Ywhab通过靶向Hsp90aa1抑制小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞生长

目的:研究Ywhab在小鼠B细胞淋巴瘤发生发展中的作用,并探讨其可能的分子机制。方法:使用生物信息学分析Ywhab与弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的相关性。在小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞中感染逆转录病毒构建Ywhab基因过表达细胞系,并采用RT-qPCR和Western blot验证Ywhab的mRNA及蛋白(14-3-3β)水平;通过细胞计数法、CCK-8法和小鼠皮下成瘤实验检测Ywhab过表达对38B9细胞在体内外生长的影响;RT-qPCR和Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达;应用蛋白质免疫共沉淀联合蛋白质谱(CoIP-MS)筛选与14-3-3β特异性结合的蛋白并采用Western blot及分子对接分析进行验证。结果:Ywhab基因在DLBCL中低表达,其低表达预示DLBCL患者的临床预后较差。与正常小鼠骨髓B细胞相比,Ywhab在38B9细胞中低表达。Ywhab过表达能在体内外诱导38B9细胞凋亡,促进凋亡蛋白Puma、Noxa和Bax的mRNA及蛋白表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl2的mRNA及蛋白表达(P<0.05)。14-3-3β蛋白能特异性结合Hsp90aa1蛋白并抑制其表达,从而促进38B9细胞凋亡。结论:Ywhab能够显著诱导小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞凋亡,其机制可能是通过靶向抑制Hsp90aa1蛋白表达来实现的。

玉米油菜素甾醇生物合成关键酶基因ZmCYP90B1的克隆及其对逆境胁迫的响应

油菜素甾醇作为一类重要植物激素,在植物生长发育和抵御逆境胁迫等过程中发挥重要作用。CYP90B1基因编码酶是其合成途径中关键限速酶。本研究针对迄今有关玉米CYP90B1基因应答逆境胁迫特征尚未见报道现状,采用RT-PCR结合RACE技术,从玉米中克隆了油菜素甾醇生物合成关键基因Zm CYP90B1(Gen Bank登录号KY242373)。Zm CYP90B1全长2058 bp,开放阅读框为1518 bp,编码506个氨基酸。Zm CYP90B1蛋白预测分子量为57.66 k D,等电点为9.54,含有1个跨膜结构域及1个p450保守结构域。序列比对表明,Zm CYP90B1与其他物种CYP90B1蛋白高度相似,但在单双子叶植物中进化上具有明显差异。实时荧光定量PCR结果表明,非生物胁迫(干旱、高盐、低温和脱落酸)、虫害(甜菜夜蛾取食)和茉莉酸甲酯均诱导Zm CYP90B1表达,表明该基因响应多种非生物胁迫,参与植物对虫害和茉莉酸甲酯的响应。进一步构建过量表达Zm CYP90B1基因的烟草株系并检测表明该烟草株系抗旱性增强,叶片失水率下降,SPAD值增大。此外,干旱胁迫下转基因烟草超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)的活性以及游离脯氨酸(Pro)的积累量均显著高于野生型,丙二醛(MDA)和脱落酸(ABA)含量明显低于野生型。通过检测下游胁迫响应基因表达,表明Zm CYP90B1提高植物抗旱性可能不依赖ABA途径,而与其对抗氧化相关途径相关基因的转录调控有关。

Hsp90抑制剂WH-4对肝癌细胞株SK-HEP-1增殖、凋亡及耐药基因表达的影响观察

目的探讨Hsp90抑制剂WH-4对肝癌细胞SK-HEP-1增殖、凋亡及耐药基因表达的影响。方法将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A、B、C组,A组分别加入0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L WH-4,B组分别加入0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L 17-AAG,C组加入等量生理盐水,培养48 h后,采用MTT法测算各组肝癌细胞SK-HEP-1增殖抑制率,并计算IC 50。将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A1、B1、C1组,分别加入2.3μmol/L WH-4、2.6μmol/L 17-AAG及生理盐水,培养48 h后,采用BrdU法观察肝癌细胞SK-HEP-1增殖活性。将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A2、B2、C2组,分别加入2.25μmol/L WH-4、2.80μmol/L 17-AAG、生理盐水,培养48 h后,采用软琼脂平板实验检测肝癌细胞SK-HEP-1克隆形成率,流式细胞术检测肝癌细胞SK-HEP-1凋亡率,采用Western blotting法检测肝癌细胞SK-HEP-1凋亡蛋白Bcl2、Bax、Bcl-xL。将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A3、B3、C3组,分别加入2.30μmol/L WH-4、2.65μmol/L 17-AAG及生理盐水。培养48 h后,采用qPCR法检测耐药基因ABCB1、ABCG2。结果WH-4对肝癌细胞SK-HEP-1有抑制作用,且呈浓度依赖性(R 2=0.647(48h),P均<0.05),IC 50为(2.35±0.25)μmol/L。与C1组相比,A1、B1组SK-HEP-1绿色荧光减弱。A2、B2组克隆形成率相比,P<0.05。与B2组比较,A2组细胞凋亡率升高(t=0.342,P<0.05),Bax蛋白相对表达量升高,B淋巴细胞瘤-2基因及Bcl-xL蛋白相对表达量降低。A3组ABCB1、ABCG2基因相对表达量低于B3组(t分别为-8.88、-13.00,P均<0.05)。结论Hsp90抑制剂WH-4对肝癌细胞SK-HEP-1具有增殖抑制、诱导凋亡作用,同时可降低耐药基因的表达。