枣ZjWRKY22基因克隆、亚细胞定位及表达载体构建

WRKY是植物特有的锌指型转录调控因子,参与调控植物抗逆、生长发育和新陈代谢。为探索易裂品种壶瓶枣WRKY转录因子ZjWRKY22的生物学功能,同时为揭示枣WRKY响应非生物胁迫的分子机制提供理论基础,对克隆ZjWRKY22基因编码区序列进行生物信息学预测,并对枣吊、茎、叶、花、果实进行差异表达分析。结果表明,从壶瓶枣中克隆得到ZjWRKY22基因CDS序列长1068 bp,共编码335个氨基酸,分子质量约为38.9 ku,等电点为5.92,分子式为C_(1682)H_(2582)N_(472)O_(568)S_(13);该蛋白中丝氨酸最多,占18%,为亲水不稳定蛋白质,无信号肽和跨膜结构域,含有76个磷酸化位点;二级结构类型以无规则卷曲为主,该基因具有典型的WRKY结构域,三级结构预测主要由4个β-折叠组成,分别为WRKYGQK、RGYYR、RKQVER、FIVTYT;属于WRKY家族Ⅱe组。同源序列比对显示,枣与杨梅、桃、扁桃、梅的同源性分别为75.86%、74.88%、74.41%和74.88%,系统进化树表明,枣ZjWRKY22与酸枣亲缘关系最近;实时荧光定量显示,ZjWRKY22在果实中表达量最高,具有组织特异性。进一步构建融合表达载体pCAMBIA1300-GFP-ZjWRKY22,通过农杆菌瞬时注射本氏烟草进行亚细胞定位,结果确定了ZjWRKY22蛋白位于细胞核中,同时成功构建了植物超表达载体pCAMBIA-1300-ZjWRKY22。