCN分期)的食管癌患者瘤组织间ZNF281相对表达量的差异进行亚组分析。结果 26例食管癌患者的瘤组织及癌旁正常组织中,ZNF281的表达在食管癌组织中相对癌旁正常组织显著上调,其差异有统计学意义(P<0.05)。同时,不同病理分化程度(高、中、低分化)对食管癌患者ZNF281相对表达量差异有显著影响,差异有统计学意义(P<0.05),而不同分期(Ⅱ、Ⅲ期)对食管癌患者ZNF281的相对表达量无显著影响,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ZNF281在食管癌瘤组织中的表达显著上调,可能与食管癌发生发展及调控其分化相关。

ZNF281对结直肠癌侵袭转移的影响分析

目的探讨锌指蛋白281(ZNF281)基因在结直肠癌患者中的表达情况以及对结直肠癌侵袭转移的影响。方法选择2015年4月至2016年4于本院就诊的92例结直肠癌患者为例,采用免疫组化方法检测92例患者结直肠癌组织、癌旁正常黏膜组织以及淋巴结中的ZNF281蛋白表达情况。结果免疫组化结果显示ZNF281蛋白高表达患者有74例,癌旁正常黏膜组织中高表达30例,转移淋巴结中高表达41例,癌组织以及转移淋巴结中表达程度相比于正常组织明显要高(P<0.05)。远处转移患者的结肠癌组织中ZNF281蛋白表达情况明显高于非远处转移患者(P<0.05)。结论 ZNF281蛋白表达和结直肠癌密切相关,表达越高,预示患者病情越重,尤其是出现远处转移患者,ZNF281蛋白表达明显增高。

miR-203调控锌指蛋白281表达对黑素瘤细胞增殖、迁移的影响

目的初步探究微小RNA-203(miR-203)调控锌指蛋白281(ZNF281)对黑素瘤细胞增殖、迁移的影响。方法常规培养人血管内皮细胞系ECV304、人黑素瘤细胞系A375、M14、SK-MEL-28、SK-MEL-2,实时荧光定量PCR检测各细胞系中miR-203表达情况,Western免疫印迹法检测各细胞系中ZNF281蛋白水平。A375、M14细胞分别分为5组:对照组(细胞正常培养)、miR-203模拟物对照组(加入miR-203模拟物阴性对照)、miR-203抑制剂对照组(加入miR-203抑制剂阴性对照)、miR-203模拟物组(加入miR-203模拟物)、miR-203抑制剂组(加入miR-203抑制剂)。实时荧光定量PCR检测各组A375、M14细胞中miR-203的表达,CCK8法检测各组A375、M14细胞增殖活性,Transwell实验检测各组A375、M14细胞迁移数量,Western免疫印迹法检测各组A375、M14细胞中ZNF281蛋白的表达。双荧光素酶验证miR-203与ZNF281的靶向关系。多组比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q法。结果与血管内皮细胞系ECV304相比,黑素瘤细胞系A375、M14、SK-MEL-28、SK-MEL-2中miR-203表达水平较低(均P<0.05),ZNF281蛋白水平较高(均P<0.05)。与对照组、miR-203模拟物对照组、miR-203抑制剂对照组相比,miR-203模拟物组A375、M14细胞中miR-203水平均显著升高(F=487.632、68.454,均P<0.05),细胞迁移数量均显著降低(均P<0.05),ZNF281蛋白表达均显著降低(均P<0.05);miR-203抑制剂组A375、M14细胞中miR-203表达均显著降低(均P<0.05),细胞迁移数量均显著增加(均P<0.05),A375细胞中ZNF281蛋白表达显著升高(均P<0.05),36、48、60、72 h A375细胞增殖活性显著升高(均P<0.05),24、36、48、60、72 h M14细胞增殖活性均显著升高(均P<0.05)。miR-203与ZNF281之间存在靶位点。结论上调miR-203表达可抑制黑素瘤细胞增殖、迁移,下调miR-203表达可促进黑素瘤细胞增殖、迁移,可能通过调控ZNF281的表达实现。